Метод проведения общего анализа крови

Метод проведения общего анализа крови

Забор крови, с последующим её исследованием производился у мужчин в возрасте от 20-ти до 35-ти лет, до и после физической нагрузки. В исследовании приняла участие группа из тридцати трёх человек, каждый из которой, после взятия пробы до физической нагрузки, проходил стандартную тренировку в течение часа. В таблице 3 сведены типы и продолжительность упражнений, которым подвергались все испытуемые.

Таблица 3 — типы физической нагрузки, применяемой в исследовании

Тренировка включала в себя 15 минут бега в нормальном темпе (один тридцатиметровый круг в минуту); выполнение комплекса упражнений (подтягивания, отжимания от пола, приседания) в течение 15 минут в ускоренном темпе (20 подтягиваний в минуту, 50 приседаний в минуту, 30 отжиманий в минуту); 30 минутный спарринг в нормальном темпе (20-25 бросков в минуту). По окончанию тренировки вновь бралась проба такого же объёма, у тех же испытуемых, что и до тренировки.

Техника проведения общего анализа крови

Основные этапы выполнения общего анализа крови:

2 приготовление мазков крови;

3 проведение анализов на гематологическом анализаторе;

6 подсчёт лейкоцитарной формулы.

Взятие материала. Кровь для исследования получили путём прокола четвёртого пальца левой руки обследуемого слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. В зависимости от толщины кожи глубина прокола составляет 2-3 мм. Обработанная кожа пальца высыхает несколько секунд. Цель этого «высыхания» — исключить растекание крови по пальцу, а также гемолитического воздействия антисептика на эритроциты. Скарификатор одноразового использования плотно зажимается между указательным и большим пальцами правой руки; производится прокол. Прокол произвели перпендикулярно рисунку кожных покровов пальца, так как в этом случае происходит повреждение нескольких капилляров, ход которых совпадает с ходом линий кожного рисунка. Учитываем, что разрез произведённый параллельно кожным линиям, спадается, что затрудняет забор крови. Первую, выступившую каплю крови удалили ватным тампоном, а последующие были взяты на исследование. Взятую кровь поместили в пронумерованные и обработанные раствором антикоагулянта. Трилоном-Б, пластиковые микрокюветы. На следующем рисунке показаны одноразовые пластиковые микрокюветы, более удобные и безопасные в использовании, чем стеклянные пробирки.

Все манипуляции связанные с забором крови проводились используя стерильные комплекты инструментов для взятия крови (капилляры Панченкова, предметные стёкла, скарификаторы и микрокюветы). Для каждого обследуемого использовалась индивидуальная пара перчаток и стерильных ватных укладок. Все манипуляции проводились в соответствии с требованиями приказа №165 МЗ РБ от 25.11.2002 г «О методах стерилизации и дезинфекции в медицинских учреждениях» [21].

Рисунок 1 — Микрокюветы с раствором антикоагулянта

Приготовление мазков крови. Для изготовления мазка крови использовались тщательно обезжиренные предметные стёкла. Мазок крови готовился шлифованным стеклом с идеально ровным краем, ширина которого была приблизительно на 2-3 мм уже предметного стекла. К куполу свеже выпущенной из прокола капли было сделано прикосновение предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края, не касаясь кожи в месте прокола. Размер капли на стекле не менее 2-3 мм в диаметре. Шлифованным стеклом, приставленным к предметному под углом 45°, быстрым движением справа налево был сделан мазок. Критерием правильности выполненного мазка является его полупрозрачность и желтоватый цвет. Техника приготовления мазка крови представлена на следующем рисунке.

Рисунок 2 — Техника приготовления мазка крови

Проведение анализов на гематологическом анализаторе. Для исследований использовался гематологический анализатор SISMYX-500. Взятую кровь в миниёмкастях тщательно перемешали и поместили в загрузочную часть аппарата. Предварительно была проведена калибровка данного аппарата, которая заключалась в проведении полного анализа микрокюветы с дистиллированной водой. Определение параметров исследуемой крови протекает в автономном режиме, без непосредственного участия человека. По завершению цикла исследования сняли выданные аппаратом результаты [22].

Изображение аппарата SISMYX-500, и момента отбора пробы для анализа, представлены на рисунке 3.

Фиксация мазков крови. Данный этап предохраняет форменные элементы от содержащейся в красителях воды, под влиянием которой в не фиксированных мазках происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов.

Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и тем самым закрепляет препарат на стекле. В качестве фиксирующей жидкости использовали раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду. Высушенные мазки опускались в широкогорлую банку с фиксатором на 3-5 минут. Далее пинцетом мазки были извлечены и высушены на воздухе.

Рисунок 3 — Гематологический анализатор SISMYX-500

Окраска мазков крови. Фиксированные сухие мазки поместили в контейнер, который опустили в кювету с рабочим раствором красителя и выдержали в нём экспозицию в 30 минут.

Затем, контейнер был перенесён в кювету с водопроводной водой, а затем в вертикальный штатив для сушки. В качестве красящего раствора был использован краситель по прописи Романовского-Гимзы. В состав красителя входят: азур-2 (смесь равных количеств азура-1 и метиленового синего) и эозин. Критериями правильности данной окраски являются розово-оранжевые гранулы эозинофилов, светло-розовый цвет эритроцитов, нейтрофильная зернистость фиолетового цвета.

Подсчёт лейкоцитарной формулы производят с помощью иммерсионной системы микроскопа с увеличением Ч630. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Удобный обзор препарата настраивают с помощью микро- и макровинтов. Для регистрации клеток при подсчёте лейкоцитарной формулы использовался счётчик лабораторный СЛ-1.

Это простейший арифмометр снабжённый клавишами, обозначенными буквами для подсчёта соответствующих видов лейкоцитов, изображён на рисунке 4.

Рисунок 4 — Счётчик лабораторный СЛ-1

Подсчёт лейкоцитов производился в тонкой части мазка, где эритроциты располагаются одиночно. Препарат просматривают по зигзагообразной линии («линии Меандра») в количестве 3-5 полей зрения. Когда сосчитано 100 клеток, счётчик издаёт характерный сигнал, что означает окончание подсчёта лейкограммы данного препарата. Подсчитывались только целые, не разрушенные клетки.

Статистическая обработка результатов исследования

Для оценки влияния физической нагрузки на состояние показателей периферической крови использовались результаты общего анализа крови до и после физической нагрузки.

В ходе исследования нами были вычислены среднее арифметическое, стандартное отклонение, стандартная ошибка, коэффициент вариации по продуктивности и устойчивости внимания, а также по показателям темпа выполнения.

Средняя арифметическая вычисляется по формуле:

где Xi — значение признака, варианта;

где x2 — сумма квадратов центральных отклонений, т. е. квадратов разностей между каждым значением и средней арифметической;

n — 1 — число степеней свободы, равное числу объектов в группе без одного.

Ошибка стандартного отклонения:

где у — стандартное отклонение;

м — средняя арифметическая.

В результате обработки полученного материала, был проведён статистический анализ, построены графики зависимости показателей концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, от воздействующего на них фактора физической нагрузки, а также таблицы результатов дисперсионного анализа, для каждого из исследуемых показателей.

Статистическая обработка результатов исследований выполнена с использованием прикладных программ MS Excel 2007 и Statistica for Windows 6.0. Оценка достоверности различий осуществлялась на основе критерия Фишера. Влияние физической нагрузки на показатели крови оценено методом однофакторного дисперсионного [23].

источник

Методы исследования крови

Как выглядит кровь и что такое кровотечение знают все. А вот информацией, зачем она нужна, обладает далеко не каждый человек. Давайте попробуем разобраться с этим вопросом и рассмотреть в общих чертах методы самых важных и распространенных лабораторных исследований этой единственной жидкой ткани организма.

Функции крови

Итак, для чего нужна человеку кровь?

На кровь возложены многочисленные задачи по:

• транспортировке кислорода и углекислого газа;
• доставке различных питательных веществ к клеткам тела;
• выведению вредных и ненужных продуктов обменных процессов,
• регуляции температуры тела;
• защите от болезнетворных организмов;
• поддержке баланса электролитного и кислотно-щелочного равновесия;
• поддержке формы тканей за счет наполнения сосудистого русла.

Вот далеко не полный перечень функций крови у человека. Состоит она из жидкой части – плазмы (60%) и форменных элементов (40%), выполняющих множественные задачи в организме.

Важно: детальное исследование клеток и элементов крови может рассказать врачу об очень многих изменениях в теле человека. Именно поэтому существует большое количество способов анализа крови. Постараемся разобраться с их основным набором.

Забор крови для обследования производится из пальца (капиллярная кровь) или путем внутривенной инъекции. В некоторых случаях проводят исследование крови, излившейся в полость (грудную, брюшную), также проводятся анализы выделений на скрытую кровь (кал, моча, рвотные массы).

Гематологический анализ крови

К этому виду диагностики относится общий (клинический) анализ крови.

С его помощью определяется:

• количество красных кровяных телец (эритроцитов), находящегося в них гемоглобина со всеми его фракциями;
• гематокритный показатель (отношение форменных элементов к объему);
• подсчет лейкоцитов (белых кровяных клеток, играющих защитную роль), лейкоцитарной формулы, по изменению которой можно заподозрить множество заболеваний и патологических состояний;
• количество эозинофилов, позволяющее делать выводы об аллергизации организма и наличия некоторых специфических инфекций.
• число тромбоцитов – увеличение или уменьшение которых указывает на состояние свертывающей системы.

Биохимический анализ крови

Это самый информативный вид исследования.

Он позволяет определить у обследуемого:

• уровень содержания глюкозы (анализ крови на сахар), играющий важное значение в диагностике сахарного диабета и других заболеваний с нарушением обмена этого углевода;
• холестерин – обязательный для клеток компонент, входящий в структуру клеточных мембран, выполняющий роль регулятора мембранной проницаемости. Избыточное его количество свойственно атеросклеротическим процессам, приводящим к инфарктам и инсультам. Недостаток его встречается при некоторых наследственных болезнях. Оценивается не только содержание чистого холестерина, но и его транспортных комплексов – липопротеинов;
• триглицериды, повышение которых свойственно при ожирении, или наоборот, голодании, большой кровопотере, анемии, эндокринных расстройствах, болезнях почек, отравлениях и алкоголизме;
• белки, в частности альбумины, повышающиеся при воспалениях, глобулины, часть которых увеличивается при недостатке железа. С-реактивный белок – показатель острой фазы воспалительной реакции. Иммуноглобулины – обнаружение которых свидетельствует о реакциях, связанных с аллергией, белки системы свертывания крови. Появление некоторых видов белков, а также нарушение их соотношения может свидетельствовать о целом ряде заболеваний;
• остаточный азот. Азотемия – повышение содержания встречается при обезвоживании, при болезнях почек, туберкулёзе, сахарном диабете, цирротических изменениях печени, воспалений лёгких;
• ферменты плазмы крови. Аминотрансферазы – аспартатаминотрансфераза (АСаТ), аланинаминотрансфераза (АЛаТ). Активность их нарастает преимущественно при болезнях сердца и печени. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ), креатинкиназа – позволяют определять фазу течения инфаркта миокарда. Также диагностическое значение имеют и другие ферменты, более подробно о которых написано в статье о биохимическом анализе крови;
• пигменты. Самый важный среди них – билирубин. Определение его величины позволяет проводить диагностику болезней печени;
• калий — уменьшение содержание этого элемента в крови свидетельствует об обезвоживании, длительном применении мочегонных препаратов, заболеваниях почек, обменных болезнях. Увеличение калия наблюдается при тяжелых травмах, ожогах;
• натрий — снижается в анализе из-за недостаточного поступления с пищей, при обильной потере жидкости, ожогах, потоотделении, поносах, рвоте, приеме мочегонных. Увеличение наступает при сердечных проблемах, повышенном артериальном давлении, почечной недостаточности;
• кальций, фосфаты — отклонение от нормы этих элементов бывает при различных патологиях – нарушениях обмена веществ, рахите, проблемах всасываемости в ЖКТ, почечной недостаточности и т.д.;
• кислотно-щелочное состояние (КОС). По степени изменения этого показателя можно обнаружить состояние алкалоза и ацидоза в организме.

Иммунологический анализ крови

Обнаружение некоторых видов лимфоцитов и иммуноглобулиновых комплексов и анализ крови на антитела позволяют делать выводы о состоянии защитных сил организма. Лимфоциты участвуют в реакциях распознавания чужеродных антигенов (токсинов микроорганизмов и чужеродных веществ), а также в выработке антител (белковых образований, иммуноглобулинов), участвующих в нейтрализации ядов.

Обратите внимание: иммуноглобулины, специфические белки, антитела, находясь на мембранах лимфоцитов, в сыворотке крови и в тканевой жидкости, выполняют функции обезвреживания чужеродных бактерий, вирусов и ядов.

Иммуноглобулины делятся на 5 классов (А,M,G,D,E,).

Каждый класс выполняет присущие ему задачи:

• иммуноглобулин А (Ig A) осуществляет защиту слизистых оболочек;
• иммуноглобулин M (Ig M) характеризует начало патологического процесса;
• иммуноглобулин G (Ig G) появляется как остаточный ответ иммунных сил на болезнетворное начало и может сохраняться повышенным всю жизнь;
• иммуноглобулин Е (IgE) увеличивается при наличии паразитов;

Функции иммуноглобулина D находятся в фазе научного исследования.

Виды основных иммунологических методик исследования крови:

• определение групп крови и резус-фактора;
• определение реактивности (чувствительности) к неспецифическим возбудителям – реакция гемолитической активности (связывания) комплемента, содержания в крови некоторых факторов воспалительных реакций, определение белков острой фазы, разновидностей интерферона. Анализ фагоцитарной способности клеток белой крови;
• анализ специфических иммунных ответов, проводится путем обнаружения разных видов Т и В лимфоцитов, отвечающих за иммунные реакции на клеточном уровне. Также исследуется количественный и качественный состав иммуноглобулинов, принимающих участие в гуморальном виде иммунитета, иммунные комплексы;
• обнаружение С-реактивного белка, ревматоидного фактора и активности антистрептолизина, позволяющих проводить диагностику группы ревматических заболеваний;
• серологические анализы – позволяют осуществлять диагностику сифилиса при помощи реакции микропреципитации (РМП), группы вирусных гепатитов, определения сальмонеллеза, дизентерии, тифа, дифтерии и др. специфических инфекций (реакция пассивной гемагглютинации и связывания комплемента).

Бактериологические анализы крови

Эти виды диагностики предусматривают забор крови и посев ее на различные питательные среды с последующим инкубированием от 10 дней до 6 недель. Результат позволяет обнаружить наличие в крови болезнетворных и условнопатогенных микроорганизмов – стафилококков, стрептококков, клебсиелл, сальмонелл и других бактерий.

Паразитологические виды исследования крови

Разработаны для обнаружения в крови простейших – возбудителей малярии, лейшманиоза, токсоплазмоза, возвратного тифа и других паразитических заболеваний, вызывающихся одноклеточными организмами.

Исследование системы свёртывания (гемостаза)

Анализы этой группы важны в хирургии, гинекологии, травматологии, комбустиологии, (медицинская специальность, занимающаяся лечением ожогов), ангиологии (болезни сосудистой системы).

Диагностика свертывания состоит из определения:

• времени сворачиваемости крови, длительности и объема капиллярного кровотечения;
• пробы на ломкость капилляров;
• тромбоцитов, количества, размеров, агрегационно-адгезивных возможностей, тромбоцитарных факторов;
• время плазменной рекальцификации;
• дефицита факторов свертываемости;
• основных физиологических антикоагулянтов.

Также оценивается состояние фибринолиза (способности крови к растворению сгустков). Эти показатели очень важны в практике кардиологии (при инфарктах миокарда), в неврологии (при инсультах головного мозга).

Анализы крови на онкомаркеры

Этими анализами определяются специфические вещества, которые выделяются опухолями. Также онкомаркерами могут выступать клетки, выделяемые нормальными тканями в ответ на наличие онкологического процесса. Чем выше содержание этих веществ, тем вероятнее наличие опухоли.

Важно: онкомарекры могут повышаться и при других болезнях, поэтому не всегда являются главным диагностическим критерием при обнаружении патологии.

При увеличении уровня необходимо проходить дополнительное исследование.

Обратите внимание: онкомаркеров обнаружено большое количество и идут дальнейшие научные разработки, усовершенствование методик определения.

Анализы крови, применяемые для исследования функций органов

При заболеваниях щитовидной железы определяют уровни выработки гормонов. Оценивается содержание трийодтиронина, тетрайодтиронина и тиреотропного гормона. Уровень их показателей помогает в диагностике таких заболеваний как тиреоидиты, диффузный токсический зоб, гипотиреоз и гипертиреоз. Анализы крови на гормоны щитовидной железы являются очень ценными для диагностики этих болезней.

Ниже указаны нормы минимального и максимального уровня гормонов в крови:

источник

Методы анализа крови: общего и биохимического

Наиболее информативной лабораторной диагностикой состояния организма человека являются анализы крови. Они применяются практически во всех областях медицины при диагностировании многих заболеваний, проведении профилактических осмотров, контроле проводимой терапии. Какие же методы анализа крови используются при этом? Конечно, рассмотреть все существующие методы исследования крови достаточно трудно, так как их существует очень много. Поэтому, рассмотрим методики проведения исследований наиболее часто встречающихся анализов крови.

Методы общего анализа крови

Общий анализ крови дает возможность врачу оценить общее состояние здоровья человека, определить наличие воспалительного процесса, инфекционных и паразитарных заболеваний, патологий кроветворения в организме. В ходе его проведения определяют много показателей, изменения значений которых могут указывать на те или иные проблемы со здоровьем.

Микроскопическое исследование

Основным методом общего анализа крови является микроскопическое исследование. В ходе его проведения врач-лаборант производит подсчет клеток крови (лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов) и оценивает их форму. Объект анализа при данном методе – высушенный и окрашенный мазок крови. Микроскопическое исследование имеет большую диагностическую ценность. В то же время, если рассматривать каплю крови, то информационность микроскопии значительно увеличивается. Причиной высушивания мазка, при котором деформируются клетки крови, является содержание кровяными клетками большого количества воды. Вода слабо поглощает свет, в результате чего клетки становятся прозрачными под микроскопом.

Метод фазо-контрастной микроскопии

Дает возможность увидеть живые кровяные клетки. Метод основан на регистрации разницы изменения фазы проходящих лучей света клетками крови. С помощью метода фазо-контрастной микроскопии можно получить четкое контрастное изображение структуры клеток крови, наблюдать особенности их поведения, выявлять в плазме крови кристаллы многих соединений и живые клетки микроорганизмов. Данный метод анализа крови дает возможность оценить поведение эритроцитов (их подвижность, способность объединяться), рассмотреть процесс агрегации (объединения) тромбоцитов. Кроме того, при таком методе исследования в плазме крови обнаруживают клетки бактерий, грибов, включения, которых не должно быть в норме, например, кристаллы мочевой кислоты или холестерина.

Методы биохимического анализа крови

Биохимический анализ крови (биохимия крови) назначается с целью оценки состояния отдельных органов, систем и тканей организма, определения дефицита витаминов и микроэлементов. Чаще всего его применяют в диагностике заболеваний печени, почек, пищеварительной системы, сердечно-сосудистой системы.

В биохимическом анализе крови можно исследовать больше 40 показателей. В каждом конкретном случае врач назначает пациенту, какие именно показатели биохимии крови необходимо исследовать.

Основными методами биохимического анализа крови являются биохимические реакции. После проведения необходимой реакции кровь исследуют с помощью специальной аппаратуры, например, фотоэлектроколориметра. Для проведения расчетов часто используют построение специальных калибровочных графиков. Во время исследования биохимии крови применяются химические реактивы, необходимые приборы.

Специфика методов биохимического анализа крови требует точного соблюдения этапов проведения химических реакций, профессионализма врачей-лаборантов.

Метод ИФА в анализе крови

Иммуноферментный анализ (ИФА) крови – это лабораторное определение в крови антител и антигенов. Данный метод анализа бывает качественным (показывает отсутствие или наличие антигенов и антител) или количественным (определяет количество антител или антигенов).

На чем же основан данный метод анализа крови? В случае попадания в организм человека чужеродных микроорганизмов (антигенов) его иммунная система начинает вырабатывать к ним антитела (иммуноглобулины). Это специфические белки, которые имеют способность связываться с определенным антигеном, образовывая комплекс антиген-антитело. Такой комплекс во время проведения ИФА метода анализа крови определяют качественно и количественно.

Расшифровка

В расшифровке анализа крови методом ИФА различают антитела трех классов – иммуноглобулины IgA, IgM и IgG. Они появляются в крови в разные промежутки времени от момента инфицирования.

Иммуноглобулины IgM появляются в крови самыми первыми, примерно на пятые сутки после начала болезни. Определить антитела этого класса можно в течение 5-8 недель с момента инфицирования, после чего они исчезают. Также иммуноглобулины класса IgM часто вырабатываются в период обострения хронического заболевания.

Иммуноглобулины класса IgG можно выявить ИФА методом анализа крови через 3-4 недели от попадания инфекции в организм. После этого они могут оставаться в крови на протяжении нескольких месяцев или лет. Если две пробы, последовательно взятые через две недели, показывают повышение количества иммуноглобулинов IgG, можно говорить о текущем инфекционном заболевании или реинфекции (повторное инфицирование той же инфекцией после выздоровления). Данный класс антител обеспечивает иммунитет после вакцинации или перенесенной болезни.

Согласно расшифровке анализа крови методом ИФА через 2-4 недели после заражения или обострения болезни в крови определяются иммуноглобулины класса IgA. Большее количество данных антител находится в секрете слизистых оболочек, а около 20% их циркулирует в крови человека. Исчезают иммуноглобулины IgA из кровотока через 2-8 недель после излечения. Их исчезновение является критерием выздоровления. В случае, когда после окончания болезни ИФА метод анализа крови выявил наличие антител класса IgA, говорят о хроническом течении инфекционного заболевания.

Приведем расшифровку анализа крови методом ИФА, в которой (+) означает положительный результат, (-) означает отрицательный результат.

• IgA (-), IgM (-), IgG (-) – иммунитет к инфекции отсутствует.
• IgA (-), IgM (-), IgG (+) – наличие постинфекционного или поствакцинального иммунитета.
• IgA (+), IgM (+), IgG (+) – острая инфекция.
• IgA (-), IgM (+), IgG (-) – острая инфекция.
• IgA (+), IgM (+), IgG (+) – хроническая инфекция в стадии обострения.
• IgM (-) – выздоровление.

Применение

ИФА метод анализа крови дает возможность определять не только содержание отдельных белков (антител, гормонов, ферментов), но также их взаимодействие. Кроме того, с помощью данного метода исследования крови можно определять специфичность нужных антител, следить за их образованием, идентифицировать белки. Все это дает возможность врачу не только диагностировать заболевание, но и следить за процессом его протекания, контролировать эффективность проводимой терапии.

Метод ИФА активно применяют в диагностике вирусов: возбудителей гриппа и парагриппа, аденовируса, энтеровируса, риновируса, метапневмовируса, коронавируса.

источник

Техника проведения общего анализа крови

2.1. Техника забора крови и подготовки
образца крови для исследования

Шаг А. Подготовка растворов, пробирок и другого инструментария (табл. 1).

Таблица 1. Необходимые подготовительные процедуры при проведении общего анализа крови

Забор крови из мякоти пальца (капиллярная кровь).

Тщательно протирают кожу мякоти пальца ватным шариком, смоченным спиртом, делают укол стерильным копьем до упора. Первую выступившую каплю крови вытирают сухим ватным шариком; из следующих капель, выступающих из мест укола при легком надавливании, быстро набирают необходимое количество крови: для СОЭ, для определения гемоглобина, для определения числа эритроцитов, для определения числа лейкоцитов, для исследования лейкоцитарной формулы, для определения тромбоцитов.

Забор крови из вены (венозная кровь).

Накладывают жгут на 8–10 см выше локтевого сгиба. Обрабатывают кожу локтевого сгиба над обнаруженной по характерному вздутию вены шариком, смоченным спиртом или другим антисептиком. В вену вводят иглу с подсоединенным шприцем и набирают необходимое для анализа количество крови. Кровь осторожно (не вспенивая, так как при этом происходит разрушение эритроцитов и других клеток крови) выпускают в пробирку с порошком ЭДТА или другим антикоагулянтом. Пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают кровь для распределения антикоагулянта, опрокидывая пробирку сначала пробкой вниз, затем пробкой вверх. В настоящее время используются специальные системы для забора крови и ее одновременного помещения в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. Предпочтение исследования венозной крови связано с возможностью одновременного получения объема крови, необходимого для разных анализов.

Шаг В. Внесение крови в подготовленную лабораторную посуду

Кровь вносят в подготовленную посуду специальным капилляром объемом 20 мкл согласно приведенным в табл. 2 разведениям в указанном выше порядке. Набирают ее капилляром до метки 0,02 из мест укола в мякоти пальца или пробирки с венозной кровью, кончик капилляра промокают фильтровальной бумагой, выдувают кровь в соответствующую пробирку и промывают капилляр (путем заполнения капилляра и выдувания раствора) в реактиве той же пробирки для максимально полного внесения образца крови.

Таблица 2. Объемы крови для определения показателей общего анализа крови

Затем для последующего определения лейкоцитарной формулы каплю крови наносят на край обезжиренного предметного стекла и быстро готовят тонкий мазок с помощью шлифованного стекла, краем которого быстрым движением продвигают каплю крови по предметному стеклу.

Таким образом, после выполнения шага В для исследования образца крови имеются 4 пробирки со смесью крови и соответствующего реактива и приготовленный тонкий мазок крови на предметном стекле, необходимые для дальнейших диагностических процедур с использованием специального оборудования (табл. 3).

Таблица 3. Оборудование и методы определения основных показателей общего анализа крови

2.2. Техника определения показателей
общего анализа крови

источник

Техника взятия крови для общего клинического анализа.

Взятие крови для общего клинического анализа крови производят путем укола в мякоть IV пальца левой руки или мочку уха. Для укола палец обрабатывают ватным шариком, смоченным раствором антисептики, чаще всего септоцида. Укол лучше производить сбоку, где более густая капиллярная сеть, на глубину 2-3 мм в зависимости от толщины кожи. Кровь из ранки должна вытекать свободно, так как при сильном надавливании на палец возможно примешивание тканевой жидкости, приводящее к искажению результатов.

Не рекомендуется брать кровь сразу после физической и умственной нагрузки, приема медикаментов, физиотерапевтических процедур, диагностических манипуляций. Необходимо производить забор крови натощак. Повторные исследования желательно проводить в одни и те же часы, поскольку морфологический состав крови подвержен колебаниям на протяжении суток.

Для исследования гемограммы используют пробирочный метод взятия крови. Точная дозировка крови и разводящих жидкостей достигается с помощью калиброванных пипеток и дозаторов.

Общий клинический анализ крови включает определение следующих компонентов:

3) индексы красной крови (цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците);

4) скорость оседания эритроцитов (СОЭ);

6) осмотическая резистентность эритроцитов и их диаметр;

7) количество ретикулоцитов;

8) количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула;

2. Методика определения концентрации гемоглобина, количества эритроцитов и ретикулоцитов. Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Диагностическое значение. Гематокритное число.

Предложено много методов определения концентрации гемоглобина. Важнейшие из этих методов – колориметрические. Чаще колориметрируют цветные производные гемоглобина: хлорид гематина, цианметгемоглобин, карбоксигемоглобин и др. Концентрацию гемоглобина измеряют фотоэлектроколориметрами, приборами ГФ-2 и ГФ-3, гемоглобинометрами при автоанализаторах.

Унифицированным является цианметгемоглобиновый фотометрический метод. Он основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (раствора Драбкина), содержащего железосинеродистый калий и цианид калия. Концентрацию цианметгемоглобина измеряют фотометрически, а расчет количества гемоглобина производят по калибровочному графику.

Гематиновый метод Сали основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина (хлоргемин) коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. В настоящее время этот метод не имеет широкого применения.

В норме концентрации гемоглобина составляет:

Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается у людей, живущих в условиях высокогорья, при обезвоживании у работников горячих цехов, после обильной рвоты и при диарее, при массивных ожогах, при эритремии и др.

Уменьшение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях, а так же при обильном употреблении жидкости, гемодилюции лекарственными инфузионными средствами и др.

Определение количества эритроцитов крови выполняется следующими методами:

1. Подсчет эритроцитов в счетной камере с сеткой Горяева.

Принцип метода: в строго определенном объеме каме­ры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производят перерасчет полученного результата на 1 мкл крови. С целью уменьшения количества клеток, подлежащих подсчету, кровь предварительно разводят в смесителях или пробирках.

1) смесители (меланжеры) или пробирки для разведе­ния крови;

2) 3 % раствор хлорида натрия или жидкость Гайема для разведения эритроцитов (ртути хлорид — 0,5 г; натрия сульфат — 5,0 г; натрия хлорид — 1,0 г; вода дистиллиро­ванная — до 200 мл);

Смесители представляют собой капиллярную пипетку с резервуаром, содержащим бусинку, способствующую смешиванию крови с жидкостью для разведения. На сме­сителе нанесены метки: одна — 0,5, другая — перед входом в резервуар — 1,0, третья — у выхода из ампулы — 101. При набирании крови в пипетку до метки 0,5 она будет разве­дена в 200 раз, до 1,0 — в 100 раз.

Счетная камера представляет собой стеклянную плас­тинку с выгравированной или наклеенной сеткой Горяе­ва. Обычно на одной пластинке имеются две сетки, разде­ленные между собой глубокой канавкой, что позволяет ис­пользовать одну сетку для подсчета эритроцитов, а другую — для подсчета лейкоцитов. По краям сеток находятся воз­вышения, к ним притираются покровные стекла, которые образуют верхнюю границу камеры. Притирать покров­ные стекла нужно очень плотно до появления радужных колец (так называемых колец Ньютона), ибо только в этом случае будут соблюдены необходимые высота (1/10 мм) и объем счетной камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15 х15), 25 из которых раз­делены на малые, по 16 в каждом. Каждая сторона малого квадрата равна 1/20 мм, а так как высота камеры состав­ляет 0,1 мм, то объем счетной камеры, ограниченной од­ним малым квадратом, будет равен 1/4000 мм 3 .

Ход исследования: в сухую чистую пробирку или сме­ситель отмеривают раствор хлорида натрия или жидкость Гайема. Пипеткой от гемометра Сали набирают кровь из пальца, вытирают кончик пипетки марлей или фильтро­вальной бумагой, выдувают кровь на дно пробирки с жидкостью для разведения. Подготавливают камеру Горяева. Затем концом круглой стеклянной палочки или пастеровской пипеткой наносят каплю разведенной кро­ви на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

Интерпретация полученных данных. Подсчет эрит­роцитов производят спустя 1-2 мин после заполнения ка­меры (когда эритроциты осядут на дно камеры) при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр — 10х или 15х) и при затемненном поле зрения (при опущенном кон­денсоре или прикрытой диафрагме). Считать эритроциты необходимо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких, расположенных по диагонали. Подсчету подлежат все эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, и те, кото­рые находятся на левой и верхней линиях. Эритроциты, расположенные на правой и нижней линиях, не считают, так как они будут учтены в следующем квадрате.

Количество эритроцитов в 1 мкл (мм 3 ) крови высчиты­вают по следующей формуле:

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови; А — количество форменных элементов, сосчитанных в опреде­ленном количестве малых квадратов (для эритроцитов — в 80); Б — количество сосчитанных малых квадратов (80); В — степень разведения крови (для подсчета эритроцитов -100 или 200); 4000 — величина, умножая на которую, мы получаем количество клеток в 1 мкл (1 мм 3 ), так как объ­ем 1 маленького квадрата равен 1/4000 мм.

Для перевода в систему СИ (пересчет на 1 л крови) по­лученную цифру умножают на 10 6 (или количество целых единиц умножают на 10 12 ).

Методика подсчета эритроцитов в счетной камере дос­таточно точна (ошибка может достигать 2,5 %), но весьма трудоемка. Ошибки могут быть обусловлены: образовани­ем сгустка, недостаточным количеством подсчитанных квадратов, несоблюдением условий, обеспечивающих правильную высоту счетной камеры (притирание покров­ных стекол без образования радужных колец), неравно­мерным заполнением камеры (образование пузырьков воздуха), подсчетом эритроцитов без выжидания 1-2 мин (эритроциты не успевают осесть и результат оказывается заниженным), плохо вымытыми смесителем и счетной ка­мерой, недостаточной квалификацией лаборанта, выпол­няющего исследование.

2. Фотометрический метод подсчета количества эритроцитов – основан на фотометрическом измерении степени погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов. Процент задержанного света прямо пропорционален числу эритроцитов. Для этого используют приборы типа эритрогемометров и электрофотоколориметры.

3. Электронно-автоматический метод. Используются приборы автоматического счета частиц крови, работающие по импульсному и сцинтиляционному принципу (счетчики «Целлоскоп» и «Культер», автоанализаторы «Техникон»).

Нормальное количество эритроцитов:

— у женщин 3.7 – 4.7 х 10 12 /л;

— у мужчин 3,9 — 5,1 х 10 12 /л.

Увеличение количества эритроцитов наблюдается:

1) при эритремии (абсолютный первичный эритроцитоз);

2) при гипоксии: обструктивная вентиляционная недостаточность, при наличии альвеолярно-капиллярного блока – фиброзирующий альвеолит и легочные васкулиты, врожденные пороки сердца с шунтом справа налево и др;

3) при гемоглобинопатиях (наследственные заболевания, характеризующиеся наличием в эритроцитах аномальных гемоглобинов);

4) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с повышенной продукцией эритропоэтинов (рак почек, гидронефроз и поликистоз почек, рак печени и др.);

5) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с избытком адренокортикостероидов или андрогенов (феохромоцитома, синдром и болезнь Иценко-Кушинга, гиперальдостеронизм);

6) при относительных эритроцитозах вследствие обезвоживания, стрессов, алкоголизма, повышенной физической нагрузки, проживания в условиях высокогорья и др.

Уменьшение количества эритроцитов характерно для анемий различного происхождения. От истинной анемии, характеризующейся абсолютным уменьшением эритроцитарной массы, нужно отличать анемию (эритроцитопению) вследствие гидремии (снижение гематокрита из-за увеличения объема плазмы).

Уменьшение количества эритроцитов (анемия, эритроцитопения) наблюдается при постгеморрагических анемиях, анемиях вследствие недостаточного кровеобразования (железодефицитная, витамин-В12- и фолиеводефицитная), анемиях в результате усиленного распада эритроцитов (гемолитические), железоперераспределительных и метапластические (при опухолевых заболеваниях крови) анемиях и др.

Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците.

Под индексами красной крови понимают среднее содержание гемоглобина в одном эритроците и цветовой показатель.

Определение среднего содержания гемоглобина в одном эритроците производят делением концентрации гемоглобина на число эритроцитов в одинаковом объеме крови. В норме 1 эритроцит содержит 33 пг гемоглобина (допустимые колебания 27-34 пг).

Величину 33 пг условно принимают за единицу (норма содержания гемоглобина в одном эритроците) и обозначают как цветовой показатель.

Цветовой показатель отражает насыщение эритроцита гемоглобином.

Вычисление цветового показателя (ЦП) производят по формуле:

три первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

ГЕМОГЛОБИН (в условных единицах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

В норме цветовой показатель равен 0,85 – 1,05.

Индексы красной крови важны для суждения о нормо-, гипер-, гипохромии эритроцитов.

Гиперхромия – увеличение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее цветовой показатель выше 1.05, зависит исключительно от увеличения объема эритроцитов, а не от повышенного насыщения их гемоглобином, так как нормальный эритроцит насыщен гемоглобином до предела. Гиперхромия характерна для мегалобластных анемий, обусловленных дефицитом витамина В₁₂ и фолиевой кислоты.

Гипохромия – уменьшение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее ЦП ниже 0.85, может быть так же следствием уменьшения объема эритроцитов. Гипохромия служит истинным показателем или дефицита железа в организме, или железорефрактерности. Гипохромия наблюдается при хронических кровопотерях, железодефицитных и железорефрактерных анемиях, свинцовой интоксикации и др.

Нормохромия – это нормальное содержание гемоглобина в эритроците (ЦП -0,85-1,05). Нормохромные анемии развиваются при равномерном уменьшении содержания эритроцитов и количества гемоглобина и наблюдается в случаях острых кровопотерь, при гипопластической анемии, при гемолизе.

Гематокрит (гематокритное число) – дает представление о соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов крови. Определяется с помощью следующих методов.

1. Метод центрифугирования в гематокритной трубке.

2. Электронно-автоматический метод (с помощью аппаратов «Целлоскоп» и «Культер»).

Нормальные величины гематокрита:

Гематокритное число учитывается при диагностике полицитемических и олигоцитемических состояний.

Ретикулоциты – это молодые эритроциты, содержащие базофильную субстанцию в виде сеточки, представленную агрегированными рибосомами и митохондриями. Сеточка обнаруживается при прижизненной окраске мазков крови 1% раствором бриллианткрезил синего. Подсчет производится под иммерсионным объективом по отношению к 1000 эритроцитов.

В норме содержание ретикулоцитов в периферической крови составляет 2-10º/○○ (0,2-1,2%). Ретикулоцитоз отображает степень регенераторной способности костного мозга. При гемолизе, кровопотерях эритропоэз в нормальном костном мозге активизируется, и число ретикулоцитов в нем и в периферической крови возрастает. Отсутствие роста ретикулоцитов в выше указанных ситуациях свидетельствуют о пониженной функции костного мозга.

Ретикулоцитоз при отсутствии анемии говорит о скрытых, но хорошо компенсированных потерях крови. Высокий ретикулоцитоз наблюдается при адекватном лечении витамин-В₁₂-дефицитной анемии.

3. Методика определения осмотической резистентности эритроцитов и диаметра эритроцитов. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Диагностическое значение.

Резистентность – свойство эритроцитов противостоять разрушительным воздействиям: тепловым, осмотическим, механическим и др. В клинике наибольшее значение приобрело определение осмотической резистентности.

Принцип метода состоит в том, что эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются, а в гипотонических – набухают. При значительном набухании наступает гемолиз.

В пробирках готовят растворы хлорида натрия различной концентрации (от 0.70 до 0.22%), затем вносят в них один и тот же объем крови (0.02 мл) и оставляют на час при комнатной температуре. Через час пробирки центрифугируют и определяют начало гемолиза по легкому порозовению раствора и полный гемолиз – по интенсивной красно-лаковой окраске раствора.

В норме минимальная резистентность у взрослых людей колеблется между 0,48% и 0,46% хлорида натрия, максимальная – между 0,34% и 0,32% хлорида натрия.

Снижение осмотической резистентности эритроцитов наблюдается при наследственном микросфероцитозе (болезнь Минковского-Шоффара), аутоиммунных гемолитических анемиях. Повышение осмотической резистентности эритроцитов встречается при наследственных гемолитических анемиях, связанных с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, при некоторых гемоглобинопатиях (талассемия).

Измерение диаметра эритроцитов и графическую регистрацию распределения эритроцитов по величине (эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса) производят с помощью прямых микроскопических и электронно-автоматических методов.

Прямой микроскопический метод – это измерение диаметра эритроцитов в фиксированном и окрашенном мазке крови с использованием окуляр – микрометра и объектив-микрометра. Измеряют диаметр 200-500 различных эритроцитов, результаты распределяют по группам в зависимости от величины диаметра и устанавливают в процентах (%) относительную численность каждой группы.

Нормы: содержание нормоцитов (диаметр 6.9-8.0 мкм) составляет приблизительно 68%, микроцитов (диаметр менее 6.9 мкм) – 15%, макроцитов (диаметр более 8.0 мкм) – 17%.

Прямой микроскопический метод чрезвычайно трудоемок, отнимает много времени и поэтому уступает электронно-автоматическому методу.

Электронно-автоматический метод – это подсчет эритроцитов различного диаметра с помощью счетчиков «Культер» и «Целлоскоп».

Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса в норме имеет правильную форму с вершиной на 7.2 мкм и довольно узким основанием в пределах 6-9 мкм.

Увеличение диаметра эритроцитов (макроцитоз) со сдвигом кривой Прайс – Джонса вправо наблюдается при мегалоцитарных анемиях (витамин-В₁₂-фолиеводефицитные), при заболеваниях печени, при алкоголизме.

Уменьшение диаметра эритроцитов (микроцитоз) со сдвигом эритроцитометрической кривой влево встречается при наследственном микросфероцитозе, железодефицитной анемии, интоксикации свинцом.

Нормальные эритроциты имеют форму диска с вдавлением в центре. В патологических случаях могут появлять­ся эритроциты с измененной формой. Изменение формы эритроцитов называется пойкилоцитозом. Встречаются следующие формы эритроцитов.

Сфероциты — эритроциты, имеющие округлый или ша­рообразный вид, утратившие двояковогнутую форму. Микросфероциты имеют иногда обычные размеры. Сфероцитоз бывает наследственным и приобретенным. Наблю­дается при наследственном микросфероцитозе (болезнь Минковского-Шоффара), гемолитических анемиях, сеп­сисе, искусственных клапанах сердца.

Овалоциты (эллиптоциты) — эритроциты овальной фор­мы. Встречаются при талассемии, наследственном овалоцитозе, тяжелых железодефицитных анемиях, анемиях при лейкозах.

Мишеневидные эритроциты (таргентные клетки, лептоциты) — плоские, бледные, с центральным скоплением гемоглобина в виде мишеней. Бывают при талассемии, тя­желых железодефицитных анемиях, после спленэктомии, при различных видах желтух, алкоголизме.

Стоматоциты — центральное просветление у таких эритроцитов изогнуто, напоминает форму рта. Встречают­ся при наследственных стоматоцитозах (относятся к гемо­литическим анемиям), после переливания крови, при опу­холях и циррозе печени, остром алкогольном отравлении.

Акантоциты — эритроциты зазубренной формы, имею­щие выпячивания различной величины. Обнаруживают­ся при наследственных акантоцитозах, тяжелых заболе­ваниях печени (токсических гепатитах, циррозах), гипо­тиреозе, терапии гепарином, хроническом алкоголизме, после спленэктомии.

Эхиноциты — эритроциты с несколькими выростами, как бы покрытые шипами, колючками. Такие формы наб­людаются при тромбоцитопенической пурпуре, раке же­лудка, уремии. Если в мазке все эритроциты имеют такую форму, это говорит о неправильной фиксации мазка.

Каплевидные эритроциты имеют форму капель. Встре­чаются при миелофиброзе и токсических гепатитах.

Анулоциты — эритроциты в виде пустых колец. Наблю­даются в периферической крови при тяжелых формах железодефицитных анемий.

Серповидные эритроциты (дрепаноциты) имеют форму серпов, полулуний, овсяных зерен. Образуются в крови при серповидно-клеточной анемии.

В отличии от анизоцитоза, пойкилоцитоз является бо­лее поздним признаком анемии и отмечается при более тя­желом течении.

В норме зрелые эритроциты периферической крови не содержат никаких включений. И только в ретикулоцитах при суправитальной окраске красителем бриллианткрезилблау выявляется зернистосетчатая субстанция.

При различных патологических состояниях в перифе­рической крови обнаруживаются эритроциты с различны­ми включениями: базофильная пунктация — мелкая, си­него цвета, равномерно расположенная в цитоплазме зер­нистость, встречается при отравлении свинцом, ртутью и нередко при некоторых анемиях (мегалобластные, талассемия и др.); крапчатость Шуффнера — мелкая красного цвета зернистость, отмечается при трехдневной малярии; пятнистость Маурера — небольшие сиреневого или красно­го цвета пятнышки, встречаются при тропической маля­рии; тельца Гейнтца-Эрлиха — круглые резко очерченные включения по периферии эритроцита, появляются при отравлении гемолитическими ядами типа нитробензола, анилина, фенилгидразина, при лучевой болезни; тельца Жолли — круглые, сине-фиолетового цвета образования; кольца Кебота — нежные петельки красного цвета. Они имеют вид колечка, восьмерки или скрипичного ключа. Тельца Жолли представляют собой остатки ядерной суб­станции нормобластов, а кольца Кебота — остатки ядерной оболочки и встречаются главным образом при витамин-В₁₂— и фолиеводефицитной анемии, тяжелых отравлениях гемолити­ческими ядами.

Помимо телец Жолли и колец Кебота при витамин-В_12- и фолиеводефицитной анемии в периферической крови можно увидеть клеточные элементы мегалобластического типа кроветворения, который в норме отмечается только в эмб­риональном периоде.

При мегалобластическом кроветворении в кроветвор­ной ткани вместо эритробластов образуются мегалоблас­ты, которые способны к ранней гемоглобинизации при сохранившейся еще структуре ядра. По сродству к щелоч­ным или кислым красителям они подразделяются на базофильные, оксифильные и полихроматофильные. Большая их часть распадается в костном мозге, а меньшая — созре­вает до мегалоцитов, которые и поступают в перифериче­скую кровь. При резком обострении заболевания в пери­ферическую кровь попадают не только мегалоциты, но и мегалобласты. Мегалобласт представляет собой крупную клетку (диаметром более 15 мкм) с эксцентрично располо­женным круглым или овальным ядром. Мегалоциты — это безъядерные клетки размером от 12 до 15 мкм, значитель­но насыщенные гемоглобином. Поэтому цветной показа­тель, как правило, при В₁₂— и фолиево-дефицитной ане­мии больше 1,0 (эту разновидность анемии относят к гиперхромным).

Оседание эритроцитов – это свойство клеток крови осаждаться (седементировать) за пределами кровеносного русла (на дне сосуда при сохранении крови в несвертывающемся состоянии), оставляя сверху слой плазмы. Этот феномен лежит в основе определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ), которая выражается в миллиметрах плазмы, отстаивающейся в течение часа.

Наиболее распространен микрометод определения СОЭ в модификации Панченкова.

Принцип метода: при стоянии крови, стабилизиро­ванной цитратом натрия, эритроциты оседают с различ­ной скоростью в зависимости от физико-химических свойств крови. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) вы­ражается в мм/ч.

1) аппарат Панченкова, состоящий из штатива с капил­лярами шириной 1 мм, на стенке которых нанесены деле­ния от 0 (сверху) до 100 (снизу). На уровне 0 мм имеется бук­ва К (кровь), а на середине капилляра, около метки 50 мм — буква Р (реактив);

2) агглютационные (видалевские пробирки);

3) 5% свежеприготовленный раствор натрия цитрата;

Ход исследования. В капилляр Панченкова набирают 5% раствор натрия цитрата до метки «Р» — 50 мм и выду­вают его в видалевскую пробирку. Затем этим же капил­ляром, держа его горизонтально, из уколотого пальца на­бирают два раза кровь до метки «К» — 0 мм и выпускают ее в пробирку с натрия цитратом. Хорошо перемешивают. Этим же капилляром набирают цитратную кровь до мет­ки «К» и ставят строго вертикально в штатив. Получен­ное соотношение объемов крови и натрия цитрата равно 1:4. Через 1 ч отмечают по делениям на капилляре числомиллиметров освободившегося от эритроцитов столбика плазмы.

Интерпретация полученных данных. Нормальные показатели СОЭ:

Дети имеют более низкую СОЭ (1-8 мм/ч), чем взрослые, а лица среднего возраста меньше, чем старики.

Изменение СОЭ при патологии.

1. Значительное увеличение – опухолевые заболевания, диффузные болезни соединительной ткани, тяжелые инфекции, болезни почек, протекающие с нефротическим синдромом, выраженная витамин-В₁₂-фолиеводефицитная анемия.

2. Умеренное увеличение – острые и хронические инфекционные заболевания, локализированные гнойные процессы, инфаркт миокарда, гипертиреоз, тяжелый сахарный диабет, внутренние кровотечения, интоксикации ртутью и мышьяком.

3. Снижение – эритремия, вторичные симптоматические эритроцитозы, ацидоз, тяжелая сердечная недостаточность.

4. Методика определения количества лейкоцитов.

Подсчет количества лейкоцитов крови может быть произведен в счетной камере Бюркера с сеткой Горяева или в электронно-автоматических анализаторах («Целлоскоп», «Культер», «Техникан»).

Методика подсчета в камере Бюркера с сеткой Горяева

Принцип метода: аналогичен таковому подсчету эритроцитов, суть его состоит в точном отмеривании кро­ви и ее разведении в определенном объеме жидкости с по­следующим подсчетом клеточных элементов в счетной ка­мере и пересчете полученного результата на 1 крови.

1) смесители или пробирки для подсчета лейкоцитов;

2) 3% раствор уксусной кислоты, к которому прибавлено несколько капель метилвиолета или метиленового синего;

Смеситель для лейкоцитов отличается от такового для эритроцитов тем, что имеет более широкий просвет капил­ляра и меньший по величине резервуар. На смеситель нане­сены три метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10 либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).

Ход исследования: при взятии крови для подсчета лей­коцитов с кожи предварительно удаляют ватным тампо­ном остатки крови и, слегка сдавливая палец, выпускают свежую каплю крови. При работе со смесителями кровь набирают до метки 0,5, затем разводят 3 % раствором ук­сусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в те­чение 3 мин, после чего сливают 1-2 капли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками для подсчета лейкоцитов наливают 0,4 мл 3% раствора уксусной кислоты и в нее выпускают 0,02 мл крови, отмеренной пипет­кой от гемометра Сали. Тщательно встряхивают пробир­ки, затем в жидкость опускают пипетку и, набрав содер­жимое, заполняют счетную камеру. Так как лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов, то для получения до­стоверного и точного результата подсчет производят в 100 больших (неразграфленных) квадратах. Обычно в одном большом квадрате находится 1-2 лейкоцита. Число лей­коцитов в 1 мкл крови рассчитывается аналогично расче­ту числа эритроцитов по формуле

где X — количество лейкоцитов в 1 мкл крови; А — количе­ство лейкоцитов, сосчитанных в 1600 малых квадратах; Б — количество сосчитанных малых квадратов (1600); 4000 — величина, умножая на которую, мы получаем ко­личество клеток в 1 мкл.

Интерпретация полученных данных. Нормальное количество лейкоцитов: 4.0 – 9.0 х 10 9 /л. Уменьшение их числа в кро­ви называется лейкопенией, увеличение — лейкоцитозом.

Лейкоцитоз может быть абсолютным (истинным) и от­носительным (перераспределительным).

Абсолютный лейкоцитоз – наблюдается при острых воспалительных процессах, некрозе тканей, острых бактериальных инфекциях (за исключением брюшного тифа, бруцеллеза, туляремии и др.), аллергических состояниях, злокачественных опухолях (с деструкцией тканей), закрытых травмах черепа и кровоизлияниях в мозг, диабетической и уремической коме, шоке, острой кровопотере, как первичная реакция – при лучевой болезни. Значительное повышение количество лейкоцитов встречается при лейкозах.

От­носительный (перераспределительный) лейкоцитоз является следствием поступления лейкоцитов в ток крови из органов, служащих для нее депо. Это происходит после приема пищи (пищевой лейкоцитоз), горячих и холодных ванн, сильных эмоций (вегетососудистый лейкоцитоз), интенсивной мышечной работы (миогенный лейкоцитоз) и т.д.

Лейкопения.Лейкопения рассматривается как показатель угнете­ния функциональной способности костного мозга в ре­зультате воздействия токсических веществ (мышьяк, бен­зол и т.п.), некоторых медикаментов (сульфаниламиды, левомицетин, бутадион, иммуран, циклофосфан и т.п.), вирусов (гриппа, вирусного гепатита, кори и т.п.), микро­бов (брюшного тифа, бруцеллеза и т.п.), ионизирующей радиации, рентгеновского излучения и гиперспленизма (увеличение функции селезенки).

Лейкоцитоз и лейкопения редко характеризуются пропорциональным увеличением (снижением) суммарного числа лейкоцитов всех видов (например лейкоцитоз при сгущении крови); в большинстве случаев имеется увеличение (уменьшение) числа какого-либо одного типа клеток, поэтому применяют термины «нейтрофилез», «нейтропения», «лимфоцитоз», «лимфопения», «эозинофилия», «эозинопения», «моноцитоз», «моноцитопения», «базофилия».

При клинической оценке изменения количества лейкоцитов большое значение придается процентному соотношению отдельных форм лейкоцитов, то есть лейкоцитарной формуле.

Лейкоцитарная формула крови здорового человека:

Относительное количество Абсолютное количество

Базофилы……………………….0-1% 0-0,0650 х 10 9 /л

Эозинофилы…………………….0.5-5% 0,02-0,30 х 10 9 /л

Нейтрофилы: — миелоциты…………0% отсутствуют

— палочкоядерные…. 1-6% 0,040-0,300 х 10 9 /л

— сегментоядерные….47-72% 2,0-5,5 х 10 9 /л

Лимфоциты……………………….19-37% 1,2-3,0 х 10 9 /л

Моноциты………………………….3-11% 0,09-0,6 х 10 9 /л

Подсчет лейкоцитарной формулы производят в окрашенных мазках периферической крови. Для правильной интерпрепатации результатов исследования лейкоцитарной формулы рекомендуется производить подсчет в абсолютных количествах, а не в относительных. Наиболее распространены методы окраски мазков по Романовскому-Гимзе, по Паппенгейму. Под иммерсией считают не менее 200 клеток, а затем выводят процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов. Анализ лейкограммы с учетом других показателей крови и клинической картины является ценным методом обследования, помогает в постановке диагноза и определении прогноза заболевания.

Основные причины нейтрофилеза.

1. Острые бактериальные инфекции – локализированные и генерализованные.

2. Воспаление или некроз ткани.

3. Миелопролиферативные заболевания.

5. Лекарственные воздействия (кортикостероиды).

Основные причины нейтропении.

1. Инфекции – бактериальные (брюшной тиф, бруцеллез, туляремия, паратифы) и вирусные (инфекционный гепатит, корь, грипп, краснуха и другие).

2. Миелотоксические влияния и супрессия гранулоцитопоэза (ионизирующая радиация; химические агенты – бензол, анилин, ДДТ; лекарственные воздействия – цитостатики и иммунодепрессанты; витамин-В₁₂-фолиеводефицитная анемия, острый алейкемический лейкоз, апластическая анемия).

3. Воздействие антител (иммунные формы) – гиперчувтвительность к медикаментам, аутоиммунные заболевания (СКВ, ревматоидный артрит, хронический лимфолейкоз), изоиммунные проявления (гемолитическая болезнь новорожденных).

4. Перераспределение и депонирование в органах – шоковые состояния, заболевания со спленомегалией и гиперспленизмом.

5. Наследственные формы (семейная доброкачественная хроническая нейтропения).

Основные причины эозинофилии.

1. Аллергические заболевания.

2. Паразитарные инвазии (трихинеллез).

3. Хронические поражения кожи — псориаз, пузырчатка, экзема.

4. Опухоли (эозинофильные варианты лейкоза).

5. Другие заболевания – фибропластический эндокардит Леффлера, скарлатина.

6. В фазе выздоровления при инфекциях и воспалительных заболеваниях (благоприятный прогностический признак).

Причины эозинопении (анэозинофилии).

1. Повышенная адренокортикостероидная активность в организме.

Основные причины базофилии:

1. Хронический миелолейкоз и эритремия.

Основные причины моноцитоза.

1. Подострые и хронические бактериальные инфекции.

2. Паразитарные инфекции – лейшманиоз, малярия.

3. Гемобластозы – моноцитарный лейкоз, лимфогранулематоз, лимфомы.

4. Другие состояния – СКВ, саркоидоз, ревматоидный артрит, инфекционный моноцитоз; в период выздоровления от инфекций, при выходе из агранулоцитоза, после спленэктомии.

Снижение числа моноцитов имеет значение главным образом при оценке лимфоцитарно-моноцитарного соотношения при легочном туберкулезе.

Основные причины лифоцитоза.

1. Инфекции – острые вирусные (инфекционный мононуклеоз, корь, краснуха, ветряная оспа), хронические бактериальные (туберкулез, сифилис, бруцеллез), протозойные (токсоплазмоз).

2. Гемобластозы (лимфолейкоз, лимфомы).

3. Другие заболевания — гипертиреоз, аддисонова болезнь, витамин-В₁₂-фолиево-дефицитная анемия, гипо- и апластические анемии.

Лимфоцитопениянаблюдается при СКВ, лимфогранулематозе, распространенном туберкулезе лимфоузлов, в терминальной стадии почечной недостаточности, острой лучевой болезни, иммунодефицитных состояниях, приеме глюкокортикоидов.

Увеличение или уменьшение числа отдельных видов лейкоцитов в крови может быть относительным или абсолютным. Если изменяется только процентное содержание того или иного вида лейкоцитов, то имеет место относительная нейтрофилия, относительная эозинопения и т.д. Увеличение или уменьшение абсолютного содержания какого-либо вида лейкоцитов, то есть количества данных клеток в единице объема крови, называют абсолютной нейтрофилией, абсолютной эозинопенией и т.д.

Сдвиг формулы влево (увеличение количества молодых форм нейтрофилов) – признак воспаления или некротического процесса в организме.

Сдвиг лейкоцитарной формулы вправо характерен для лучевой болезни и витамин-В₁₂-фолиеводефицитной анемии.

Отсутствие или значительное снижение числа всех видов зернистых лейкоцитов – гранулоцитов (нейтрофилов, эозинофилов, базофилов) обозначают термином агранулоцитоз. В зависимости от механизма возникновения различают миелотоксический (воздействие ионизирующего излучения, прием цитостатиков) и иммунный (гаптеновый и аутоиммунный агранулоцитоз).

5. Методика определения количество тромбоцитов. Диагностическая трактовка.

Существуют следующие методы определения количества тромбоцитов в единице объема крови:

2) подсчет в камере Бюркера с сеткой Горяева;

3) использование фазоконтрастной и люминисцентной микроскопии;

4) электронно-автоматический метод (счетчики «Культер», «Целлоскоп»).

Для подсчета тромбоцитов периферической крови ча­ще всего применяют методику Фонио.

1) 14% раствор магния сульфата.

Ход исследования: для предупреждения склеивания тромбоцитов предварительно на место укола пальца нано­сят каплю 0,14 % раствора магния сульфата и через нее де­лают прокол. Выступившую каплю крови смешивают с каплей магния сульфата и делают мазок, который окра­шивают по Романовскому—Гимзе. Затем в мазке под мик­роскопом с иммерсионной системой одновременно подсчи­тывают 1000 эритроцитов и находящиеся среди них тром­боциты. Последние встречаются в препарате либо в оди­ночку, либо чаще разбросаны кучками между эритроцита­ми. По величине тромбоцит занимает приблизительно 1/3-1/4 эритроцита. Тромбоциты не имеют ядра и их ци­топлазма окрашена в синеватый цвет с красноватым от­тенком в центре. Зная содержание эритроцитов в 1 л кро­ви, легко вычисляют абсолютное количество тромбоцитов.

Нормальное количество тромбоцитов в периферической крови: 180.0 – 320.0 х 10 9 /л. (150-450 х 10 9 /л согласно рекомендациям ВОЗ).

Интерпретация полученных данных.

Причины увеличения числа тромбоцитов (тромбоцитоза).

1. Миелопролиферативные заболевания — хронический миелолейкоз, эритремия, эссенциальная тромбоцитемия.

2. Воспалительные процессы – острая ревматическая лихорадк

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Папиллярные узоры пальцев рук — маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

источник