Определение резус-фактора плода по крови беременной женщины
Генетическое исследование, которое позволяет определить резус-фактор плода по крови резус-отрицательной беременной женщины методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
OMIM: MIMID *111680
Локализация: 1p36.11
Ген RHD плода по анализу материнской крови, неинвазивное типирование гена RHD плода.
Синонимы английские
RhD (Rh blood group, D antigen); Rhesus blood group, D antigen, Fetal RHD typing, Noninvasive RHD typing, Cell-free fetal DNA testing.
ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозная кровь (пробы ДНК, выделенные из плазмы крови матери).
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется.
Подробнее об исследовании
Метод позволяет идентифицировать резус-фактор плода по крови матери уже с 10-й недели беременности.
С RhD-антигеном связана проблема сенсибилизации резус-отрицательных женщин резус-положительными эритроцитами плода, что может привести в дальнейшем к тяжелой патологии – гемолитической болезни новорожденных.
Принцип метода основан на выявлении гена RhD, который отвечает за синтез антигена D и есть только у резус-положительных людей. Резус-отрицательная женщина антигена D не имеет. Если ребенок оказался резус-отрицательным и в крови матери антиген D отсутствует, то тест будет отрицательным. Если же плод окажется резус-положительным, то в крови резус-отрицательной матери будет присутствовать ген RhD – тест будет положительным.
Среди более 100 Rh-антигенов наиболее иммуногенным и потому наиболее клинически значимым является RhD-антиген, с которым связано большинство осложнений, обусловленных резус-несовместимостью или резус-конфликтом.
Резус-фактор представляет собой белок, находящийся на поверхности эритроцитов (красных кровяных телец). Около 85% людей имеют резус-фактор и, таким образом, являются резус-положительными. У остальных 15% резус-фактор отсутствует, то есть они являются резус-отрицательными.
Резус-положительный тип определяется наличием гена RhD в гомозиготном (DD) или гетерозиготном (Dd) состоянии. Резус-отрицательный тип может быть обусловлен различными изменениями в структуре генов системы Rh. В большинстве случаев это делеция гена RhD на обеих хромосомах. При этом эритроцитарный антиген D не синтезируется и проявляется резус-отрицательный фенотип.
Резус-фактор наследуется как доминантный признак, поэтому у резус-отрицательной матери (dd) при генотипе DD резус-положительного отца ребенок всегда будет ресус-положительным, а это значит, что риск резус-конфликта высок. В случае геотипа Dd резус-положительного отца возможности рождения ребенка как с положительным, так и с отрицательным резусом одинаковы. К счастью, не у каждой резус-отрицательной беременной женщины плод является резус-положительным.
Схема наследования резус-фактора представлена в таблице:
источник
Анализ крови на ген rhd
В этой статье мы расскажем о редких вариантах гена RHD и особенностях оценки риска возникновения резус-конфликта. Гены RHD и RhCE у человека работают вместе: они кодируют белки, которые формируют в мембране комплекс, образовывающий базу для антигенов D (резус-фактор), C, c, E, e. Эти белки представляют собой как бы нитки, прошивающие мембрану петлями: их небольшие фрагменты торчат из мембраны, а основная часть находится в ее толще. То есть какие-то аминокислоты белка выполняют строительную функцию – держат белок в мембране, а другие основную – формируют площадку для антигена.
Если гена RHD нет из-за делеции этого участка хромосомы, то и белка на мембране нет. В таком случается получается истинный Rh- фенотип. Однако в редких случаях ген RHD не полностью отсутствует, а несет в себе мутацию. Тогда структура соответствующего белка может нарушаться и приводить не к полному отсутствию антигена D, а к разным промежуточным состояниям. Например, мутации, приводящие к изменению в тех частях белка, которые находятся в толще мембраны, могут влиять на способность белка держаться на поверхности клетки: то есть и ген RHD на месте, и белок нормально синтезируется, однако он с трудом встраивается в мембрану и потому его может быть настолько мало на поверхностях клеток, что иммунная система человека будет их замечать, а вот биохимические методы анализ на резус-фактор – не будут. В случае такого рода мутаций в гене RDH генотип называется Weak D или DEL вместо Rh-. Также при мутациях, затрагивающих выступающие из мембраны участки, антиген D будет неполноценным, так как площадка для его формирования будет неполная или не совсем верная, что тоже может привести к ложным результатам при биохимическом анализе крови. Такой генотип носит название Partial D.
Почему все это важно? Дело в том, что чаще всего статус резус-фактора определяют биохимически по анализу крови. Это значит, что в лаборатории есть антитела к антигену D, эти антитела капают на специально подготовленный препарат крови и смотрят, насколько сильно будет светиться специфическая метка. Если она светится слабо или сигнала нет совсем – это означает, что антителам не с чем было связываться, то есть антигена D на поверхности клеток в анализируемой крови не было. Для обычной ситуации – присутствие или отсутствие гена RHD – этот способ прекрасно работает, но он не позволяет отличить Rh+ гомо- и гетерозигот, поэтому его используют как скрининговый – простой и недорогой метод для первичного обследования. Однако в случае частичной делеции RHD или различных мутаций он срабатывает неправильно. При проверке работы четырех разных наборов реагентов для биохимического анализа крови на резус на 500 образцах для 2% образцов были получены неоднозначные результаты. После генетического тестирования оказалось, что именно эти образцы имели генотип Partial D или Weak D.
Примерные оценки вероятности развития резус-конфликта при разных сочетаниях генотипов родителей:
Опасность неправильного определения резус-статуса в сложных ситуациях заключается в том, что пара не будет подозревать о рисках, пока не возникнет опасная для жизни и здоровья малыша ситуация. Важно понимать, что главной проблемой при резус-конфликте является то, что организм матери не знаком с антигеном D как с нормальным, «своим», поэтому клетки, отмеченные этим антигеном, начинают отторгаться. При этом иммунная система может познакомиться с этим антигеном как со «своим» даже если этого антигена на поверхности клеток совсем немного, настолько немного, что биохимические методы ставят статус Rh-. В таком случае тревога о возможности развития резус-конфликта у женщины с таким неверным биохимическим анализом будет ложной. С другой стороны, если такой неверный результат будет выдан будущему отцу, то это может привести к развитию резус-конфликта, так как несмотря на биохимически отрицательный резус, ген RHD у отца присутствует и антиген D на поверхности клеток тоже есть. Таким образом, наиболее точный результат получается в результате генетического анализа гена RHD и гена RHCE, методом MLPA. Он позволит идентифицировать наличие/отсутствие гена RHD у будущих родителей, идентифицировать особые состояния этого гена, выявить гомо/гетерозиготность каждого партнера по этим показателям и более эффективно оценить не только вероятность развития резус-конфликта, но и целесообразность различных превентивных или терапевтических мер по устранению этого осложнения при беременности.
Важно помнить, что эти необычные ситуации все же редкость, и в большинстве случаев простой биохимический анализ крови дает верный результат. То есть после него резус-положительные женщины чаще всего спокойно беременеют вне зависимости от генотипа мужа по гену RHD, у резус-отрицательных женщин с резус-отрицательным партнером в большинстве случаев также нет проблем, а резус-отрицательные будущие мамы с резус-положительным отцом отправляются на дополнительные анализы для оценки рисков. Однако, к сожалению, вероятность несовпадения биохимического результата и истинного фенотипа, хоть и мала, но присутствует и может привести к катастрофическим для семьи результатам. Самое безопасное решение – узнать свой генотип по этим генам, который позволит совершенно точно узнать о том, есть ли повод для беспокойства.
источник
Анализ крови на ген rhd
Резус-фактором называется антиген D системы группы крови Rhesus. Статус по этому антигену очень важен при переливании крови, беременности, пересадке органов. Белок, формирующий антиген D, кодируется геном RHD. Наличие этого гена даже на одной из двух гомологичных хромосом соответствует резус-положительному (Rh+) статусу. Примерно 85% населения Европы являются носителями этого гена и, соответственно, резус-положительны. При этом около половины всех жителей Европы и России несут одну копию этого гена, а 35% — две. При делеции гена RHD в гомозиготной форме, т.е. его отсутствии на обеих гомологичных хромосомах, у человека резус-отрицательный (Rh-) статус.
При беременности резус-отрицательной женщины важно знать, какой резус-фактор у плода. Дело в том, что если в такой ситуации плод окажется Rh+, то существует вероятность развития резус-конфликта между матерью и плодом, который может привести к возникновению гемолитической болезни плода или новорожденного. Предсказать возможные варианты статуса плода по резус-фактору можно заранее, зная генотип родителей по гену RHD. Скрининговым методом определения резус-фактора является анализ крови на наличие антигена D на поверхности клеток, который позволяет оценить статус Rh+ или Rh-. Однако в случае, когда будущая мать резус-отрицательна, а отец – резус-положителен, для определения возможных вариантов (генотипов) резус-фактора у детей необходимо установить генотип отца по гену RHD. Так, если у отца ген RHD присутствует на обеих гомологичных хромосомах (т.е. отец – гомозигота), то все дети в такой супружеской паре будут резус-положительны. А если на одной из гомологичных хромосом ген RHD отсутствует (т.е. отец – гетерозигота), то в такой супружеской паре дети могут быть как резус-положительны, так и резус-отрицательны.
Также существуют мутации в гене RHD, которые приводят к особым статусам по резус-фактору: Weak D, DEL, Partial D. Такие варианты могут быть неверно или неоднозначно идентифицированы при обычном анализе крови на резус-фактор и могут быть выявлены с помощью генетического анализа гена RHD. Эти особые статусы встречаются очень редко, однако могут быть опасны из-за несоответствия полученного при обычном анализе крови результата реально существующему статусу резус-фактора.
В нашей лаборатории для генотипирования по резус-фактору используется современный метод MLPA, который позволяет выявить статус носительства 0, 1 или 2 копий гена RHD, а также идентифицировать особые мутантные формы этого гена с высокой надежностью и эффективностью.
- Парам, планирующим беременность, для оценки риска развития резус-конфликта.
- Резус-отрицательным женщинам и их партнёрам, для оценки возможностей превентивной медицины.
- Тем, кто хочет стать донором крови, для предоставления станциям переливания крови максимально полной информации по основным параметрам.
- Тем, кто хочет точно знать свой резус-фактор на случай непредвиденных ситуаций в будущем (например, необходимость переливания крови после несчастного случая или по причине оперативных вмешательств).
Для проведения исследования необходимо сдать кровь из вены.
В день сдачи биоматериала для анализа не рекомендуется употреблять жирную пищу.
- Обращение в лабораторию Genetico
- Забор биоматериала (кровь из вены или слюна)
- Выделение ДНК
- Исследование ДНК на наличие гена RHD и мутаций в этом гене методом MLPA
- Получение лабораторного заключения
Для проведения исследования необходимо сдать кровь из вены.
В день сдачи биоматериала для анализа не рекомендуется употреблять жирную пищу.
- Обращение в лабораторию Genetico
- Забор биоматериала (кровь из вены или слюна)
- Выделение ДНК
- Исследование ДНК на наличие гена RHD и мутаций в этом гене методом MLPA
- Получение лабораторного заключения
В ходе исследования производятся анализ гена RHD и статуса его носительства.
При наличии в семье отягощенного анамнеза и высокого риска развития резус-конфликта при следующей беременности, возможно проведение ПГД резус-фактора. ПГД возможна в том случае, когда супруг – гетерозигота по гену RHD.
Для пар Rh- женщина и Rh+ мужчина с целью получения информации о современных способах профилактики резус-конфликта рекомендуется консультация акушера-гинеколога.
источник
Rh-генотип. Определение генотипа резус-фактора
ГЕН ВХОДИТ В СОСТАВ ИССЛЕДОВАНИЙ:
Совпадение по локусам HLA и резус-фактор
- 7207 Определение генотипа резус-фактора
Определение генотипа по резус-фактору.
Резус-принадлежность человека определяется наличием или отсутствием на поверхности эритроцитов главного антигена D. Аминокислотная последовательность белка антигена D кодируется геном RHD. Из-за того, что на эритроцитах присутствует большое количество других групповых антигенов, вступающих в перекрёстную реакцию с диагностической Rh-антисывороткой, серологическое определение резус-принадлежности не всегда даёт точный и однозначный ответ.
В отличие от серологического исследования генетический анализ, выявляющий наличие или отсутствие гена RHD, всегда однозначен. Делеция гена RHD в обеих гомологичных хромосомах обуславливает отрицательный резус-фактор. Наличие гена в гомозиготном или гетерозиготном состоянии определяет положительный резус-фактор у обследуемого. В случае если резус-положительные отцы являются гетерозиготными по резус-фактору, то у резус-отрицательных матерей даже при наличии отягощённого анамнеза плод в 50% случаев будет резус-отрицательным. Таким образом, для женщин с резус-конфликтной беременностью появилась возможность проведения пренатальной диагностики с целью определения резус-фактора на ДНК плода, выделенной из ворсин хориона (10 — 15 недель беременности) или из амниотической жидкости при проведении амниоцентеза (24 неделя беременности).
Если результаты молекулярно-генетического анализа показывают, что плод является резус-отрицательным, то отпадает необходимость в проведении последующих инвазивных процедур, и такие пациентки исключаются из дальнейшего обследования по тяжести развития гемолитической болезни плода. Кроме того, определение гетерозиготного генотипа по резус-фактору (RHD+/RHD-) у отца даёт основание для проведения преимплантационной диагностики при наличии отягощённого акушерского анамнеза (гибель детей от гемолитической болезни) и резус-сенсибилизации у матери. В результате при ЭКО будущей матери будут перенесены только резус-отрицательные эмбрионы.
Лаборатория ИНВИТРО предлагает метод определения резус-фактора (Rh), в том числе и гетерозиготности по резус-фактору, на основе количественной мультиплексной лигазной реакции. Система включает в себя четыре контрольных гена: TBP, SIRT3, USP3, B2M, присутствующих в геноме человека всегда в двух копиях и три фрагмента гена RHD.
- Материал для исследования: цельная кровь (2 — 3 мл), взятая с ЭДТА.
- Метод определения: ПЦР и рестрикционный анализ.
Смотрите также:
- Определение гетерозиготного или гомозиготного носительства по резус-фактору.
Результаты определения числа копий гена RHD
- Образец 1: резус-фактор отрицательный (отсутствует последовательность гена RHD).
- Образцы 2, 3: резус-фактор положительный (присутствуют две копии гена RHD).
- Образец 4: резус-фактор положительный, гетерозигота по RHD (присутствует одна копия гена RHD)
источник