Анализ крови на вирус гепатита с количественный анализ расшифровка

Количественный анализ на вирус гепатита С: расшифровка результатов

Учитывая бессимптомное течение и высокую вероятность передачи HCV-инфекции, большое значение имеет диагностика на ранних стадиях патологии. Наиболее точной считается постановка полимеразной цепной реакции. В отличие от методов выявления серологических маркеров, ПЦР мало зависит от сопутствующих заболевания и общего состояния организма пациента. Но если подтвержден вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого проводится врачом, обязателен.

HCV – тяжелое заболевание, требующее серьезной дорогостоящей и опасной побочными реакциями терапии. Поэтому диагноз никогда не ставят на основании результатов одного исследования. При подозрении на наличие вирусного заболевания пациенту приходится пройти несколько тестов. Но чтобы избежать лишних затрат и потери времени, анализы крови и инструментальные обследования проводят поэтапно.

Основные стадии диагностического процесса приведены в таблице:

Окончательный диагноз доктор ставит только по результатам, указанным во всех исследованиях. Некоторые препараты, например, гепатопротекторы, витамины показаны уже в начале диагностического процесса. Но таргетные противовирусные средства назначают после получения всех данных.

Что такое ПЦР

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении. Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Виды исследования

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Особенности количественного анализа

Количественный анализ методом ПЦР проводится для определения вирусной нагрузки. Под этим термином подразумевают количество копий РНК возбудителя в 1 мл крови.

Благодаря такому исследованию врач сможет оценить ряд факторов, играющих ключевую роль как в самом течении заболевания, так и исходе терапии. Это:

• вероятность развития осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы), так как чем активнее патологический процесс, тем выше риск появления патологий печени уже на начальных стадиях гепатита С;
• эффективность стандартной схемы терапии (в тяжелых случаях требуется дополнительное назначение противовирусных средств);
• риск для окружающих (особенно если пациент относится к социально благополучным слоям населения, имеет семью, детей);
• риск внепеченочных осложнений (развитие аутоиммунных заболеваний, поражения нервной, сердечно-сосудистой системы и т.д.).

Количественное определение РНК HCV важно и для контроля эффективности проводимого лечения. По мере продолжения приема противовирусных средств полученные цифры снижаются. Целью терапии является достижение отрицательного результата качественного анализа методом ПЦР.

Показания

До появления большого количества частных лабораторий, где пациент может сдать практически любой анализ без документов от врача, направление на выполнение количественной ПЦР давали на определенном этапе диагностики или лечения.

В соответствии с нормами и протоколами ВОЗ, показаниями к проведению такого исследования служат:

• положительные серологические маркеры HCV (anti-HCV Total, наличие иммуноглобулинов класса G и/или М);
• положительный результат качественной ПЦР;
• контроль проводимого лечения.

При желании пациент может самостоятельно обратиться в частную клинику и выполнить подобное исследование. Но при отсутствии гепатита С проведение такого лабораторного теста считают нецелесообразным.

Нам каких этапах заболевания проводится

Для определения вирусной нагрузки установлены следующие сроки:

• до начала терапии (возможно, одновременно с генотипированием);
• 4 неделя лечения (отрицательные данные свидетельствуют о быстром вирусологическом ответе и служат предикторами благоприятного исхода);
• последняя неделя терапевтического курса (12 или 24 в зависимости от подобранной схемы), негативный результат подтверждает эффективность терапии, позитивный требует продолжения лечения, но уже с применением других медикаментов;
• 24 и 48 неделя после окончания лечебного курса (вне зависимости от его продолжительности), отсутствие вирусной нагрузки подтверждает выздоровление.

Дополнительно исследование проводят только по показаниям (например, ухудшение самочувствия, ошибки в приеме таблеток, выявление сопутствующих инфекций и т.д.). Выполнение ПЦР не исключает необходимости в других анализах – клинических исследованиях крови и мочи, печеночных проб, УЗИ и прочих.

Как подготовиться к исследованию

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С

Обычно, когда пациент получает на руки результаты анализов, в бланке приведены показатели нормы, полученные значения и краткая интерпретация. Однако расшифровка анализа крови на гепатит С должна проводиться только врачом. Количественная ПЦР – один из этапов диагностики, поэтому врач сопоставляет приведенные цифры с полученными ранее результатами.

В зависимости от полученных показателей определяется степень вирусной нагрузки или полное отсутствие РНК HCV в организме.

Если проведен количественный анализ на гепатит С, расшифровка проводится в соответствии с таблицей:

Чтобы точно расшифровать анализ и не допустить ошибочных результатов, оценивать данные количественной ПЦР можно только после выявления серологических маркеров качественной ПЦР. При ИФА обязательно указывается коэффициент позитивности. Также принимают во внимание данные ультразвукового обследования, эластографии и биопсии, если исследование проводилось.

Норма

Количественный анализ ПЦР проводят только в том случае, если положительны другие показатели крови при гепатите С.

Получение отрицательного результата возможно при:

• самостоятельном выздоровлении (в медицинской литературе приведена статистика, по которой порядка 15% случаев инфицирования HCV остаются незамеченными, иммунная система человека полностью устраняет вирус);
• раннем вирусологическом ответе (при оценке результатов в ходе противовирусной терапии);
• при ошибочных данных предыдущих исследований (маловероятно, так как предварительно обычно назначают ИФА, качественную ПЦР, печеночные пробы).

Когда сдается анализ на гепатит С для оценки вирусологической нагрузки, расшифровка проводится врачом. Считается, что показатели нормы – это полное отсутствие РНК HCV в крови. Но для исключения скрытой инфекции исследование рекомендуют повторить через несколько недель.

Какие показатели крови указывают на гепатит С

Перед началом диагностического обследования необходимо точно знать, какие показатели крови указывают на HCV. С одной стороны это позволит избежать пациенту лишних финансовых трат на ненужные анализы, с другой – сэкономит время.

Так, при гепатите С показательны такие данные:

• позитивный ИФА вне зависимости от класса обнаруженных антител; но данный параметр оценивают на фоне других результатов, так как некоторые особенности работы иммунной системы могут повлиять на правильность исследования;
• позитивная качественная ПЦР (чувствительность и специфичность метода достигает 100%);
• определение количества копий вируса при количественной ПЦР.

Косвенными признаками HCV является превышение норм печеночных трансаминаз, билирубина, лейкоцитоз, ускорение СОЭ, наличие билирубина в моче.

При расшифровке результатов принимают во внимание сокращения, как обозначается гепатит С в анализах. Обычно вирусную нагрузку указывают в МЕ/мл или IU/ml, а РНК вируса английской аббревиатурой RNA HCV.

Бывает ли ложный тест

В отличие от ИФА вероятность ложного результата ПЦР практически нулевая. Ошибки возможны только в результате человеческого фактора, то есть при нарушении правил забора крови, хранения образцов и непосредственно проведении исследования.

Преимущества количественного исследования методом ПЦР

Специалисты в области гепатологии подчеркивают, что количественная ПЦР не имеет аналогов и является одним из основных исследований для пациентов с HCV. Механизм проведения анализа сводит к минимуму вероятность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.

Для получения результатов требуется несколько дней. Забор крови не требует особой подготовки, возможен практически в любой клинической лаборатории и не сопровождается какими-либо значимыми болевыми ощущениями. Но основным преимуществом такого анализа является высокая точность, достигающая 100%.

источник

Как расшифровать при гепатите С результаты анализа на вирусную нагрузку

Вирусная нагрузка при гепатите С – мера тяжести заболевания, которая определяется путем подсчета количества вирусов в 1 миллилитре крови. Показатель выражается численно, а измеряется в международных единицах на 1 мл (МЕ/мл). Инфекционная нагрузка указывает степень инфицирования, концентрацию вирусных частиц в организме и влияет на вероятность человека заразить окружающих.

Кому и когда назначают анализ на вирусную нагрузку

Вирусная нагрузка – один из важнейших критериев оценки состояния пациентов, зараженных гепатитом. Для выявления РНК вируса в крови прибегают к разным видам полимеразной цепной реакции (ПЦР) – генотипированию, количественной, качественной. Анализ выполняется при:

• оценке общего состояния людей с выявленным вирусным гепатитом;
• положительном тесте на антитела к HCV;
• подборе дозы препарата для уничтожения возбудителя гепатита.

По результатам обследования врач-инфекционист определяет степень активности возбудителя в организме пациента. Количественная ПЦР-диагностика выполняется до и во время лечения антивирусными лекарствами. В первом случае уточняют дозу и продолжительность лечения, а во втором – эффективность назначенной терапии. Снижение инфекционной нагрузки указывает на положительный терапевтический ответ и высокую вероятность полного выздоровления.

Подготовка к сдаче крови

Для подсчета количества частиц вируса гепатита С (ВГС) исследуют кровь, взятую из локтевой вены. Забор образцов для ПЦР-диагностики выполняют в процедурном кабинете. При соблюдении правил антисептики исключается риск занесения инфекции в биоматериал извне. Выполнение всех процедурных условий предотвращает недостоверные результаты.

По данным исследования удается охарактеризовать вирусный процесс – определить активность возбудителя гепатита, специфичность иммунного ответа.

Сдаче крови предшествует несложная подготовка:

1. за сутки отказываются от приема медикаментов;
2. в день обследования ограничивают физические нагрузки;
3. за 8 часов исключают прием пищи и красящих напитков;
4. анализ сдают до полудня натощак;
5. перед входом в процедурный кабинет необходимо спокойно посидеть 15-20 минут.

Погрешности в результатах анализа чаще всего связаны с:

• неправильным хранением биоматериала;
• приемом лекарств перед забором крови;
• допущением ошибки лаборантами.

При необходимости повторного проведения ПЦР-диагностики кровь сдают в той же лаборатории.

Современные методы выявления количества вируса

Для определения степени активности вирусного гепатита необходимо подсчитать количество РНК в организме больного. С этой целью выполняют разные виды тестов, отличающихся по степени чувствительности.

При определении количества РНК возбудителя гепатита удается подобрать минимальную терапевтическую дозу, необходимую для уничтожения инфекции.

Методы определения количества возбудителя гепатита С в крови:

• Количественная ПЦР-диагностика. Тест высокой чувствительности выявляет вирусные РНК в сыворотке крови от 50 МЕ/мл. К нему прибегают несколько раз – до начала терапии, во время приема антивирусных препаратов, после завершения лечения. — рекомендуемый

• Метод транскрипционной амплификации. Один из самых чувствительных тестов применяется для обнаружения и подсчета количества вирусных частиц. По полученным данным удается выявить минимальную инфекционную нагрузку – до 10 МЕ/мл.

• Радиоиммунологический анализ. Суть теста заключается в использовании меченых изотопов, которые вступают в реакцию с вирусной частицей. Во время радиометрии подсчитывают количество вирионов в крови.

• Метод разветвленной ДНК. Сегодня гибридизационный анализ используется крайне редко, что связано с его невысокой чувствительностью – от 500 МЕ/мл. К преимуществам метода относят невысокую стоимость, быстрое получение результатов. Метод разветвленной ДНК используется инфекционистами только при подтвержденном вирусном гепатите С для определения динамики лечения.

• Способ иммуноблоттинга. Этот тест чувствительнее иммуноферментного анализа. Для определения количества вирионов сначала отделяют плазму от клеток крови. В ходе исследования выявляют не только вирусные частицы, но и антитела к ним. Для выполнения теста нужно от 3 часов до 2 дней.

Для уточнения диагноза определяют генотипы ВГС. В соответствии с результатами теста составляют подходящую схему терапии, оценивают шансы на выздоровление.

В вирусологии зарегистрировано 11 генотипов HCV, которые имеют подтипы. На территории РФ чаще выявляются 1a, 1b и 3b генотипы. В первом случае риск хронизации воспаления и рецидива вирусной инфекции очень высокий. Однако с момента появления на рынке современных противовирусных препаратов первые 6 генотипов вируса поддаются лечению с вероятностью выше 96%, даже при циррозе печени, самые распространенные схемы лечения (ссылка).

Расшифровка вирусной нагрузки при гепатите С

Результаты лабораторных исследований интерпретируют врачи разных специализаций – гастроэнтеролог, инфекционист, гепатолог. В зависимости от содержания вирионов определяют степень прогрессирования гепатита. Высокая вирусная нагрузка свидетельствует об остром воспалении печени. При правильном подборе медикаментов и успешном лечении она снижается.

В результатах анализов очень часто можно увидеть степени, которые обозначаются как «^», например, 6*10^5 МЕ/МЛ, 10 в пятой степени это 100 тысяч, соответственно 6*10^5 МЕ/МЛ = 600 000 МЕ/МЛ.

Подставляйте результат вашего анализы, который стоит перед знаком умножить, и вы получите количество вируса на миллилитр крови. Учтите, что единицы измерения могут отличаться (копий/мл, ме/мл).

Если затрудняетесь или есть вопросы, вы всегда можете написать нашему дежурному врачу-инфекционисту (чат в правом нижнем углу экрана). Он бесплатно расшифрует ваши анализы и проконсультирует.

Таблица вирусной нагрузки при гепатите С:

Впервые тест выполняют при подтверждении диагноза для оценки общего состояния. В зависимости от типа и количества РНК ВГС выбирают подходящие препараты, дозу и сроки терапии. Спустя 2 недели делают повторный анализ, чтобы определить эффективность лечения. При снижении инфекционной нагрузки схему терапии не меняют.

При назначении препаратов прямого противовирусного действия (ПППД) курс лечения занимает 8, 10, 12 или 24 недели.

Что значит для больного высокая или низкая нагрузка

Инфекционная нагрузка – показатель, отражающий степень активности вирионов и опасность больного человека для окружающих. Если она низкая, это свидетельствует о хорошей сопротивляемости организма возбудителю гепатита. От концентрации РНК HCV во многом зависит результативность и продолжительность лечения.

По результатам повторного теста определяют необходимость внесения корректив в схему лечения. Если тест дает положительный результат, то есть уровень вирионов в плазме крови снижается, терапию продолжают без изменений. Лечение гепатита С с любой вирусной нагрузкой проводят лекарствами, которые связываются с белками ВГС и препятствуют их самокопированию:

Если выявляют более 400 000 МЕ/мл, это свидетельствует об интенсивной репликации вирионов. При высокой активности инфекционных агентов возрастает риск осложнений – холестаза, фиброза и цирроза печени, печеночной энцефалопатии, брюшной водянки, гепатоцеллюлярной карциномы.

Могут ли быть ошибки в результатах анализа

Погрешности в ПЦР-диагностике – редкость. Но если полученные данные противоречат результатам других исследований, проводят повторный анализ. Не исключены ложноположительные результаты при:

• приеме лекарств от ВИЧ-инфекции;
• обострениях инфекционных болезней;
• беременности;
• аутоиммунных нарушениях.

Небольшая нагрузка при повышенном уровне печеночных ферментов в 90% случаев свидетельствует о ложноотрицательном результате.

Ошибки в измерениях иногда связаны с:

• нарушением правил асептики при заборе крови;
• неправильным хранением биоматериала;
• загрязнением исследуемой крови химическими реагентами;
• низкой квалификацией лаборантов;
• забором крови во время лечения препаратами гепарина.

Незначительные погрешности возможны при проведении ПЦР-исследования в разных лабораториях. Поэтому гепатологи и гастроэнтерологи советуют в течение всего периода лечения гепатита сдавать анализы в одной и той же клинике.

Инфекционная нагрузка отражает тяжесть течения болезни. По полученным данным определяют подходящую дозу противовирусных лекарств, оценивают результативность терапии. В случае параллельного генотипирования вируса удается не только подобрать медикаменты от гепатита, но и спрогнозировать терапевтический ответ.

Что делать дальше, как избавиться от вируса?

Главное не паниковать, сейчас гепатит лечится не сложней гриппа. Для назначения терапии современными препаратами необходимы следующие данные:

1. Вирусная нагрузка (Количественный анализ методом ПЦР)
2. Генотип вируса (Анализ на генотипирование)
3. Уровень фиброза (Фибросканирование, эластография)

Когда у вас на руках есть результаты всех этих анализов, вы можете по таблице определиться со схемой лечения. Мы рекомендуем обратиться к лечащему врачу и проконсультироваться на предмет назначения терапии современными противовирусными препаратами прямого действия. Многие врачи до сих пор назначают малоэффективную терапию интерферонами + рибавирином, имейте ввиду, и настаивайте на терапии новыми лекарствами.

Сколько стоит терапия новыми препаратами?

В среднем от 29 700 до 54 000 рублей, в зависимости от схемы лечения. У нас на сайте полный курс лечения индийскими препаратами на 12 недель стоит 33 000 рублей, препаратами из Шри-Ланки — 29 700 рублей.

Спасибо за то, что дочитали до статью конца. Если остались вопросы, дежурный врач-инфекционист всегда готов ответить на них (чат в правом нижнем углу экрана).

источник

Расшифровка количественного анализа крови на гепатит С

Если диагностирован вирус гепатита С, количественный анализ, расшифровка которого влияет на назначение лечебной схемы, строго обязателен. В отличие от генотипирования, подобное исследование выполняется несколько раз: непосредственно на этапе комплексной диагностики заболевания и в ходе терапии. Доктору важно знать количественное содержание вируса в крови пациента, чтобы назначить адекватное лечение.

Уже на стадии терапии анализ крови на уровень HCV предназначен для оценки эффективности принимаемых лекарств. По данным клинических исследований, на фоне подавляющего большинства противовирусных препаратов прямого действия количественный тест демонстрирует отрицательный результат уже на 21–28 день. Однако о полном выздоровлении речь идет в том случае, если негативные данные сохраняются на протяжении двух лет с последнего дня приема таргетных таблеток.

Для установления числового значения генома возбудителя гепатита С в сыворотке крови обычно пользуются молекулярной технологией ПЦР. Только таким образом можно точно посчитать уровень виремии: данный термин обозначает концентрацию копий (частиц генома) возбудителя гепатита С в определенной единице крови. Прочие методы, например, выявление core-антигена иммуноферментным тестом применяются гораздо реже из-за высоких финансовых затрат и сложностей, касающихся технического выполнения исследования.

Лабораторные исследования методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция до недавнего времени была лишь экспериментальным методом анализа и не была широко распространена в клинической практике. Принцип методики основан на так называемой амплификации – способности определенного участка генома патогена к многократному копированию.

Это достигается при помощи обязательных компонентов выполнения ПЦР:

• праймера, структура которого практически идентична определенным участкам РНК HCV,
• фермента, обеспечивающего реакцию амплификации.

Сам процесс лабораторного исследования происходит в буферном растворе, в котором содержится фиксированная комбинация катионов и анионов. Таким образом возможно поддержание оптимального для течения ПЦР уровня рН. Набор для проведения ПЦР содержит и протеины, используемые в качестве своего рода «строительного материала» при амплификации.

Структура праймера такова, что он может взаимодействовать только со строго определенным возбудителем. На этом принципе основана специфичность анализа методом ПЦР. Если иммуноферментные серологические исследования зависят от индивидуальных параметров иммунной системы человека, ПЦР направлена исключительно на выявление РНК возбудителя HCV.

Еще одна особенность проведения подобного исследования состоит в том, что расшифровка ПЦР гепатита С возможна как с использованием компьютерных программ (обычно используется, когда необходимо количественно установить содержание вируса в крови) и микроскопических методов. В норме у здорового в плане вирусного поражения печени человека патоген в крови отсутствует. Выявление возбудителя HCV методом ПЦР, будь то качественное либо количественное исследование, однозначно указывает на инфицирование.

Виды тестов

При помощи постановки ПЦР можно не только определить виремию, то есть фактический уровень патогена в кровотоке, но и генотип вируса. Все доступные исследования, выполняемые по такой методике, приведены в таблице.

При гепатите С проводится все три исследования ПЦР. Алгоритм диагностики состоит в следующем:

1. Общие клинические исследования («стандартный набор» – кровь, моча, биохимия и печеночные пробы), дополнительно могут назначать ревматоидные тесты и ряд других анализов при подозрении на аутоиммунные процессы;
2. Серологическое исследование (ИФА) на выявление антител к возбудителю гепатита С. Изначально показан тест Anti-HCV Total.
3. Качественная ПЦР, предназначена для подтверждения результатов ИФА.
4. Количественная ПЦР, выполняется при подтвержденном диагнозе HCV-инфекции.
5. Генотипирование, также проводится при установленном факте заражения.

Если человек желает самостоятельно обследоваться на гепатит С, рекомендуют сдавать ИФА. Дальнейшие обследования проводят в зависимости от полученных результатов. Если ИФА отрицательный и человек не предъявляет никаких жалоб, повторное тестирование проходят через год. Но при наличии симптомов патологии (в том числе и неспецифических, например, сильная слабость, утомляемость, боли в правом подреберье) следует сдать качественную ПЦР.

Характеристика количественного анализа

В целом, техника выполнения ПЦР по большому счету одинакова, как для качественного, так и количественного исследования. Образец биологического материала смешивают с тест-раствором, который содержит специальные соединения. Их роль состоит в стимуляции деления РНК патогена (причем строго специфичного генетического материала возбудителя).

В результате концентрация HCV достигает лабораторно определяемого уровня. На данном этапе возможно проведение качественного анализа. Однако после сложных подсчетов (обычно для этих целей используют компьютерные программы) устанавливают количественный показатель содержания HCV. После этого полученный результат переводят в Международные Единицы и фиксируют в лабораторном бланке.

В некоторых случаях вместо ПЦР используют другие методики – разветвленной ДНК и транскрипционной амплификации. Но из-за сложности выполнения и более низкой чувствительности большинство специалистов предпочитают выявлять количественные нормы гепатита С именно при помощи ПЦР.

Показания

Сейчас практически в любой частной лаборатории пациент может пройти обследования без каких-либо бумаг и направлений от терапевта. Количественное определение вируса гепатита С в крови не является исключением. Вопрос в том, когда целесообразна сдача теста?

Гепатологи рекомендуют проведение исследования в таких случаях:

• позитивный ИФА + положительная ПЦР;
• негативный ИФА + положительная ПЦР.

Кроме того, количественное определение HCV показано и в ходе противовирусной терапии. Врач сравнивает результаты виремии, полученные до начала курса приема медикаментов, с результатами тестирования, проведенного уже во время лечения. Нормой считается негативная ПЦР к 12 неделе применения препаратов. А предиктором 100% выздоровления считают отсутствие виремии уже через месяц терапии.

Тестирование продолжают и после окончания лечения для исключения риска рецидива. Пациент должен сдавать такой тест на протяжении еще 2 лет. При отрицательном результате говорят о выздоровлении. Больного снимают с учета у гепатолога или инфекциониста и дают общие рекомендации относительно восстановления состояния печени.

Если спустя 2 года количественный тест на HCV вновь положителен, все исследования повторяют заново. В таком случае предполагают повторное инфицирование и, возможно, другой генотип вируса. Но требуется новая схема лечения, а вероятность благополучного исхода существенно ниже.

Когда информативно проведение теста

Сроки выполнения количественного определения вирусной нагрузки при подтвержденной HCV-инфекции указаны в таблице.

Как подготовиться

Сама методика постановки ПЦР менее чувствительна к особенностям функционирования внутренних органов, иммунной системы. Однако это не исключает соблюдения правил подготовки к проведению теста. В большинстве случаев количественный тест проводится при уже подтвержденном диагнозе гепатита С.

Это подразумевает как минимум отказ от алкоголя и соблюдение строгой диеты (по столу №5 или №5а в зависимости от тяжести состояния больного). Лечащий врач уже ознакомлен с анамнезом, знает, какие лекарственные средства принимает пациент и от каких патологий страдает. Это облегчает расшифровку анализа ПЦР и снижает вероятность постановки ошибочного диагноза.

Но чтобы получить максимально точный результат необходимо:

• сдавать кровь натощак (после ужина должно пройти не менее 12 часов, завтрак противопоказан);
• посещать лабораторию следует в первой половине дня;
• до сдачи крови нельзя есть и пить что-либо кроме воды;
• нельзя курить за 8–10 часов до исследования.

Перечисленные правила нужно соблюдать перед каждой проверкой на количественное содержащие патогена. Если исследование проводят после лечения и врач разрешил ослабления в диете, за 7–10 дней до проведения тестирования необходимо вновь вернуться к строгому режиму питания. Что касается спиртного, ограничения сохраняются на протяжении всей жизни.

Расшифровка количественного анализа крови на гепатит С

Ранее отечественные специалисты делили виремию на несколько групп: очень низкую, низкую, умеренную, высокую и очень высокую. Но в настоящее время расшифровка анализа крови на гепатит С проводится в соответствии с международными нормами. Сейчас виремию делят только на 2 группы. В таблице указаны вероятные данные количественного анализа на гепатит С (окончательная расшифровка вне зависимости от показателей должна проводиться врачом).

Но только специалист может грамотно расшифровать количественное исследование на HCV и отличить показатели нормы от критических, свидетельствующих об отсутствии результата от противовирусной терапии либо о рецидиве инфекции. Все анализы должны быть подшиты в амбулаторную карту, чтобы у доктора была полная информация об активности вирусной инфекции и ответной реакции на прием таргетных медикаментов.

Показатели нормы

Показатели нормы при расшифровке количественного анализа на гепатит С бывают только тогда, когда результат ПЦР отрицателен, то есть РНК вируса во взятом образце крови отсутствует. В остальных случаях наличие патогена свидетельствует о заражении.

При подтверждении диагноза количественные показатели крови при гепатите С служат основой для оценки степени активности вирусного процесса. Высокая виремия повышает вероятность осложнений и сокращает срок наступления необратимых изменений в печени.

Вирусологическая нагрузка, превышающая 800 000 МЕ/мл служит основанием для проведения ряда инструментальных обследований:

• эластографии – диагностического метода для определения степени фиброза (разрастания и размеров очагов соединительной ткани);
• томографии – подробное рентгенологическое исследование, позволяющее исключить либо подтвердить наличие злокачественных или доброкачественных новообразований;
• биопсии печени, которая дает максимально полную информацию о структурных изменения в органе.

Низкая вирусная нагрузка говорит о медленно развивающейся вирусной инфекции. Такой процесс не исключает прогрессирования поражения печени, но вероятность возникновения тяжелого декомпенсированного цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы низка. У такой категории пациентов редко возникают внепеченочные проявления гепатита С (кардиоваскулярные расстройства, аутоиммунные нарушения), что также повышает шансы не только успешной противовирусной терапии, но и быстрого общего восстановления.

Какие показатели крови указывают на инфицирование

При постановке диагноза назначают несколько исследований, таким образом ошибка в проведении тестирования исключается.

Основными маркерами при гепатите С служат:

1. Положительный результат иммуноферментного анализа. Но ИФА во многом зависит от состояния иммунной системы человека, поэтому на этапе первичной диагностики не исключают ложноположительный либо ложноотрицательный результат.
2. Коэффициент позитивности при гепатите С выше 1. Рассчитывается по титру антител. Иногда референсные значения могут отличаться в зависимости от используемой тест-системы, но физиологическая норма всегда указывается в бланке с результатами.
3. Положительный результат качественного теста ПЦР. Обнаружение РНК возбудителя патологии однозначно указывает на инфицирование.
4. Определяемая виремия методом количественной ПЦР.

Косвенными лабораторными признаками гепатита С служат:

• повышение уровня печеночных ферментов, билирубина;
• изменение уровня лимфоцитов, в некоторых случаях, лейкоцитов, ускорение СОЭ.

Но при ответе на вопрос, какие показатели крови указывают на гепатит С, доктора руководствуются результатами ПЦР, так как ИФА может быть непоказательным при наличии определенных заболеваний (ВИЧ, аутоиммунных расстройств). Также неверные результаты вероятны при беременности, приеме некоторых лекарств. Не последнюю роль играет и анамнез.

При гепатите С антитела, как и РНК обнаруживаются при помощи тест-систем не сразу, а спустя как минимум 10–14 дней. ИФА может дать достоверный результат позже – через 4–6 недель после инфицирования. Поэтому если есть серьезные основания предполагать контакт с кровью больного, при негативном результате все анализы имеет смысл повторить через 1–1,5 месяца.

Возможны ли ошибочные результаты

В современных лабораториях тестирование проводят с соблюдением всех норм (в соответствии с требованиями отечественного и зарубежного законодательства), но исключить вероятность ошибок и ложных результатов нельзя.

Если на выполнение ИФА оказывает влияние состояние иммунной системы человека, правильность выполнения ПЦР зависит от:

• соблюдения стерильности при заборе, транспортировке и работе с образцами крови пациента, чтобы исключить возможный контакт с контаминированными образцами;
• соблюдения температурного режима и других правил при хранении и перевозке пробирок с кровью;
• правильности постановки ПЦР (начиная от работы лаборанта и заканчивая функционированием автоматических диагностических систем);
• качества используемых лабораторных материалов.

Но количественный анализ проводится на основании уже выполненных исследований, которые однозначно указывают на наличие HCV (ИФА и качественная ПЦР). Поэтому при отрицательном результате на фоне подтвержденного диагноза исследование повторяют. Кроме того, обращают внимание, как обозначается гепатит С в анализах.

В некоторых клиниках могут пользоваться устаревшей системой, когда виремия указывается не в международных единицах, а в количестве копий. Иногда путаница возникает с подсчетом нулей в указанных цифрах. Именно поэтому расшифровкой обозначений в бланке результатов должен заниматься врач.

Преимущества количественного теста

Определение вирусной нагрузки возможно и с использованием других методик, включая серологические. Так, исследование на антиген core считают альтернативой количественной ПЦР.

Но большинство врачей отдают предпочтение ПЦР благодаря:

• доступности и качеству тест-систем: их производством занимаются ведущие мировые фармацевтические и медикотехнологические корпорации;
• быстроте и простоте выполнения;
• высокой чувствительности: современные методики ПЦР позволяют обнаружить РНК патогена в количестве 5 МЕ/мл;
• универсальности: количественное определение проводится одинаковыми методиками вне зависимости от генотипа HCV;
• объективности вне зависимости от состояния здоровья пациента (в отличие от ИФА), что позволяет проводить исследования на разных этапах диагностики и лечения;
• отсутствию влияния на результаты принимаемых лекарств.

Сейчас ПЦР остается основным методом количественного определения виремии. Тест используется повсеместно практически во всех лабораториях и больницах. Но во избежание ошибок, перед сдачей анализа нужно поинтересоваться, по какой технологии будет проводиться исследование, чтобы соотнести результаты дальнейших анализов.

источник