Автоматические и полуавтоматические методы определения общего анализа крови

АВТОМАТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ КЛЕТОК КРОВИ

Изменение крови при гнойно-воспалительных и инфекционных заболеваниях

Изменения крови при гнойно-воспалительных (ангине, пневмонии, аппендиците, холецистите, абсцессе и т.д.) и септических заболеваниях проявляются лейкоцитозом, увеличением СОЭ, нейтрофилезом со сдвигом влево, появлением токсической зернистости в нейтрофилах.

При инфекционных заболеваниях бактериального происхождения (дифтерия, скарлатина, коклюш, активные формы туберкулеза) наблюдаются такие же изменения крови, как и при воспалительных процессах (нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево, повышение СОЭ).

Для большинства вирусных инфекций (ветряной оспы, краснухи, кори, гриппа и др.), а также бруцеллеза и брюшного тифа характерно уменьшение количества лейкоцитов в крови с относительным лимфоцитозом. СОЭ, как правило, не изменяется.

1.10. ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЕ КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ К ГЛАВЕ «ОБЩИЙ КЛИНИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ КРОВИ»

Установите соответствие между элементами в столбцах. Одному элементу в левом столбце соответствует только один элемент в правом столбце.

1. Клетки крови и их основные функции:

1) эритроциты а) секреторная

2. Соединения гемоглобина и их состав:

2) карбогемоглобин б) Hb О₂

3) карбоксигемоглобин в) Hb СО

3. Причина изменения СОЭ при заболеваниях:

1) анемия а) гипоальбуминемия

2) нефротический синдром б) эритроцитоз

3) эритремия в) гипербилирубинемия

4. Количество лейкоцитов в крови при заболеваниях (·10 9 /л):

2) хронический миелолейкоз б) 4,0-9,0

3) В₁₂-дефицитная анемия в) 10,0-12,0

5. Термины для оценки количества лейкоцитов в крови (·10 9 /л):

3) гиперлейкоцитоз в) 10,0-15,0

6. Реактивы для определения показателей общего анализа крови:

1) трансформирующий раствор а) СОЭ

2) цитрат натрия б) гемоглобин

3) уксусная кислота в) количество лейкоцитов

7. Величина ЦПК при различных видах анемий:

1) 0,86-1,05 а) гипопластическая

2) 1,1-1,2 б) железодефицитная

г) хроническая постгеморрагическая.

8. Показатели лейкоцитарной формулы в норме (%):

1) нейтрофилы палочкоядерные а) 0-1

2) нейтрофилы сегментоядерные б) 0,5-5

9. Преобладающий вид лейкоцитов у детей разного возраста:

10. Цвет специфической зернистости разных видов:

1) нейтрофильной а) темно-фиолетовая

2) эозинофильной б) розово-фиолетовая

3) базофильной в) желто-красная

В настоящее время для исследования крови в КДЛ широко используются различные гематологические анализаторы, что позволяет повысить производительность труда в лаборатории, увеличить точность результатов, получить дополнительные параметры, дающие новую диагностическую информацию. Но, вместе с тем, они не исключают традиционных методов микроскопического исследования крови.

Все многообразие гематологических приборов можно условно разделить на 3 класса. Первый класс – полуавтоматические счетчики клеток крови, определяющие обычно от 4-х до 10 параметров (количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, концентрацию гемоглобина, гематокрит, расчетные эритроцитарные индексы). В анализаторах первого класса используется кондуктометрический метод, основанный на измерении разницы электропроводности клеток крови и разбавляющей жидкости.

Второй класс — автоматические анализаторы, проводящие анализ цельной крови и определяющие до 20 параметров. Они дополнительно определяют расчетные показатели тромбоцитов, строят гистограммы (графические изображения) распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему, а также проводят частичную дифференцировку лейкоцитов на гранулоциты, лимфоциты и «средние клетки», состоящие преимущественно из эозинофилов и базофилов.

Третий класс – высокотехнологичные гематологические анализаторы, позволяющие проводить развернутый анализ крови, включая полный подсчет лейкоцитарной формулы. В основе работы приборов этого класса лежит комбинация нескольких методов: кондуктометрического, лазерного, цитохимического и др.

Работа с гематологическими анализаторами требует предельной аккуратности и точности, строгого соблюдения требований соответствующих инструкций к прибору. Большинство ошибок при работе с гематологическими анализаторами связано с техническими погрешностями: низкое качество разводящих жидкостей, погрешности при заборе крови, грязная посуда, удлинение интервала времени между забором крови и подсчетом клеток и т.д. Однако существуют ошибки, связанные с особенностями патологических образцов крови.

Концентрация гемоглобина (HGB) в большинстве гематологических анализаторов определяется гемиглобинцианидным методом. Некоторые особенности крови при заболеваниях могут привести к завышению результатов определения гемоглобина: лейкоцитоз более 30·10 9 /л, парапротеинемия, гипербилирубинемия, внутрисосудистый гемолиз эритроцитов и др.

Количество эритроцитов в единице объема крови (RBC) гематологическими анализаторами определяется кондуктометрическим методом. Ошибки при подсчете количества эритроцитов, связанные с особенностями исследуемой крови, могут привести как к занижению результатов (гемолиз и агглютинация эритроцитов, наличие большого количества микроцитов и шизоцитов), так и к завышению результатов исследования (наличие патологически крупных тромбоцитов или их агрегатов, высокого лимфоцитоза с преобладанием малых лимфоцитов).

Средний объем эритроцита (MCV). Величина MCV выражается в фемтолитрах (фл). 1 фл = 1мкм 3 . Раньше для характеристики размеров эритроцитов крови проводили прямое измерение их диаметра с помощью окуляр-микрометра и затем строили график распределения эритроцитов по размерам (кривую Прайс-Джонса). Такое исследование является чрезвычайно трудоемким, требует измерения диаметра 500 эритроцитов с последующим расчетом процентного содержания эритроцитов определенного диаметра, но не позволяет точно характеризовать истинные размеры эритроцитов, так не учитывает формы клеток. В настоящее время точную характеристику объема эритроцитов получают на гематологических автоматах по величине MCV.

Параметры, определяемые гематологическими анализаторами

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) отражает количество граммов гемоглобина в 100мл эритроцитов, то есть отношение веса к объему эритроцитов. Это наиболее стабильный показатель, так как максимально возможная загрузка эритроцитов гемоглобином составляет 36г/100мл. Показатель используется как индикатор ошибки при подготовке пробы или в процессе работы прибора. Увеличение его более 36 г/дл свидетельствует о технических погрешностях. Диагностического значения он не имеет.

Коэффициент анизотропии эритроцитов (RDW) отражает различия в объеме эритроцитов, то есть степень анизоцитоза. Этот показатель дает количественную оценку разброса эритроцитов по объему. Нормальные величины коэффициента свидетельствуют о наличии в пробе крови однородной по объему популяции эритроцитов (нормо-, микро- или макроцитов). Увеличение коэффициента указывает на присутствие в крови разных по объему эритроцитов. В связи с этим коэффициент анизотропии следует оценивать только параллельно с анализом гистограммы эритроцитов и морфологическим исследованием мазка крови.

Эритроцитарная гистограмма – это графическое распределение эритроцитов по объему в результате анализа нескольких тысяч частиц объемом от 40фл до 240фл. Эритроцитарные гистограммы четко показывают наличие микроцитов, макроцитов или смешанной популяции эритроцитов.

Количество тромбоцитов (PLT) в автоматических счетчиках определяется прямым кондуктометрическим методом. Просчитываются частицы объемом 2-30фл. При этом возможно занижение результатов из-за агрегации тромбоцитов, наличия макроформ тромбоцитов, прилипания тромбоцитов к лейкоцитам. Завышение количества тромбоцитов отмечается при большом количестве микроцитов и шизоцитов.

Количество лейкоцитов (WBC) гематологическим анализатором может быть заниженным при наличии агглютинатов лейкоцитов и завышенным – при наличии патологических макроформ тромбоцитов, агрегатов тромбоцитов, парапротеинемии и др.

Большинство гематологических анализаторов дифференцирует лейкоциты в зависимости от их объема на два, три, пять и более видов лейкоцитов. Результаты исследования отражаются в лейкоцитарных гистограммах и в цифровом выражении относительного и абсолютного количества различных видов лейкоцитов. Точная дифференцировка лейкоцитов на отдельные популяции, выявление тонких морфологических изменений возможны только с помощью микроскопического исследования окрашенного мазка крови. Дифференцированный подсчет лейкоцитов гематологическим анализатором – это скрининг, при котором все патологические результаты подлежат последующему микроскопическому исследованию.

Контрольные вопросы по теме «Автоматические методы исследования клеток крови»

1. Преимущества гематологических анализаторов по сравнению с традиционными методами исследования.

2. Принцип подсчета клеток крови на автоматических анализаторах.

3. Какие гематологические показатели определяют автоматические анализаторы крови?

4. Особенности работы на гематологических анализаторах.

5. Причины ошибок при исследовании крови на автоматических анализаторах.

6. Что такое эритроцитарная гистограмма? Её клиническое значение.

7. Точность подсчета лейкоцитарной формулы на гематологических анализаторах.

8. Почему подсчет лейкоцитарной формулы на анализаторах может использоваться только в качестве скрининга?

9. Каким методом следует подсчитывать лейкоцитарную формулу у гематологических больных?

10. Какие дополнительные параметры крови, помимо традиционных, определяют на автоматических анализаторах?

СХЕМА КРОВЕТВОРЕНИЯ

Согласно современному учению о гемопоэзе, все клетки крови происходят от одной родоначальной клетки, которая путем последовательных направленных изменений превращается в зрелые эритроциты, лейкоциты и тромбоциты. По степени зрелости форменные элементы крови делятся на 6 классов. Самыми молодыми являются клетки I-IV классов, которые называются клетки-предшественники. К V классу относятся созревающие клетки и к VI классу – зрелые клетки крови.

I класс представлен стволовыми полипотентными клетками-предшественниками [от лат. poly много + potentia способность], из которых развиваются все клетки крови. Стволовые клетки способны и к делению, и к длительному самостоятельному существованию. В состоянии деления находится около 20% стволовых клеток; остальные пребывают в покое и начинают делиться в случае необходимости.

II класс. При делении стволовых клеток образуются клетки II класса, которые могут быть двух видов: предшественники лимфопоэза и предшественники миелопоэза. Из предшественников лимфопоэза в дальнейшем образуются Т- и В-лимфоциты и плазмоциты, а из предшественника миелопоэза – все остальные клетки крови. Клетки II класса являются ограниченно полипотентными, так как могут дать начало только лимфопоэзу или только миелопоэзу.

III класс. В ходе дальнейшего деления клетки II класса дают так называемые унипотентные клетки-предшественники [от лат. unita единство], каждая из которых является родоначальником определенного ряда клеток. К клеткам III класса относятся: предшественник В-лимфоцитов; предшественник Т-лимфоцитов; предшественник гранулоцитов и моноцитов – КОЕ-ГМ (колониеобразующая единица гранулоцитов и моноцитов); предшественник эритроцитов – КОЕ-Э (колониеобразующая единица эритроцитов); предшественник тромбоцитов – КОЕ-МГЦ (колониеобразующая единица мегакариоцитов).

IV класс представлен бластными клетками [от лат. blastosзародыш]. Различают 7 разновидностей бластных клеток: Т-лимфобласт, В-лимфобласт, плазмобласт (иммунобласт), монобласт, миелобласт, эритробласт, мегакариобласт.

V класс составляют созревающие клетки с общим для всех названием «цит». Разные клетки V класса проделывают неодинаковое число делений. Так, лимфоциты и моноциты образуются из соответствующих «бластов», проходя всего одну промежуточную стадию: соответственно пролимфоцита и промоноцита [лат. pro перед]. Кровяные пластинки – тромбоциты образуются из мегакариобластов через два промежуточных звена: промегакариоцита и мегакариоцита. Гранулоциты имеют четыре стадии созревающих клеток:

— промиелоциты (нейтрофильный, эозинофильный, базофильный);

— миелоциты (нейтрофильный, эозинофильный, базофильный);

— метамиелоциты (нейтрофильный, эозинофильный, базофильный) [лат. metaпосле];

— палочкоядерные гранулоциты: нейтрофил, эозинофил, базофил.

Еще большее количество ступеней созревания «бластов» имеют эритроциты. Это последовательно: пронормоцит, нормоцит базофильный, нормоцит полихроматофильный, нормоцит оксифильный, ретикулоцит. Деление нормоцитов проводится в соответствии с их окраской, то есть степенью насыщенности гемоглобином.

Особый путь созревания имеют плазмоциты. Они образуются в периферических органах кроветворения (лимфоцитах, селезенке) из зрелых лимфоцитов. Под влиянием чужеродных белков В-лимфоциты превращаются сначала в плазмобласты, а затем – в проплазмоциты и плазмоциты, продуцирующие антитела и обеспечивающие гуморальный иммунитет. Однако в норме в периферической крови плазмоциты (плазматические клетки) не обнаруживаются, а содержатся только в тканях.

VI класс — зрелые клетки крови: В- и Т-лимфоциты, плазматические клетки, моноциты, нейтрофилы сегментоядерные, базофилы, эозинофилы, эритроциты, тромбоциты.

У здоровых людей клетки I-V классов обнаруживаются только в пунктатах кроветворных органов, а в периферической крови циркулируют зрелые клетки VI класса (кроме плазмоцитов) и небольшое количество созревающих клеток V класса – нейтрофилы палочкоядерные и ретикулоциты.

Молодые клетки-предшественники I-IV классов при микроскопии очень похожи, и их принадлежность к тому или иному виду определяют цитохимическими методами. Это имеет особое значение для определения варианта острого лейкоза. Начиная с V класса, клетки приобретают характерные особенности, позволяющие дифференцировать их при световой микроскопии.

Дата добавления: 2014-11-29 ; Просмотров: 2402 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Гематологические анализаторы Устройство и характеристики

Гематологические анализаторы крови широко используются для исследований крови при диагностике и мониторинге заболеваний. Большинство представленных на рынке медицинского лабораторного оборудования автоматических гематологических анализаторов позволяют проводить полный клинический анализ крови с расчетом лейкоцитарной формулы. Сложные и дорогие анализаторы могут оценивать клеточную морфологию и фиксировать клеточные популяции при диагностике редких заболеваний крови.

Принцип работы гематологических анализаторов крови

В основе устройства автоматических гематологических анализаторов лежат три технологии:

• Электрический импеданс
• Проточная цитометрия
• Флуоресцентная проточная цитометрия

Эти три метода предполагают использование химических реагентов, приводящих к лизису или изменения клеток для фиксации измеряемых параметров. Например, электрический импеданс позволяет дифференцировать эритроциты, лейкоциты и тромбоциты по объему. Добавление ядрообразующего агента, который сжимает лимфоциты больше, чем другие лейкоциты, позволяет дифференцировать объем лимфоцитов.

Электрический импеданс

Традиционным методом является метод электрического импеданса, иначе кондуктометрический или также называемый метод Коултера (Культера, Култера, Coulter) по имени его создателя. Этот метод/принцип используется практически во всех гематологических анализаторах.

Суть его состоит в том, что кровь пропускается между двумя электродами через отверстие настолько узкое, что через него может проходить только одна клетка. Импеданс или, проще говоря, проводимость среды изменяется по мере прохождения клеток через отверстие и это изменение пропорционально объему/размеру проходящих клеток. Данная зависимость и позволяет производить их дифференцированный подсчет.

Импедансный анализ позволяет выполнить клинический анализа крови с определением гранулоцитов, лимфоцитов и моноцитов, но он не позволяет различать гранулярные лейкоциты одинакового размера: эозинофилы, базофилы и нейтрофилы.

Скорость автоматического подсчета по данному методу в гематологических анализаторах составляет до 10000 клеток в секунду, и типичный анализ по импедансному методу может быть проведен менее чем за минуту.

Проточная цитометрия

Лазерная проточная цитометрия – более дорогостоящий метод по сравнению с импедансным, поскольку требует более дорогих реагентов, но он позволяет получать детальную картину морфологии клеток крови. Это лучший метод для определения лейкоцитарной пятикомпонентной формулы.

Суть метода состоит в том, что поток образца крови проходит через лазерный луч. Измеряется поглощение луча, а рассеянный свет измеряется под разными углами для определения зернистости, диаметра и внутренней сложности клетки. Это фактически те же самые морфологические характеристики клетки, которые можно определить вручную с помощью микроскопа.

Флуоресцентная проточная цитометрия

Добавление специальных флуоресцентных добавок позволяет расширить применение проточной цитометрии до возможности оценивать специфические популяции клеток. Флуоресцентные красители позволяют оценить соотношение ядро-плазма в каждой окрашенной клетке. Это используется для анализа тромбоцитов, зарождающихся эритроцитов и ретикулоцитов.

Обзор производителей гематологических анализаторов

Производители автоматических гематологических анализаторов крови объединяют в своих приборах эти три технологии с инновационным применением реагентов и методов обработки данных, создавая собственные технологии, каждая из которых имеет свои преимущества с точки зрения точности измерений, скорости их выполнения или набора параметров.

В приборах ADVIA ® фирмы Siemens используется образец пероксидазы для дифференцированного тестирования. С его помощью выполняется самотестирование прибора (внутренний QC тест).

Метод лаурилсульфата натрия, используемый в приборах фирмы Sysmex при определении гемоглобина является нецианидным методом и имеет очень короткое время реакции. Гемоглобин определяется в отдельном канале, при этом минимизируется влияние высоких концентраций лейкоцитов.

Анализатор CELL-DYN Sapphire ® от Abbott использует трехцветную флуоресценцию в сочетании с запатентованной технологией Multiangle Polarized Scatter Separation для обеспечения высочайшей точности при определении лейкоцитарной формулы за счет идентификации клеток с использованием четырех углов рассеяния света.

Что следует учитывать при покупке гематологического анализатора?

Выбор подходящего инструмента будет зависеть от того, где его предполагается использовать: возле постели пациента (прикроватный), в лаборатории для экспресс-диагностики, крупной клинической лаборатории или в исследовательском медицинском учреждении. Разумеется, нужно помнить, что оборудование, используемое в клинических целях, должно иметь соответствующие сертификаты.

Основные характеристики гематологических анализаторов

Вот те параметры, которые необходимо тщательно проанализировать перед тем, как делать выбор:

источник

МЕТОДЫ ОБЩЕГО КЛИНИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КРОВИ

От каждого животного целесообразно готовить 2—3 образца разведенной крови. В пробирку вносят 0,4 мл 3 или 5 %-ного раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (жидкость Тюрка). Капиллярной пипеткой набирают 0,02 мл крови, конец пипетки тщательно протирают вначале увлажненной, а затем сухой ватой или марлей. Переносят кровь в пробирку, осторожно выдувая. Пипетку ополаскивают жидкостью Тюрка. Кровь в пробирке тщательно перемешивают, закрывают и оставляют стоять на 4 мин, периодически перемешивая содержимое.
Счетную камеру предварительно тщательно обезжиривают спиртом, промывают дистиллированной водой и высушивают под феном, протирают мягкой фланелью. Чистое сухое покровное стекло притирают к камере так, чтобы появились радужные кольца. Кровь в пробирке снова перемешивают стеклянной палочкой, берут каплю крови и наносят к краю покровного стекла камеры. Подсчитывают лейкоциты через 1 мин после заполнения камеры, когда осядут клетки крови, пользуясь малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр х Ю) при затемненном поле, для чего опускают конденсор или суживают диафрагму.
Подсчитывают лейкоциты в 100 больших (1600 малых) квадратах.
Расчет. Подсчитанное в 100 больших квадратах число клеток умножают на 50 (разведение крови 1 : 20), получают окончательный результат в тысячах в 1 мкл. Для подсчета клеток в 1 л количество лейкоцитов в 1 мкл умножают на 1000 (10 /л).
При подсчете лейкоцитов в камере соблюдают все те же правила, которые изложены в методике подсчета эритроцитов. Ошибка при подсчете составляет в среднем +7 %.
Наиболее вероятные источники ошибок — травмирование тканей ушной раковины при выжимании, выдавливании крови; неравномерное перемешивание крови; не очень чистый микрокапилляр и др. Каждый лабораторный работник должен выявить собственную ошибку путем многократных анализов одной и той же пробы, включая взятие крови.
Клиническое значение определения в крови эритроцитов и лейкоцитов. Родоначальной клеткой для всех форменных элементов крови является стволовая клетка, которая дает начало общей клетке — предшественника миелопоэза и общей клетке — предшественника лимфопоэза. Из клетки — предшественника миелопоэза в миелоидной системе (костный мозг), проходя определенные стадии дифференцировки, образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зернистые лейкоциты. Из клетки — предшественника лимфопоэза в лимфоидной системе образуются лимфоциты: Т-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции клеточного иммунитета и В-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции гуморального иммунитета.
Кровь здоровых животных содержит зрелые клетки: эритроциты, тромбоциты, лейкоциты (базофилы, эозинофилы, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты) и тучные клетки (цвет. рис. I—VII). Появление незрелых промежуточных клеток миелопоэза (ретикулоцитов, нормоцитов, эритро- бластов, миелобластов, миелоцитов и др.) и лимфопоэза (плазмо- бластов, пролимфоцитов, лимфобластов и др.) свидетельствует о развитии патологии кроветворения.
Эритроциты — мелкие клетки крови, содержащие гемоглобин, благодаря чему способны переносить кислород от легких к тканям и углекислый газ от тканей к легким. Зрелые эритроциты млекопитающих — безъядерные клетки, имеют форму двояковогнутого диска. Эритроциты птиц и низших позвоночных — ядерные клетки элипсовидной формы.
В нефиксированном (нативном) препарате эритроциты выглядят как желтоватые округлые образования. В фиксированных и окрашенных мазках крови они обнаруживаются как круглые клетки розового или серовато-розового цвета с просветлением в центре.
Тромбоциты — кровяные пластинки. Это мелкие, безъядерные клетки крови диаметром 5 мкм в количестве от 200 до 900 тыс/мкл, участвуют в свертывании крови. В окрашенных мазках крови они выглядят как мелкие круглые или овальные образования. При снижении их числа наблюдается кровоточивость, развивается гемофилия.
Лейкоциты — разнообразные по морфологическим признакам и функциям клетки сосудистой системы крови. Они выполняют функции защиты организма путем фагоцитарной активности и участия в формировании гуморального иммунитета, в восстановительном процессе при тканевом повреждении. Лейкоциты, в цитоплазме которых содержится специфическая зернистость, называются зернистыми, или гранулоцитами. К ним относятся нейтрофилы (палочкоядерные, сегментоядерные и юные), эозинофилы и базофилы. Незернистые лейкоциты (агранулоциты) характеризу

ются отсутствием специфической зернистости в цитоплазме и несегментированными ядрами. В группе агранулоцитов выделяют два вида — лимфоциты и моноциты.
Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у взрослых животных в норме приведено в таблице 4.
4. Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у животных

Уменьшение количества эритроцитов — эритроцитопения (олиго- цитемия) встречается при длительном недокорме животных, пост- геморрагической, гемолитической, железодефицитной, гипоплас- тической анемиях, В12 (фолиево)-дефицитной анемии, лейкозах, злокачественных новообразованиях. Олигоцитемия развивается при инфекционной анемии лошадей, гематурии крупного рогатого скота, пироплазмозе, нутталиозе, трипанозомозе, многих острых и хронических инфекционных и инвазионных болезнях, гепатите и гепатозе, хроническом нефрите.
Увеличение количества эритроцитов (полицитемия, эритроци- тоз) встречается при сильной диарее вследствие сгущения крови, при обильном потоотделении, непроходимости тонкого кишечника, сильной мышечной нагрузке.
Нахождение животных на высоте 1400—2000 м и выше над уровнем моря сопровождается повышением содержания эритроцитов в крови.
Увеличение количества лейкоцитов (лейкоцитоз) бывает патологическое и физиологическое. Патологический лейкоцитоз отмечается при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих пневмонию, бронхопневмонию, плеврит, перикардит, ретикулопе- ритонит, перитонит, абсцессы печени, эндометрит и многие другие болезни. Выраженный лейкоцитоз наблюдается при ряде инфекционных болезней, хирургической инфекции, лейкозах, лимфогранулематозе. Лейкоцитоз возникает при отравлениях мышьяком, ртутью, укусах ядовитых насекомых, змей. Увеличение количества лейкоцитов может быть в результате введения больших доз камфоры, калия йодида, белковых препаратов, вакцин, сывороток.
Физиологический умеренный лейкоцитоз бывает при беременности, после физических нагрузок, приема богатой белком пищи (у плотоядных), стрессах.
Уменьшение количества лейкоцитов (лейкоцитопения, лейкопения) может быть результатом угнетения кроветворных органов, истощения их, пониженной реактивности организма; лейкопению отмечают при вирусных болезнях, циррозе печени, поражении селезенки, действии ионизирующей радиации, ряда химических веществ и лекарственных препаратов. Смена лейкоцитоза лейкопенией при воспалительных и гнойно-септических заболеваниях служит показателем понижения резистентности организма, угнетения кроветворения, ухудшения состояния больного животного.
Течение заболеваний, для которых характерна лейкоцитопения, наблюдается у ослабленных, истощенных животных. Лейкоцитопения может быть следствием длительного введения в организм больших доз сульфаниламидов, амидопирина, левомицетина, синтомицина, препаратов ртути, мышьяка, висмута. Она отмечается при алейкемической форме лейкоза, отравлениях ДЦТ и некоторыми другими ядами.
Дифференциальный подсчет лейкоцитов (лейкотрамма). Проводят визуальную микроскопическую оценку сухих фиксированных окрашенных мазков крови с дифференцированным подсчетом лейкоцитов и описанием морфологии эритроцитов.
Лейкограмма выражается как процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов крови.
Морфологическое исследование мазков крови включает следующие этапы: подготовку стекол, приготовление, фиксацию, микроскопическую и морфологическую оценку мазков.
Подготовка пре дметных стекол. Предметные стекла должны быть чистыми, обезжиренными и сухими. Бывшие в употреблении или новые стекла замачивают в эмалированной посуде в стиральном порошке. Старый мазок удаляют ватным тампоном и стекла кипятят в том же растворе 10—15 мин, затем их промывают в проточной воде, насухо протирают и помещают на 30—60 мин в смесь Никифорова (этиловый спирт 9б°%-ный и диэтиловый эфир в соотношении 1:1), после чего протирают насухо чистой тканью и помещают на хранение в посуду с крышкой.
Примечания. 1. Длительное кипячение (более 10 мин) предметных стекол и кипячение их в алюминиевой посуде приводит к помутнению стекол. 2. Полноту отмывки от щелочных средств проверяют качественной реакцией с 0,1%-ным спиртовым раствором фенолфталеина, путем нанесения 2—3 капель на чистое стекло. Появление розового окрашивания свидетельствует о плохой промывке стекол.
Приготовление мазков. Мазки крови готовят на предварительно подготовленных обезжиренных предметных стеклах. Берут за ребра (а не за поверхность) предметное стекло и, отступая 1,5—2 см от узкого конца, наносят на него небольшую каплю крови. Шлифовальным стеклом, которое несколько уже, чем предметное, на которое нанесена капля крови, размазывают последнюю. Для этого шлифовальное стекло узким краем ставят под углом 45° слева от капли, слегка подвигают его вправо, чтобы провести с ней соприкосновение, выжидают, пока капля расплывется по всему ребру, и легким быстрым движением ведут стекло справа налево, пока капля будет исчерпана.
При медленном размазывании ухудшается равномерность распределения форменных элементов в мазке. При нажимании стеклом на стекло многие клетки повреждаются. Если угол между стеклами меньше 45°, то большее количество клеток скапливается в конце мазка. Величина капли должна быть соразмерна тому, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1—1,5 см до его конца. Мазок должен иметь желтоватый цвет. Густо-розоватые и красноватые мазки не пригодны для счета, так как лейкоциты в них деформированы, а эритроциты лежат один на другом. Если была взята слишком большая капля, то после того как она распределилась по ребру шлифованного стекла, последнее приподнимают, переносят на несколько миллиметров влево, вновь ставят на предметное стекло и отсюда начинают делать мазок. Мазок тотчас сушат на воздухе. На сухом мазке по его середине иглой пишут номер или кличку животного, при необходимости и дату взятия крови.
Фиксация мазков. Фиксирующая жидкость вызывает коагуляцию белка и прикрепляет клетку к стеклу. Фиксация придает форменным элементам крови стойкость по отношению к содержащейся в краске воде и препятствует деформации эритроцитов и лейкоцитов.
Реактивы: метиловый спирт (х. ч.) или эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор), или этиловый спирт 96%-ный.
Оборудование: штатив для сушки мазков; пинцет; широкогорлая банка с притертой пробкой или крышкой.
Ход определения. Высохшие на воздухе мазки опускают в широкогорлую банку с крышкой, выдерживают в фиксаторе 5—10 мин, затем извлекают пинцетом и высушивают на воздухе. В этиловом спирте мазки выдерживают не менее 35 мин.
Для фиксации и последующей обработки необходимо отбирать правильно приготовленные тонкие мазки (мазок должен быть желтого цвета, отступать от края широких сторон предметного стекла на 1—3 мм и заканчиваться «метелочкой», не доходя 1,5—2 см до левого узкого края).
Окраска мазков. Оборудование: контейнеры для окраски мазков с кюветами или «рельсы» стеклянные с эмалированными лотками; пинцет; цилиндры или стаканы градуированные; палочки стеклянные; стаканчики химические; бутылки с притертыми пробками.
В строго нейтральной среде структурные элементы клеток крови в азур-эозиновой смеси окрашиваются в различные цвета: щелочные компоненты клетки (цитоплазма) — эозином в розово-красный цвет; кислые (РНК в ядрышках и цитоплазме, ДНК в ядре) — основными красителями в голубовато-синие цвета. Для приготовления красителей и смывания их с мазков используют воду нейтральной реакции. Вода кислой реакции ослабляет действие щелочного элемента красителя (азура II), вследствие чего лейкоциты плохо окрашиваются. Мазки имеют красный цвет за счет красной окраски эритроцитов и ядер лейкоцитов. Вода щелочной реакции ослабляет действие кислого компонента красителя (эозина), поэтому эритроциты окрашиваются в серовато-синий цвет, а ядра лейкоцитов — в очень темные цвета. Для подщелачивания и доведения реакции воды до нейтральной к ней по каплям прибавляют 1%-ный раствор натрия двууглекислого. Щелочную воду нейтрализуют 1%-ным раствором уксусной кислоты. Можно брать дистиллированную и водопроводную воду в различных сочетаниях.
Реакцию воды можно определить с помощью рН-метра или гематоксилина. При использовании гематоксилина к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 2—3 капли свежеприготовленного спиртового раствора гематоксилина. Вода нейтральной реакции окрашивается в бледно-фиолетовый цвет не ранее чем через 1 мин и не позднее чем через 5 мин. Если вода окрасилась раньше чем через 1 мин, значит, она щелочная, а если позднее чем через 5 мин, — кислая.
Окраска по Нохту. Реактивы:

1. основные растворы красителей — азур II, 1 г/л (1,0 г азура II растворяют в 1000 мл дистиллированной воды) и эозин калия,

1. г/л (1,0 г эозина калия растворяют в 1000 мл дистиллированной воды). Растворы готовы к употреблению через 14 дней со дня приготовления, хранят их в посуде темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре;

1. фосфатный буфер или смесь Вейзе (pH 7,4—7,5): калия фосфат однозамещенный безводный (КН2Р04) 0,49 г, натрия фосфат двузамещенный (ЫагНРС^ х 2НгО) 1,14 г или безводный (№2НР04) 0,909 г, дистиллированная вода 1000 мл.

Рабочий раствор готовят перед употреблением, смешивая 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут несколько варьировать и должны быть установлены опытным путем при приготовлении свежей порции основных растворов красителей.
Фиксированные сухие мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с рабочим раствором красителя и выдерживают в нем строго определенное время, подобранное для каждой партии краски, — от 20 до 45 мин. Затем контейнер переносят в кювету с водопроводной водой. После этого мазки ставят вертикально в штатив для сушки.
При отсутствии штатива-контейнера высушенные мазки можно красить на «рельсах», заливая мазок рабочим раствором красителя возможно более высоким слоем (2—3 мл на мазок).
Окраска по Паппенгейму. Реактивы: 1) эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор). При отсутствии заводского раствора готовят 5 г/л раствора сухого красителя в метиловом спирте (х. ч.). Раствор готов к употреблению через 4 дня; 2) рабочий раствор азур-эозина по Нохту.
Сухие нефиксированные мазки помещают в контейнер и опускают в кювету с раствором красителя-фиксатора Май-Грюнвальда на 5 мин. Затем контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой и помещают к кювету с рабочим раствором азур-эозина по Нохту на 8—15 мин. Смывают краску, переносят контейнер в кювету с дистиллированной водой. Мазки высушивают на воздухе.
Окраска по Романовскому—Гите. Реактивы: 1) готовый заводской краситель Романовского—Гимзы (азур-эозиновая смесь);

1. рабочий раствор — 2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Готовят его перед употреблением.

Фиксированные мазки в кювете заливают рабочим раствором красителя Романовского—Гимзы и выдерживают 15—30 мин. Затем мазки промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Продолжительность окраски зависит от качества красителя и температуры воздуха. Чем ниже температура воздуха, тем продолжительнее окраска. Выбор оптимального времени окраски проводят всякий раз, когда начинают использовать новый флакон заводского красителя. Хорошо окрашенные мазки имеют розово-фиолетовый цвет, недоокрашенные — розовато-красноватый, перекрашенные — темно-фиолетовый.
Микроскопическое исследование мазков крови. Реактивы: иммерсионное масло; диэтиловый эфир или этиловый спирт.
Оборудование: микроскоп; осветитель для микроскопа; 11-клавишный счетчик для выведения лейкоцитарной формулы; капельница.
Просматривают мазок крови под малым увеличением микроскопа (объектив х 10, окуляр х7). Подсчет лейкоцитов и оценка морфологии эритроцитов допустимы только в тонкой части мазка, где эритроциты лежат одиночно, а не сложены в «монетные столбики».
На край мазка помещают каплю иммерсионного масла, переводят на иммерсионный объектив (х90). Лейкоциты подсчитывают по зигзагу (по линии «Меандра»), отступя 2—3 поля зрения от верхнего края мазка, в начале в 3—5 полях зрения вдоль края мазка, затем в 3—5 полях зрения под прямым углом к середине мазка, потом в 3—5 полях зрения параллельно краю мазка и вновь под углом 90° возвращаются к краю мазка. Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток, необходимая для выведения лейкограммы. Затем переходят на противоположную сторону мазка и подсчитывают вторую половину клеток. Подсчитывают только целые (неразрушенные) клетки.
В норме в крови выявляются лейкоциты следующих форм: базофилы, эозинофилы, нейтрофилы палочкоядерные и сегментоядерные, лимфоциты, моноциты. При наличии в мазках крови плазматических клеток, незрелых, бластных и труднодифференцируемых форм лейкоцитов их также вводят в лейкограмму, описывают их морфологию.
Одновременно с выведением лейкограммы оценивают морфологию лейкоцитов. Если в анализе крови не было выявлено отклонений от нормы количественного состава форменных элементов крови, а при подсчете 100 лейкоцитов не обнаружено никаких отклонений от нормы ни в лейкограмме, ни в морфологии лейкоцитов, то можно ограничиться подсчетом 100 клеток. Если при этом были выявлены какие-либо отклонения от нормы, то необходимо подсчитывать не менее 200 лейкоцитов.
Лейкограмма дает представление только об относительных величинах. Более объективное представление о составе лейкоцитов крови дает вычисление их абсолютного количества, т. е. содержание каждого вида лейкоцитов в определенном объеме крови.
Для подсчета эритроцитов и лейкоцитов крови, их дифферен- цировки можно пользоваться поточными автоматическими гематологическими цитометрами. Эти приборы позволяют определять гематокрит; количество эритроцитов; рассчитать среднее содержание гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации гемоглобина (г/л) к числу эритроцитов крови (МСН); среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации гемоглобина (г/л) к величине гематокрита (л/л) (МСНС); выделить различные группы клеточных элементов, отличающихся не только по размеру, но и по зернистости. Анализаторы типа БТКБ позволяют подсчитать общее количество лейкоцитов и построить их гистограмму, выделить лимфоциты, моноциты, эозинофилы, гра- нулоциты, а также нетипичные клетки (ядерные эритроциты, сгустки тромбоцитов, лимфобластов, гранулоцитов).
Различные фирмы выпускают автоматические гематологические анализаторы: Н6000, Н1 и Н2 (фирма «Technicon»), STKS («Coulter»), NE 8000 («TOA»), «Sysmex», Cell-Dyn 3000 («Abbott»), Codas Argoss 5DifF («Roche») и др.
Подсчет количества лейкоцитов требует применения в качестве антикоагулянта этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилона В), так как гепарин может интерферировать с лизирующими клетками реагента.
Клиническое значение показателей лейко- граммы. Процесс образования, развития и созревания клеток крови (гемопоэз — кроветворение) у человека и животных происходит в костном мозге, селезенке и в лимфатических узлах. В костном мозге образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зернистые лейкоциты (базофилы, сегментоядерные нейтрофилы); в лимфатических узлах и селезенке — лимфоциты.
При анализе лейкограммы учитывают количество зрелых клеток: базофилов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов. При ряде патологических состояний дают оценку незрелых, молодых форм эритроцитов и лейкоцитов (лимфобластов, промегакариоцитов, мегакариоци- тов, нормобластов, промиелоцитов, миелоцитов, мета-миелоцитов, пролимфоцитов).
Форменные элементы крови здоровых животных различных видов приведены на цветных рисунках I—IV. Нормальные величины количества различных видов лейкоцитов крови у взрослых здоровых животных представлены в таблице 5.
При оценке результатов исследования лейкоцитов учитывают общее их количество, наличие ядерного сдвига нейтрофилов, процентное соотношение лейкоцитов отдельных видов, наличие или отсутствие дегенеративных изменений в клетках.
5. Содержание лейкоцитов в крови здоровых животных различных видов (лейкограмма), %

Появление в лейкограмме молодых и дегенеративных форм нейтрофилов (ядерный сдвиг нейтрофилов) — характерный признак, свойственный инфекционным и воспалительным процессам, злокачественным новообразованиям, различного рода интоксикациям. Различают регенеративный, дегенеративный и лейкемоид- ный ядерные сдвиги. При регенеративном сдвиге увеличивается содержание палочкоядерных и юных нейтрофилов, при дегенеративном — только палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов наряду с дегенеративными изменениями в клетках. Лейкемо- идный сдвиг характеризуется появлением более незрелых форм (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов и др.).
Регенеративный сдвиг наблюдается главным образом при воспалительных и гнойно-септических процессах. Дегенеративный сдвиг — показатель функционального угнетения костного мозга, встречается при интоксикациях (сальмонеллез, острый перитонит, уремическая и диабетическая кома). Лейкемоидные сдвиги являются обычно отражением своеобразной реактивности больного организма при самых различных заболеваниях.
Базофилы — клетки крови диаметром 8—14 мкм, в цитоплазме их имеются крупные базофильные гранулы, содержащие гепарин. Ядро базофилов крупное сегментированное, окрашивается в фиолетово-розовый цвет. Они участвуют в иммунологических реакциях аллергического типа и процессах свертывания крови. В крови встречаются в небольшом количестве.
Увеличение содержания базофилов наблюдается при хроническом миелолейкозе, гипофункции щитовидной железы. Уменьшение содержания базофилов учесть трудно из-за малого их количества в крови.
Эозинофилы — клетки крови размером 8—20 мкм. Отличаются обильной крупной розовой зернистостью, заполняющей всю цитоплазму. Обладают некоторой фагоцитарной и двигательной активностью, участвуют в аллергических реакциях.
Эозинофилия — увеличение содержания эозинофилов. Наблюдают при паразитарных заболеваниях (трихинеллезе, описторхозе, аскаридозе, эхинококкозе и др.), ревматизме, хроническом миелолейкозе, лимфогранулематозе и других злокачественных новообразованиях, ожоговой болезни, обморожении. Появление эозинофилов при воспалительных и гнойно-септических процессах на фоне лимфоцитоза и незначительного ядерного сдвига нейтрофилов является предвестником благоприятного исхода заболевания.
Эозинопения — уменьшение содержания эозинофилов. Отмечают при сепсисе, тяжелых интоксикациях, в агональном состоянии.
Нейтрофилы (палочкоядерные и сегментоядерные) — лейкоцитарные клетки размером 7—15 мкм, обладающие выраженной защитной функцией, связанной с их фагоцитарной и двигательной активностью, способностью вырабатывать бактерицидные (лизо- цим) и антитоксические вещества. Отличительный признак нейтрофилов — мелкая зернистость в цитоплазме. Ядро у молодых клеток не сегментировано и напоминает изогнутую 8-образной формы палочку (палочкоядерные нейтрофилы). В процессе созревания клеток ядро как бы перекручивается, образуя сегменты, соединенные тонкими нитями хроматина (сегментоядерные нейтрофилы). В окрашенных мазках крови цитоплазма нейтрофилов розово-серого цвета (слабооксифильная). Мелкая зернистость в цитоплазме у собак, кошек и свиней окрашивается в розово-фиолетовый цвет, у лошадей и жвачных она воспринимает кислые и основные красители.
Нейтрофилез (нейтрофилия) — увеличение содержания нейтрофилов (палочкоядерных, сегментоядерных). Отмечают при воспалительных процессах (пневмония, перитонит, пиелонефрит, септицемия, плеврит и др.), интоксикациях. Выраженный нейтро- фильный лейкоцитоз с обнаружением молодых форм нейтрофилов, вплоть до промиелоцитов и миелобластов (сдвиг ядра влево), наблюдается при острых пневмониях, тяжелых инфекциях, остром гемолизе. Появление в крови незрелых нейтрофилов (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов) отмечается при миелолейкозе и других злокачественных поражениях (гемобластозах).
Нейтропения — снижение содержания в крови нейтрофилов. Признак падения сопротивляемости организма к инфекциям, воздействия на организм ионизирующей радиации, цитостатических препаратов. Нейтропения обычно совпадает с лейкопенией.
Лимфоциты — клетки крови диаметром от 4,5 до 18 мкм с округлым или овальным ядром, окрашенным в светло-синий или голубой цвет, цитоплазмой с видимым перинуклеарным просветлением (характерный признак). Различают малые, средние и большие лимфоциты. По иммунологическим функциям выделяют Т- и В-лимфоциты.
Лимфоцитоз — увеличение содержания лимфоцитов. Характерный признак хронического лимфолейкоза. Незначительный лимфоцитоз бывает при пневмонии, роже свиней, остеомиелите, сепсисе и некоторых других болезнях и указывает на фазу выздоровления. Лимфоцитоз при агранулоцитозе или лимфатической лейкемоидной реакции — неблагоприятный признак, свидетельствующий о снижении микрофагоцитарной функции организма вследствие истощения гранулопоэза.
Лимфоцитопения — уменьшение содержания лимфоцитов. Встречают при некоторых тяжелых инфекциях, воспалительных и гнойно-септических заболеваниях, и в прогностическом отношении она является неблагоприятным симптомом.
Моноциты — самые крупные клетки (диаметр 10—20 мкм) нормальной крови с круглым ядром бобовидной или подковообразной формы. В патологических случаях ядро может быть сегментировано. Структура ядра нежная сетчатая, в окрашенных мазках бледно-фиолетового цвета, может содержать мелкую зернистость, ва

куоли, зерна пигмента и др. Моноциты фагоцитируют микробные тела, клеточные остатки, различные токсические продукты.
Моноцитоз — увеличение содержания моноцитов. Наблюдают при острых инфекционных заболеваниях, а также при туберкулезе, бруцеллезе, злокачественных опухолях и сепсисе.
Моноцитопения — уменьшение количества моноцитов. Бывает при тяжелых септических процессах и некоторых инфекционных болезнях.
Определение гематокрита с помощью микроцентрифуги. Оборудование: микроцентрифуга МЦГ-8; капиллярные трубки, имеющиеся в комплекте центрифуги (можно использовать капилляры для определения С-реактивного белка). Используют капиллярную или венозную кровь с ЭДТА или гепарином.
Ход определения. При взятии крови непосредственно от животного для предотвращения ее свертывания капилляры обрабатывают антикоагулянтом и высушивают. Если используют кровь с антикоагулянтом, то этого не делают. Заполняют капилляры на 7/8 длины кровью, закупоривают их с одного конца пластилином и помещают в ротор центрифуги так, чтобы закупоренные концы упирались в резиновую прокладку. Центрифугируют 5 мин при 8000 мин *. Определяют гематокритную величину по отсчетной шкале, приложенной к центрифуге.
Определение гематокрита с использованием пипеток Панченкова или градуированных. Оборудование: центрифуга; пипетки Панченкова или другие градуированные микропипетки.
Ход определения. В обработанную антикоагулянтом (или необработанную) пипетку Панченкова с отрезанным верхним концом набирают кровь точно до верхней метки, закупоривают ее, обтягивая резиновым кольцом, и центрифугируют 30 мин при 3000 мин . Для каждой центрифуги устанавливают определенное время работы. Вычитают из 100 высоту столбика эритроцитов и получают гематокритную величину в процентах.
Подобным методом определяют гематокрит в пипетках или пробирках иного типа.
Нормальные величины гематокрита у взрослых животных указаны в приложениях 6 и 7. У молодняка гематокрит ниже, чем у взрослых животных, и имеет некоторую возрастную динамику.
Клиническое значение. Гематокрит — соотношение объема плазмы и форменных элементов крови, выраженное в процентах по объему. Увеличение гематокритной величины отмечают при анемиях и кровопотерях, уменьшение — при сгущении крови. Для объективной оценки лабораторных показателей крови определение гематокрита обязательно.
Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) микрометодом Панченкова. Принцип метода основан на использовании свойств крови, смешанной с раствором цитрата натрия, не свертываться при стоянии, а разделяться на два слоя: нижний — эритроциты и верхний — плазму. Это расслоение происходит с различной скоростью в зависимости от изменения химических и физических свойств крови.
Р е а к т и »: 1,5%-ный раствор натрия цитрата трехзамещен- ного пятиводного. Раствор фильтруют, pH раствора нейтральный или слабощелочной. Реактив нестойкий, при помутнении раствор необходимо заменить.
Оборудование: пробирки размером 10 • 1 см; аппарат Панченкова, состоящий из штатива с гнездами и зажимами для специальных капиллярных пипеток с просветом канала 1 мм. На пипетках нанесена миллиметровая шкала длиной 10 см. Верхнее деление шкалы отмечено «0» и буквой «К» (кровь). Через каждые 10 делений стоят цифры 10, 20, 30 и т. д. до 100; против деления 50 — буква «Р» (реактив). Отверстия концов капиллярных пипеток, вставленных в прибор, герметически закрываются резиновыми прокладками или пробками, и кровь из пипетки не выливается. Капиллярные пипетки и пробирки должны быть хорошо промыты хромовой смесью.
Ход определения. В капиллярную пипетку, предварительно промытую раствором цитрата натрия, набирают этот раствор до метки «Р» и вводят в пробирки размером 10 • 1 см. Затем тем же капилляром набирают 2 раза кровь из ушной вены до метки «К» и вносят ее каждый раз в ту же пробирку. Хорошо смешивают, насасывают в капилляр до метки «0» и, заметив время, ставят в штатив. Через 1 ч отсчитывают по делениям капиллярной пипетки величину оставшегося столбика плазмы.
Расчет. Скорость оседания определяют за 1 ч. Для определения скорости оседания эритроцитов, гематокрита предложено несколько видов устройств. Фирма «Diesse Diagnostica Senese» (Италия) предлагает Vesmatic System — устройство одновременного определения СОЭ в 60 пробах по 1 мкл крови, содержащихся в пластиковых вакуумных пробирках VACUTEG. Фирма «Invitech Ltd» (Англия) выпускает прибор ESRPLUS, который способен определять одновременно в трех пробах капиллярной крови объемом

1. мкл каждая СОЭ, гематокрит, содержание общего билирубина, а также оценивать наличие липемии и гемолиза. Во всех случаях свежую капиллярную кровь исследуют непосредственно после взятия, венозную стабильную — в течение 12 ч при 2—8 °С.

Клиническое значение. Склеиванию эритроцитов крови препятствует их отрицательный заряд, вследствие чего они отталкиваются друг от друга. Ускорению оседания эритроцитов способствуют глобулины, фибриноген, мукополисахариды, содержание которых увеличивается при многих воспалительных процессах, инфекциях, злокачественных опухолях, нефрите и др.
При вертикальном положении пипетки Панченкова у здоровых животных СОЭ равна (мм/ч): крупный рогатый скот 0,5—1,5; овцы, козы 0,5—1,0; лошади 40—70; свиньи 2—9; собаки 2—6; куры 2—3.
Замедление СОЭ отмечается при диарее (тяжелой форме диспепсии молодняка), обильном потении, полиурии, механической и паренхиматозной желтухах, непроходимостях кишечника. Повышение СОЭ наблюдается при большинстве воспалительных процессов, инфекциях, злокачественных опухолях, коллагенозах, нефрите, анемиях.
Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидиым методом. Принцип. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Кровь с антикоагулянтом хранят в течение 24 ч при

1. 8 “С, 8 ч при комнатной температуре — 15—20 °С.

Реактивы: заводской набор реактивов;
трансформирующий раствор (ацетонциангидрин 0,5 мл, калий железосинеродистый 200 мг, натрий двууглекислый 1 г, дистиллированная вода до 1л); стабилен при хранении в посуде из темного стекла в течение 3 мес, при появлении осадка или обесцвечивании раствор к употреблению не пригоден;
стандартный раствор гемиглобинцианида, соответствующий концентрации гемоглобина крови 15 г% при разведении крови в 251 раз.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; пипетки на 0,02 мл; колба мерная на 1 л.
Ход определения. В пробирку вносят 5 мл трансформирующего раствора и 0,02 мл крови (разведение в 251 раз), хорошо перемешивают, оставляют на 10 мин, после чего смесь измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Стандартный раствор измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.
Расчет гемоглобина (г%)проводят по формуле НЬ = Еоп/Ест х 15,
где ?0п — экстинкция опытной пробы; ^ет — экстинкция стандартного раствора; 15 — соответствие стандартного раствора концентрации гемоглобина крови при ее разведении в 251 раз.
Для перевода г% в г/л найденное число умножают на 10.
Метод Сали, предложенный еще в 1895 г., неточен и им в настоящее время пользоваться не рекомендуется.
Определение гемоглобина в крови возможно с помощью бумажных полосок, помещенных на пластиковых подложках в отражательные фотометры, выпускаемых фирмами «Эймс» (США) и др. Исследуемую пробу наносят на реакционную зону диагностической полоски и помещают в прибор, в котором она облучается полихроматическим светом, диффузионно отраженный свет собирается на измерительной системе и после прохождения через интерферирую

щий фильтр измеряется, затем его сравнивают со стандартом. Система контролируется микропроцессором.
Клиническое значение. Гемоглобин — дыхательный пигмент крови, состоит из белка глобина и простетической группы — гема. Глобин по строению близок к альбумину, синтезируется в печени, представляет хелатный комплекс протопарферина с двухвалентным железом.
Основная функция гемоглобина — перенос кислорода от легких к тканям. Гемоглобин участвует в транспорте углекислого газа из тканей в легкие, в поддержании кислотно-основного равновесия в организме, т. е. обладает буферными свойствами. Он способен соединяться с оксидом углерода, образуя карбоксигемоглобин, а также с некоторыми химическими веществами с образованием метге- моглобина. Эти соединения не способны переносить кислород от легких к тканям.
Нормативы содержания гемоглобина у животных приведены в приложениях 5—7.
Снижение количества гемоглобина отмечается при дефицитных анемиях вследствие недостатка железа, меди, кобальта, витамина В12, фолиевой кислоты, белков и других веществ, при хронических интоксикациях, гепатите, гепатозе и других болезнях печени, кето- зе, расстройствах желудочно-кишечного тракта, инфекционных и инвазионных болезнях и других заболеваниях. Умеренное снижение гемоглобина отмечают при алиментарной (железодефицитной) анемии, более выраженное — при массовой кровопотере, гемолитической и гипопластической анемии.
Следует отметить, что снижение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов не всегда протекает параллельно. Чаще количество гемоглобина уменьшается резче, чем число эритроцитов в крови. Однако при ряде заболеваний могут возникать противоположные сдвиги, поэтому необходимо одновременно определять цветовой показатель.
Повышение уровня гемоглобина отмечают при сгущении крови (диарея, обильное потоотделение), непроходимости кишечника, сильной мышечной нагрузке, нахождении животных на высоте 1400 м и выше над уровнем моря.
Определение цветового (цветного) показателя. Цветовой показатель — среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Он характеризует степень насыщения эритроцитов гемоглобином по сравнению с нормой. Цветовой показатель вычисляют путем деления концентрации гемоглобина в 1 мкл крови, выраженной в пикограммах (пк), на число эритроцитов в том же объеме крови.
Цветовой показатель определяют по формуле
х = ЗНв (г/л)
Три первые цифры количества эритроцитов в 1 мкл’
Например, в 1 мкл крови содержится 4 500 ООО эритроцитов, концентрация гемоглобина 120 г/л. В этом случае цветовой показатель будет равен 3 • 120/450 = 0,8.
В норме цветовой показатель равен 1 или близок к ней. Снижение его до 0,8 и ниже (гипохромия) свидетельствует о слабом насыщении эритроцитов гемоглобином, что отмечается при железодефицитной анемии. Увеличение цветового показателя выше 1 (гиперхромия) отмечается при В^- и фолиеводефицитных, ги- попластических анемиях. При острых кровотечениях, хронических лейкозах, некоторых гемолитических анемиях отмечается нор- мохромная анемия, при которой цветовой показатель близок к 1.

источник