Цитохимическое определения пероксидазы в лейкоцитах
 |  | |
 | Цитохимия: методы Цитохимическое выявление гликогена Дегидрогеназы Кислая а-нафтилацетат эстераза Кислая фосфатаза Щелочная фосфатаза (К. Ф. 3.1.3.1.) Липиды: методы цитохимического определения. Методы выявления НВ антигена Нуклеиновые кислоты Определения пероксидазы в лейкоцитах Определение фосфолипидов суданом черным Б. Окраска на гемосидерин по Перлсу |  |
 |  |
| | ||||||||||||||||||
|
Постановка реакции. Анализ проводят на приборе для перегонки водяным паром (рис. 1). Навеску фарша массой (25 ± 0,01) г помещают в круглодонную колбу и приливают 150 мл 2% раствора серной кислоты. Содержимое колбы перемешивают, и колбу закрывают пробкой. Под холодильник подставляют коническую колбу вместимостью 250 мл, на которой отмечают объем 200 мл. Дистиллированную воду в плоскодонной колбе доводят до кипения и паром отгоняют летучие жирные кислоты до тех пор, пока в колбе не соберется 200 мл дистиллята. Во время отгона колбу с навеской подогревают. Титрование всего объема дистиллята проводят 0,1 н. раствором гидроокиси калия (или гидроокиси натрия) в колбе с индикатором (1 % раствор фенолфталеина) до появления малиновой окраски, не исчезающей в течение минуты. Параллельно при тех же условиях проводят контрольный анализ для определения расхода щелочи на титрование дистиллята с реактивом без мяса. Количество летучих жирных кислот, в миллиграммах гидроокиси калия в 25 г мяса вычисляют по формуле: Х=(V- V0)· К·5,6. где V— количество 0, 1 н. раствора гидроокиси калия (или гидроокиси натрия), израсходованное на титрование 200 мл дистиллята из мяса, мл; V0 — количество 0,1 н. раствора гидроокиси калия (или гидроокиси натрия), израсходованное на титрование 200 мл дистиллята контрольного анализа, мл; К — поправка к титру 0,1 н. раствора гидроокиси калия (или гидроокиси натрия); 5,61 — количество гидроокиси калия, содержащееся в 1 мл 0,1 н. раствора, мг. За результат испытаний принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Вычисление проводят с погрешностью не более 0,01 мг гидроокиси калия. Учет реакции: мясо убойного скота считают свежим, если в 25 г содержится летучих жирных кислот до 4 мг гидроокиси калия (в мясе птицы — до 4,5 мг; в мясе кроликов охлажденном — до 2,25 мг, в замороженном — до 4,5 мг); мясо считают сомнительной свежести, если в 25 г содержится летучих жирных кислот от 4 до 9 мг гидроокиси калия (в мясе птицы — от 4,5 до 9 мг, в мясе кроликов охлажденном — от 2,25 до 9 мг, в замороженном — 4,5—13,5 мг); мясо считают несвежим, если содержание летучих жирных кислот более 9 мг гидроки-си калия в 1 г продукта (у кроликов в замороженном мясе — более 13,5 мг). Определение наличия аммиака и солей аммония. Сущность реакции заключается в том, что соли аммония и аммиак образуют с реактивом Нес-слера (двойная соль йодистой ртути и йодистого калия, растворенные в гидрате окиси калия) йодид меркураммония желто-бурого цвета. Постановка реакции. Готовят мясной экстракт 1 : 4. В колбу помещают навеску 5 г мяса, измельченного ножницами до состояния фарша, добавляют 20 мл бидистиллированной воды и энергично перемешивают в течение 15 мин, после чего фильтруют через бумажный фильтр. В пробирку вносят 1 мл мясного экстракта, добавляют 10 капель реактива Несслера и перемешивают. Учет реакции: свежее мясо — вытяжка приобретает зеленовато-желтый цвет, остается прозрачной или слегка мутнеет; мясо сомнительной свежести — вытяжка приобретает интенсивно-желтый цвет, наблюдается значительное помутнение, а для замороженного мяса характерно выпадение осадка; несвежее мясо — вытяжка приобретает желто-оранжевый или оранжевый цвет, наблюдается быстрое образование крупных хлопьев, выпадающих в осадок. Определение кислотного числа жира птицы. Кислотное число жира — это количество мг NaOH (КОН), необходимое для нейтрализации свободных жирных кислот, содержащихся в 1 г жира. Кислотное число показывает степень гидролиза жира на свободные жирные кислоты и глицерин. Подготовка материала к реакции. От каждого образца отбирают не менее 20 г внутренней жировой ткани, измельчают ее ножницами и вытапливают в фарфоровой чашке на водяной бане, затем фильтруют в химический стакан через 4 слоя марли и охлаждают до 20°С. Постановка реакции : В колбу или химический стаканчик отвешивают около 3—5 г исследуемого топленого жира (с точностью до 0,001 г), ставят в водяную баню и приливают 30-50 мл нейтрализованной смеси спирта с эфиром в соотношении 1:2. К полученному раствору добавляют 3—5 капель I % спиртового раствора фенолфталеина, после чего его быстро титруют 0,1 н. едким натрием до появления, не исчезающего в течение минуты, розового окрашивания. При помутнении смеси в процессе титровании в колбу добавляют 10 мл смеси спирта и эфира, перемешивают до исчезновения мути и заканчивают титрование. Расчет проводят по формуле:
а — количество 0,1 н. едкого натрия, пошедшее на титрование, мл; 5,61 — количество едкого натрия, содержащееся в 1 мл 0,1 н. раствора, мл; К— поправка к титру 0,1 н. раствора NaOH. Примечание. Смесь спирта с эфиром предварительно нейтрализуют, к ней добавляют несколько капель 1 % раствора фенолфталеина и титруют 0,1 н. едким калием или едким натром до появления слаборозового цвета. Вычисление производят с погрешностью не более 0,01 мг NaOH. Учет реакции: жир от охлажденных и замороженных тушек всех видов птицы с кислотным числом до 1 мг NaOH считают свежим; куриный жир от охлажденных тушек с кислотным числом 1,0—2,5 мг NaOH, гусиный — 1,0-2,0 мг NaOH, утиный и индюшиный — 1,0-3,0 мг NaOH, а также жир от мороженых тушек всех видов птицы с кислотным числом 1,0—1,6 мг NaOH считают сомнительной свежести. Говяжий, свиной, бараний –выс.сорт-1,1, перв.сорт-2,2 мг NaOH Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском: Лучшие изречения: Увлечёшься девушкой-вырастут хвосты, займёшься учебой-вырастут рога 10052 — 85.95.179.73 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь. Отключите adBlock! источник Цитохимические исследования при лейкозах(Ст. Преподаватель Свирина В.И.) В дифференциальной диагностике гемобластозов цитохимические исследования занимают важное место. Помимо глубокого теоретического значения, неоспорима их роль в уточнении различных форм лейкозов. Разработка эффективных методов дифференцированной терапии острых лейкозов, особенно острого лимфобластного лейкоза детей, стала возможной только после применения в клинической практике цитохимических методов диагностики. Ниже представлено краткое описание некоторых цитохимических методик. Они ограничены исследованиями, используемыми для идентификации различных форм острых лейкозов. К ним относятся реакции: на миелопероксидазу, полисахариды, хлорацетатэстеразу, альфа-ацетатнафтилэстеразу, кислую фосфатазу, липиды и кислые сульфатированные мукополисахариды. Реакция на пероксидазу.Пероксидаза является ферментом, разрушающим перекись водорода, образующуюся в клетке в процессе жизнедеятельности. Токсичная для клеток перекись водорода обезвреживается, освобождающийся при участии пероксидазы кислород вновь используется клеткой. Пероксидаза обнаруживается не во всех клетках, этот фермент отсутствует в лимфоидных клетках и постоянен для всех элементов миелоидного ряда. Ввиду его специфичности для нейтрофилов с ранних фаз созревания фермент получил обозначение миелопероксидазы. Уровень активности пероксидазы подвержен большим колебаниям.
Рис. 1. Положительная реакция на миелопероксидазу в клетках миелоидного ряда. Х о д р е а к ц и и. Фиксированные мазки крови или костного мозга заливают бесцветным раствором бензидина или ортотолидина. К раствору, перед тем как его наливают на мазок, добавляют каплю 3% перекиси водорода. Если в клетке содержится пероксидаза, то перекись водорода превращается в воду с выделением кислорода. Высвободившийся кислород окисляет бензидин или ортотолидин и переводит их в окрашенное соединение. При использовании бензидина цитоплазма клеток, содержащих пероксидазу, окрашивается в желтый цвет. Все клеточные элементы нейтрофильного ряда костного мозга, начиная с ранних фаз созревания, дают резко положительную реакцию. В препарате цитоплазма клеток окрашена в желтый цвет. Цитохимическая реакция на полисахариды (гликоген). Энергетические потребности клетки обеспечиваются гликогеном. Сложные метаболические процессы, связанные с расщеплением и ресинтезом гликогена под воздействием различных патологических процессов, могут извращаться. При цитохимическом анализе используется определение этих отклонений. Для обнаружения гликогена в клетках применяется ШИК – реакция. Х о д р е а к ц и и. Под воздействием реактива Шиффа, в состав которого входит фуксин, появление в цитоплазме клеток красных или фиолетово-красных зерен указывает на присутствие полисахаридов (гликогена). После проведения ШИК – реакции и докраски гематоксилином все клеточные элементы хорошо дифференцируются. Ядра нейтрофилов окрашиваются в синий цвет, цитоплазма заполняется мелкой красной зернистостью гликогена, как бы сплошной окраской. Существует различная степень окраски цитоплазмы.
Рис. 2. Положительная реакция на гликоген в гранулоцитах (диффузное окрашивание цитоплазмы) Моноциты содержат гликоген, выявляемый в виде мелких пылевидных красных гранул на фоне неокрашенной или розоватой цитоплазмы. В эозинофилах при ШИК – реакции неокрашивающихся из-за обилия эозинофильной зернистости, судить о содержании гликогена невозможно. Определение ШИК – реакции в эозинофилах, так же как в базофилах, практического значения не имеет. Наиболее ценно ее значение для исследования зрелых нейтрофилов и лимфоцитов. В лимфоцитах гликоген определяется в виде сравнительно крупных красных, не сливающихся между собой, зерен. Количество их находится в зависимости от ширины пояса, образованного цитоплазмой вокруг ядра. Для уточнения характера малых лимфоцитов с тонким ободком цитоплазмы необходимо внимательное изучение препарата под микроскопом. Только наличие крупных, хотя и единичных, красных зерен указывает на положительную ШИК – реакцию лимфоцитов.
Рис. 3. Положительная реакция на гликоген в лимфоцитах (в виде гранул вокруг ядра) Хлорацетатэстераза.Хлорацетатэстераза относится к неспецифическим эстеразам и наряду с реакцией на миелопероксидазу является биохимическим маркером клеток нейтрофильного ряда. Активность хлорацетатэстеразы, выявляемая в миелобластах, возрастает у промиелоцитов и миелоцитов. Активность фермента при остром миеломонобластном лейкозе низкая, а при остром монобластном лейкозе она совсем не обнаруживается. Положительная реакция на хлорацетатэстеразу с использованием метода Яма позволила наряду с реакцией на миелопероксидазу дифференцировать по бластным клеткам острый миелобластный лейкоз. Положительная реакция определяется по мелкой синей зернистости, выпадающей в цитоплазме клеток.
Рис. 4. Положительная реакция на хлорацетатэстеразу в миелобастах и созревающих гранулоцитах Альфа — ацетатнафтилэстераза (неспецифическая эстераза). Этот фермент также содержится в клетках нейтрофильного ряда, начиная с миелобласта. Реакция на альфа-ацетатнафтилэстеразу особенно ярко выражена у клеток моноцитарного ряда и их молодых форм. Она приобретает важное диагностическое значение при остром монобластном лейкозе. Характерна следующая важная отличительная особенность: при остром монобластном лейкозе неспецифическая эстераза подавляется фтористым натрием в концентрации среды 1,5 мг/мл. Этот признак позволяет отличить клетки монобластного ряда от клеток других ростков, также обладающих активностью неспецифической эстеразы. При положительной реакции на альфа — ацетатнафтилэстеразу цитоплазма клеток заполнена мелкой темно-бурой зернистостью.
Рис. 5. Положительная реакция на альфа-нафтил-ацетатэстеразу в миелобластах и созревающих гранулоцитах Щелочная и кислая фосфатаза.Активность фосфатаз в нейтрофилах выявляется гистохимическим методом Гомори и методом азосочетания. Активность щ е л о ч н о й ф о с ф а т а з ы характерна для зрелых форм нейтрофилов, при различных заболеваниях она подвержена закономерным изменениям. В частности, для хронического миелолейкоза характерно резкое снижение щелочной фосфатазы, что является важным диагностическим признаком. К и с л а я ф о с ф а т а з а в клетках связана с процессами клеточной дифференцировки. В клетках миелоидного ряда она выявляется уже в молодых предстадиях нейтрофилов, по мере вызревания клеток этого ряда ее активность снижается. Зрелые нейтрофилы лишены этой активности. Положительная реакция на кислую фосфатазу отмечается при остром миелобластном лейкозе. Резко положительна эта реакция при остром монобластном лейкозе.
Рис. 6. Положительная реакция на кислую фосфатазу в миелобластах и созревающих гранулоцитах Реакция на липиды. Липиды содержатся в клетках различных тканей. Клетки костного мозга и периферической крови содержат так называемые простые липиды в виде нейтральных жиров, свободных жирных кислот и др., а также сложных липидов — фосфолипидов. Особенно много их обнаруживают в зрелых нейтрофилах. Для выявления липидов в клетках крови применяют окраску суданом черным Б. В клетках лимфатического ряда липиды не выявляются. В клетках нейтрофильного ряда липиды могут быть определены уже в бластных элементах и по мере созревания клеток этого ряда количество суданофильных веществ в гранулоцитах увеличивается. Моноциты также содержат липиды, но в меньшем количестве, чем нейтрофилы.
Рис. 7. Положительная реакция на липиды в гранулоцитах Реакция на кислые мукополисахариды. Зернистость клеток гранулоцитарного ростка содержит кислые мукополисахариды; основным компонентом последних является хондроитин — 4 — сульфат. Наибольшее количество кислых мукополисахаридов синтезируют незрелые клетки зернистого ряда. Реакция на сульфатированные кислые мукополисахариды специфична при промиелоцитарном остром лейкозе и характеризуется появлением в цитоплазме богатой сравнительно крупной розово-вишневой зернистости. Ядра клеток окрашиваются в светлый серо-голубой цвет.
Рис. 8. Положительная реакция на мукополисахариды в созревающих гранулоцитах Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.007 сек.) источник Реакция на пероксидазу положительная в анализе кровиЦитохимические исследования занимают важное место в дифференциальной диагностике гемобластозов. Кроме большого теоретического значения, неоспорима их роль в уточнении различных форм лейкозов. Разработка эффективных методов дифференциальной диагностики и терапии острых лейкозов, особенно острого лимфобластного лейкоза детей, стала возможной только после введения в клиническую практику цитохимических методов диагностики. Цитохимические исследования проводят в мазках крови, лейкоконцентрата, костного мозга. Они основаны на использовании специфических химических цветовых реакций для определения в клетках различных веществ. При цитохимическом исследовании пользуются полуколичественной оценкой результатов, используя принцип G. Astaldi (1957), основанный на выявлении специфической окраски различной степени интенсивности. В зависимости от нее исследуемые элементы делят на четыре группы: с отрицательной реакцией (—), слабоположительной (+), положительной (++) и резкоположительной (+++). Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 клеток определенного вида и дифференцируют их по указанному принципу, затем число клеток с одинаковой интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов, сумма этих произведений составляет условные единицы (ед.). Активность ферментов выражают в условных единицах или в виде среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Средний цитохимический коэффициент вычисляют по формуле Кеплоу в модификации Астальди и Верга: где цифры (1, 2, 3, 4) обозначают интенсивность окраски; буквы (а, б, в, г) — число подсчитанных клеток с определенной интенсивностью окраски (цитохимической реакции). Метод полуколичественной оценки является ориентировочным, но позволяет сравнить распределение исследуемых веществ в различных клеточных элементах или в одних и тех же клетках при тех или иных патологических состояниях. Следует, однако, иметь в виду, что цитохимический метод может использоваться только в качестве дополнения к другим методам исследования — морфологическим, иммунологическим, цитогенетическим. За счет гликогена в основном обеспечиваются энергетические потребности клеток. В частности, за счет реакций гликогенолиза образуется энергия, необходимая для осуществления функции фагоцитоза. Локализуется гликоген в цитоплазме клеток. Для цитохимического выявления гликогена чаще всего применяют PAS-реакцию, или ШИК-реакцию (по названию реактива — шифф-йодная кислота). Положительную ШИК-реакцию могут также давать такие вещества, как гликозаминогликаны, мукополисахариды, гликопротеины, мукопротеи-ны и др. Гликоген можно легко дифференцировать от других веществ пробами со слюной или α-амилазой. Проба со слюной . Препарат помещают в свежесобранной слюне в термостат при 37 °С на 30 мин, затем его окрашивают вышеописанной методикой. При инкубации препарата αамилаза, содержащаяся в слюне, расщепляет гликоген, и при реакции с реактивом Шиффа розовая окраска на гликоген не развивается’. Проба с α-амилазой . Препарат помещают в раствор α-амилазы (1 мл профильтрованной амилазы растворяют в 40 мл 0,85% раствора натрия хлорида) на 30 мин в термостат при 37 °С. Нормальные величины. В мазках периферической крови и костного мозга гликоген содержится в цитоплазме нейтрофилов разной степени зрелости, но преимущественно в более зрелых (в виде обильной мелкой и диффузной зернистости). В цитоплазме мегакариоцитов и тромбоцитов гликоген определяется в виде одиночных крупных зерен. В крови здоровых людей количество интенсивно окрашенных нейтрофилов (+++) колеблется в пределах 2–12 % от общего числа нейтрофилов, средней интенсивности окраски (++) — в пределах 72–90%, слабо окрашенных (+) — от 4 до 18%. СЦК гликогена в нейтрофилах здоровых людей равен 1,71–2,04 (Кост Е. А., 1975), а по данным В. Б. Лецкого (1970) — 2,52. У лиц пожилого и старческого возраста отмечено достоверное снижение СЦК гликогена до 1,98 (Германов В. А., Сергеева Т. М., 1972). В лимфоцитах здоровых людей гликоген содержится в виде небольшого числа гранул в 10–12% клеток. В мегакариоцитах гликоген обнаруживается в виде гранул (от единичных до 30–50), напоминая скопления кровяных пластинок. Число гликогенположительных мегакариоцитов составляет в среднем 60 % от общего числа мегакариоцитов. Клиническое значение . Увеличение числа гликогенположительных лимфоцитов4 (до 70–80 %) характерно для лимфопролиферативных заболеваний, особенно для хронического лимфолейкоза (гликоген определяется в виде крупных гранул). Увеличение содержания гликогена в нейтрофилах наблюдается при различных воспалительных процессах, сахарном диабете, истинной полицитемии. Уменьшение отмечается при агранулоцитозах, лучевой болезни, при хроническом миелолейкозе — примерно в 2 раза по сравнению с нормой, особенно при прогрессировании заболевания (общее количество гликогена, определяемое биохимическими методами, может быть даже повышено из-за лейкоцитоза). При тромбоцитопенической пурпуре и симптоматических тромбоцитопениях число гликогенположительных форм мегакариоцитов значительно снижено (после спленэктомии оно восстанавливается до нормальных величин). В лейкемических клетках при остром миелобластном лейкозе гликоген или не содержится вообще, или распределен диффузно либо в виде мелкой зернистости; при остром лимфобластном лейкозе — в виде крупных гранул, расположенных в цитоплазме вокруг ядра; при остром монобластном лейкозе бластные клетки содержат незначительное количество диффузно окрашиваемого гликогена; при остром эритромиелозе гликоген в виде гранул обнаруживается в эритробластах. Липиды локализуются в цитоплазме клеток, главным образом, в мембранах органелл и обнаруживаются преимущественно в нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран. Клетки костного мозга и периферической крови содержат простые липиды в виде нейтральных жиров, свободных жирных кислот, а также сложные липиды — фосфолипиды. Цитохимическое исследование основано на применении веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира применяют судан III, окрашивающий жир в оранжевый цвет. Липоиды лучше выявляются Суданом черным (черное окрашивание). В гематологических исследованиях чаще применяется окраска мазков Суданом III. Нормальные величины. Липиды содержатся в цитоплазме нейтрофилов в виде обильной зернистости. Большинство нейтрофилов (69–80 %) у здоровых людей окрашивается интенсивно (+++), 18–36 % — дают окраску средней интенсивности (++) и 10 % — слабо окрашены (+). СЦК липидов в нейтрофилах здоровых людей равен 2,65. В меньших количествах липиды в норме обнаруживаются и в моноцитах. В миелобластах обнаружено небольшое количество липидов, в промиелоцитах их больше, и по мере созревания нейтрофилов содержание липидов увеличивается. В клетках лимфатического ряда липиды не выявляются. Клиническое значение . Повышение СЦК липидов отмечено у лиц старческого возраста. Повышение содержания липидов в нейтрофилах наблюдается при остром миелобластном и монобластном лейкозах, при прогрессировании хронического миелолейкоза. При недифференцированном остром лейкозе бластные клетки содержат липиды в небольшом количестве (2–3 %). Уменьшение СЦК липидов отмечено при лечебном голодании. Снижение содержания липидов в нейтрофилах выявлено при ревматизме, воспалительных процессах. При остром лимфобластном лейкозе липиды в бластных клетках не выявлены. В организме человека пероксидаза обнаружена в лейкоцитах, тромбоцитах, в молоке, а также в тканях, в которых происходит метаболизм эйкозано-идов. Простетической группой является протогем. В реакции, катализируемой пероксидазой, перекись водорода восстанавливается за счет соединений, выступающих в качестве доноров электронов, таких как аскорбат, хиноны или цитохром С. Реакция, катализируемая пероксидазой, имеет сложный характер и суммарно выглядит следующим образом: Пероксидаза локализуется преимущественно в специфической зернистости цитоплазмы гранулоцитов, является маркером клеток миелоидной природы. Она отсутствует в лимфоидных клетках. Ввиду специфичности для нейтрофилов, начиная с ранних фаз созревания, фермент получил название миелопероксидаза. Активность пероксидазы подвержена большим колебаниям. Нормальные величины. В крови здоровых людей активность пероксидазы выявляется преимущественно в цитоплазме гранулоцитов, в меньшей степени и непостоянно — моноцитов. Фермент появляется в клетках на стадиях промиелоцита и более зрелых миелобластов. Лимфобласты не содержат пероксидазу. 3–16% нейтрофилов окрашены резко положительно (+++), 60–90 % — положительно (++), остальные — слабоположительно (+) (Кост Е. А., 1975). СЦК пероксидазы в нейтрофилах здоровых людей равен 2,5 (Лецкий В. Б., 1970). Эозинофилы характеризуются резко положительной реакцией на пероксидазу. Клиническое значение . В бластных клетках высока активность фермента при остром миелобластном лейкозе. У больных с хроническим миелолейкозом, особенно в терминальной стадии, СЦК снижается до 1,6; слабая активность фермента наблюдается при остром монобластном лейкозе и отсутствует при остром лимфобластном лейкозе. Определение активности миелопероксидазы как маркера миелоидного ряда используется для дифференциальной диагностики острых миелобластных и лимфобластных лейкозов. Снижение активности фермента отмечено при инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе, опухолях. Активность щелочной фосфатазы выявляется впервые на стадии метамиелоцита, повышается по мере дифференцировки до сегментоядерного нейтрофила, а затем по мере старения клетки вновь снижается. Активность фермента определяется в специфических гранулах цитоплазмы. Щелочная фосфатаза относится к группе гидролитических ферментов, расщепляет различные фосфорные эфиры в щелочной среде (оптимум pH 9,6), осуществляет гидролиз однозамегценных эфиров ортофосфата. Наиболее распространено определение активности фермента методами азосочетания. Нормальные величины. У здоровых людей большинство сегментоядерных нейтрофилов являются фосфатазоотрицательными, и только в 20–30 % клеток (Кост Е. А., 1975) (20–40% — по данным Л. В. Козловской и М. А. Мартыновой, 1975) выявлена слабая активность фермента (+). По данным М. Г. Шубина (1980), активность щелочной фосфатазы для здоровых лиц обоего пола составляет 26 ед., т. е. СЦК равен 0,26. Отмечена более высокая активность фермента у женщин по сравнению с мужчинами (соответственно 31,0±0,8 и 21,0±0,7 ед.). Клиническое значение . Повышение активности фермента в цитоплазме нейтрофилов отмечается при истинной полицитемии, хроническом миелофиброзе, апластических анемиях. Увеличение активности щелочной фосфатазы в цитоплазме нейтрофилов при острых нелимфобластных лейкозах — благоприятный признак, поскольку у таких больных более вероятны ремиссии. Увеличение активности фермента выявлено у детей первого полугодия жизни— 150–159 ед. Активность фермента увеличивается при беременности, при многих воспалительных процессах, хронических заболеваниях печени, инфекциях, злокачественных новообразованиях, диабетическом кетоацидозе, приеме пероральных контрацептивов, болезни Дауна, инфаркте миокарда и др. Резкое снижение активности щелочной фосфатазы (до полного отсутствия) наблюдается при хроническом миелолейкозе, что может служить важным дополнением дифференциальной диагностики хронического миелолейкоза и хронического миелофиброза, а также лейкемоидных реакций по миелоидному типу. Снижение активности фермента наблюдается при вирусных заболеваниях, в том числе инфекционном гепатите, при лучевой болезни, серповидно-клеточной анемии, болезнях соединительной ткани. Активность кислой фосфатазы обнаруживается преимущественно в нейтрофилах и лимфоцитах крови (максимально в нейтрофильных миелоцитах); локализацию связывают с лизосомами цитоплазмы клеток. Кислая фосфатаза является гидролитическим ферментом (оптимум действия при pH 5,2). Для цитохимического исследования обычно используют методы азосочетания. Нафтолфосфаты под воздействием кислой фосфатазы расщепляются с образованием свободного нафтола, который вступает в реакцию с солью диазония. В результате в местах определяемой активности фермента выпадает осадок азокрасителя красного цвета на зеленом фоне. Нормальные величины. В клетках крови активность фермента обнаруживается в 12% зрелых гранулоцитов и в лимфоцитах. В нейтрофилах периферической крови здоровых людей активность фермента колеблется в пределах 11–72 ед., т. е. СЦК равен 0,386; в лимфоцитах— 25,0–28,8 ед., т. е. СЦК равен 0,286. У детей активность кислой фосфатазы в нейтрофилах выше, чем у взрослых. Клиническое значение . Активность кислой фосфатазы повышается при острых лейкозах — монобластном и миелобластном, особенно при остром промиелоцитарном лейкозе (в диффузной форме), при острых лимфобластных лейкозах (в гранулярной форме). Повышение активности фермента наблюдается в нейтрофилах при воспалительных процессах (острая пневмония), туберкулезе, инфаркте миокарда, острых хирургических инфекциях, злокачественных опухолях. Повышение активности фермента в лимфоцитах отмечается при хронических тонзиллитах, при различных аллергических заболеваниях, после иммунизации. Неспецифические эстеразы — это группа ферментов (гидролаз) с невысокой специфичностью, расщепляющих эфиры карбоновых кислот с короткой углеродной цепью. Локализуются в цитоплазме клеток, главным образом, в лизо-сомах. Активность этих ферментов в той или иной степени выявляется во всех видах лейкоцитов (максимально в незрелых гранулоцитах и моноцитах). Наибольшая активность обнаружена в моноцитах крови. Для определения активности ферментов используют различные субстраты (α-нафтилацетат, нафтол-AS-ацетат, нафтол-AS-D-хлорацетат и др.). Под влиянием неспецифических эстераз из субстрата освобождается свободный нафтол, который дает цветное окрашивание с солями диазония. Дегидрогеназы — ферменты, катализирующие окислительно-восстановительные реакции с участием двух субстратов. Ряд из них принимает непосредственное участие в процессах биологического окисления, осуществляя перенос протонов с субстрата, подвергающегося окислению, на другой субстрат. Дегидрогеназы, катализирующие такое восстановление, специфичны как к донору водорода, так и к его акцептору. Дегидрогеназы присутствуют в самых различных клетках и тканях. Они локализуются в цитоплазме и митохондриях, могут быть выявлены цитохимически при экспозиции клеток с соответствующим субстратом, на который дегидрогеназы действуют в присутствии тетразолиевых соединений, способных акцептировать протоны, с образованием нерастворимых окрашенных соединений. Нормальные величины. У здоровых людей СДГ и α-ГФДГ выявляются в виде гранул синего цвета в нейтрофилах, лимфоцитах, тромбоцитах периферической крови и миелобластах, гранулоцитах, мегакариоцитах, эритро- и нормобластах костного мозга. СЦК СДГ лимфоцитов составляет 1,10±0,05; α-ГФДГ — 0,80±0,08. У детей активность СДГ выявляется в 46 % лимфоцитов. У взрослых в пунктате костного мозга 88 % недифференцированных клеток имеют активность фермента (+), все ядросодержащие клетки эритроидного ряда и гранулоциты проявляют активность на (+) или (++). Клиническое значение . Повышение активности СДГ и α-ГФДГ в гранулоцитах обнаружено у больных со злокачественными опухолями. Снижение активности выявляется в лимфоцитах в период приступа бронхиальной астмы, при хроническом лимфолейкозе, в гранулоцитах — при хроническом миелолейкозе.
Цитохимическое определения пероксидазы в лейкоцитах. Пероксидазная реакция (определение активности миелопероксидазы К.Ф. 1.11.1.7) используется для выявления миелоидных клеточных элементов. Вместе с ШИК-реакцией и реакцией на неспецифическую эстеразу, миелопероксидаза является одним из основных цитохимических методов для дифференциальной диагностики острых лейкозов. Пероксидаза является ферментом — лизосомальной каталазой, катализирующей в присутствии перекиси водорода окисление различных субстратов. При окислении ортотолидина или бензидина, используемых в реакциях, образуются интенсивно окрашенные соединения, в том случае, если в клетке присутствует пероксидаза, при взаимодействии с которой перекись водорода разрушается с выделением кислорода, который и окисляет орто-толидин или бензидин, переводя их в окрашенные соединения. Реактив на пероксидазу: бензидин (на кончике ножа) растворяют в 6 мл 96 % спирта, прибавляют 4 мл воды и 0,02 мл З % перекиси водорода. Реактив годен к употреблению в течение 5—6 дней 3.Краситель по Романовскому.. 4.Фиксирующая смесь (10% спиртовой раствор формалина).Приготовление фиксатора (10% спиртовой раствор формалина): 1мл 40% формалина смешивают с 9 мл 96° этилового спирта. Как прозрачный, так и мутный молокообразный раствор формалина одинаково пригоден. Полученный 10% раствор формалина хранится в холодильнике. 3. Рельсы или емкости для окраски мазков; 7. Цилиндры мерные вместимостью 25-500мл. Приготовление мазков крови и костного мозга: 2-3 мазка крови (или костного мозга) сделать на предметных стеклах с помощью более узкого предметного шлифованного стекла следующим образом. На сухое предметное стекло, ближе к короткой стороне наносят пипеткой небольшую каплю крови. Предметное стекло следует держать на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставить шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом менее 45° и продвинуть его вправо до соприкосновения с каплей крови. Выждать до тех пор, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением провести его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерна так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1 — 1,5 см до его края. Нельзя сильно нажимать на стекло, так как многие клетки крови могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается “метелочкой”. После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска. При медленном высыхании может изменяться морфология клеток крови Приготовление препаратов костного мозга аналогично приготовлению препаратов периферической крови. Приготовление рабочего раствора: Растворить содержимое одного флакона бензидина ( орто-толидина ), в 3мл 96?этилового спирта и долить 2мл дистиллированной воды. Хорошо взболтать и перед употреблением добавить пипеткой 1 каплю 3% перекиси водорода. Сухие мазки крови или к /мозга фиксировать в 10% спирт — формалиновой смеси Стекла с мазками крови или костного мозга поместить на рельсы и на них налить свежеприготовленный рабочий раствор с только что добавленной в него 3 %H2O2 перекисью водорода Примечание: при наличии достаточного количества мазков окраску можно производить в емкости Хеллендахела (8 препаратов) или Коплина (5 препаратов). При этом необходимо приготовить рабочий раствор в количестве, достаточном для заполнения емкости. Оставить на 15- 20мин при комнатной температуре. Промыть дистиллированной водой и промокнуть фильтровальной бумагой Докрасить 0,5% раствором красителя по Романовскому Промыть стекла в проточной воде Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации. Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов. При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови. Приготовленные мазки не рекомендуется хранить более 24часов, т. к. активность большинства внутриклеточных ферментов снижается. Нефиксированные мазки могут храниться в темноте в течение 3 недель. В крови здоровых людей 3- 16% нейтрофилов окрашены резко положительно, 60-90%- положительно, остальные – слабо положительно. СЦК нейтрофилов здоровых людей равен 2,56±0,033. Изменения при патологических состояниях Реакция используется главным образом с целью диагностики острых лейкозов. При острых миелобластных лейкозах активность фермента в бластах варьирует от умеренной до выраженной, при острых монобластных- слабая, при острых лимфобластных – отрицательная. Цитохимическое исследование миелопероксидазы Миелопероксидаза является лизосомальным ферментом, катализирующим в присутствии перекиси водорода окисление различных субстратов. Она локализуется преимущественно в специфических азурофильных гранулах в цитоплазме гранулоцитов и является маркером клеток миелоидного ряда. Миелопероксидаза выявляется в клетках гранулоцитарного ряда, начиная с миелобласта. Активность фермента повышается по мере созревания клеток. В сегментоядерных нейтрофилах здоровых людей выявляется высокая активность миелопероксидазы в виде гранул, заполняющих цитоплазму. Самая высокая активность фермента наблюдается в зрелых эозинофилах. В базофильных промиелоцитах и миелоцитах активность миелопероксидазы, как правило, высокая. Однако, по мере дифференцировки их в зрелые клетки, активность фермента снижается. Зрелые базофилы могут быть почти отрицательными по данному признаку. Слабоположительная реакция на миелопероксидазу наблюдается в различном проценте моноцитов в виде немногочисленных рассеянных гранул. В эритрокариоцитах, лимфоцитах и мегакариоцитах миелопероксидаза не определяется. В клетках миелопероксидаза участвует в реакциях разрушения токсичной перекиси водорода. В цитохимических реакциях активность фермента определяется по окислению хромогенов (бензидина, о-дианизидина и других) по методу Грэхема–Кнолля или его модификаций. Принцип метода: В присутствии миелопероксидазы бензидин окисляется перекисью водорода в коричневый оксибензидин. * 4% формалиново-спиртовой раствор (10 частей 40% формалина и 90 частей 96% спирта). * Пероксидазный реактив: бензидин (на кончике ножа) растворяют в 6 мл 96% спирта, прибавляют 4 мл воды и 0,02 мл 3% перекиси водорода. Реактив годен к употреблению в течение 5 — 6 дней. * Свежие мазки (1-2-дневной давности) фиксируют 4% формалиново-спиртовым раствором в течение 30 секунд. * Обмывают в проточной воде и высушивают. * Заливают пероксидазным реактивом на 5 минут. * Тщательно промывают в проточной воде и высушивают. * Докрашивают красителем Романовского-Гимзы. * Миелопероксидаза выявляется в цитоплазме клеток в виде коричневых гранул. Модифицированный метод Нарциссова Р. П. В присутствии пероксидазы бензидин окисляется перекисью водорода в коричневый оксибензидин. Для уменьшения инактивации фермента использованы соответствующий фиксатор и небольшое количество перекиси водорода. * 60% водный раствор ацетона. * 0,1 M раствор бората натрия (можно использовать фосфатный или мединаловый буферный раствор pH 7,6). * Инкубационная среда: 5 мл 5% водного раствора трилона Б, 10 мл раствора бората натрия, 35 мл насыщенного раствора бензидина и 2 мл 0,003% раствора перекиси водорода (готовят из 3% раствора разведением в два этапа перед употреблением). * 0,5% раствор метилового зеленого на буферном растворе (pH 5,0) или 0,1% водный раствор метиленового синего. * Свежеприготовленные мазки фиксируют в 60% водном растворе ацетона в течение 30 секунд. * Промывают дистиллированной водой. * Инкубируют в инкубационной среде в течение 1 часа в термостате при 37 °C. * Промывают дистиллированной водой. * Докрашивают мазки метиловым зеленым или метиленовым синим в течение 10 минут. Модифицированный метод Шафран М. Г. и соавторов окисление О-дианизидина перекисью водорода в присутствии миелопероксидазы. * 10% спиртовой раствор формалина (1 мл 10% формалина и 9 мл этилового спирта). * Спиртовой раствор О-дианизидина: 24 мг О-дианизидина растворяют в 5 мл метанола и доводят дистиллированной водой до 9,9 мл. * 3% раствор перекиси водорода. * Реакционная смесь: к спиртовому раствору О-дианизидина прибавляют перед употреблением 0,1 мл перекиси водорода. * 0,25% водный раствор азура А или другой ядерный краситель. * Мазки фиксируют спиртовым раствором формалина в течение 10 — 15 секунд. * Споласкивают проточной водой. * На мазки наносят реакционную смесь на 2 — 3 мин при комнатной температуре. * Споласкивают проточной водой. * Докрашивают раствором азура в течение 10 — 15 секунд. * Споласкивают проточной водой и высушивают. Нормальные величины активности миелопероксидазы В крови здоровых людей 3 — 16% нейтрофилов имеют резко положительную, 60 — 90% — умеренно положительную, остальные — слабо положительную реакцию на миелопероксидазу. СЦК нейтрофилов здоровых людей равен 2,23 — 2,89. У детей в возрасте 7 лет СЦК составляет 2,03 — 2,11, к периоду полового созревания увеличивается у мальчиков до 2,163 — 2,237, а у девочек уменьшается до 1,949 — 2,011, к 15 годам половые различия выравниваются. Клиническое значение активности миелопероксидазы Реакция используется главным образом с целью диагностики острых лейкозов. При острых миелобластных лейкозах активность миелопероксидазы в опухолевых клетках варьирует от слабой до выраженной в зависимости от степени дифференцировки бластов. Так, при остром миелобластном лейкозе с низкой степенью дифференцировки бластов (M1 по ФАБ-классификации), количество пероксидазоположительных бластов невелико (не превышает 10%), степень активности фермента в них невысокая. Тогда как при остром промиелоцитарном лейкозе (M3 по ФАБ-классификации) миелопероксидаза выявляется практически в 100% бластных клеток, причем активность ее равнозначна таковой в зрелых нейтрофилах. Однако отсутствие точных количественных способов оценки цитохимических реакций не позволяет использовать их для верификации степени дифференцировки бластных клеток, а следовательно, и более тонкой дифференциальной диагностики острых лейкозов. Таким образом, с помощью цитохимических реакций определяют линейную направленность, а не степень дифференцировки бластов. При острых монобластных лейкозах реакция на миелопероксидазу в опухолевых клетках слабая, при острых лимфобластных лейкозах — отрицательная. Снижение активности фермента в нейтрофилах обнаружено при инфаркте миокарда, ревматизме, туберкулезе, опухолях. У больных хроническим миелолейкозом, особенно в терминальной стадии, СЦК снижается до 1,44 — 1,82. Острые лейкозы являются очень тяжелыми (злокачественными), предусматривают преобладание в костном мозге атипических бластных клеток. По названию бластных клеток, которые преобладают в костном мозге, а также в зависимости от цитохимических свойств последних, острые лейкозы делятся на: а) острые миелобластные лейкозы б) острые лимфобластные лейкозы в) острые промиелоцитарные лейкозы г) острые монобластные лейкозы д) острые эритромиелобластные лейкозы е) острые лейкозы морфологически и химически недифференцированные и др. (схема 31.20 – расположение — горизонтальное) См. в конце текста Желательно чтобы схема бала сдесь! )! a) Острый миелобластный лейкоз является самой частой формой у взрослых. Частота варьируется от 30 до 50% от числа всех больных лейкозом. Следует отметить тот факт, что при этой форме лейкоза процесс дифференцировки гранулоцитарной серии нарушен на уровне миелобластных клеток, он характеризуется нарушением равновесия между матуризацией ядра и органеллами цитоплазмы. Основной симптом острого миелобластного лейкоза – это инвазия периферической крови бластными клетками (80-90%). Ядра бластных клеток содержат много ядрышек. Их цитоплазма содержит азурофильную грануляцию и тельца Ауэра. Реакция на миелопероксидазу и липиды положительна. В костном мозге количество нормальных гематопоэтических клеток уменьшено, взамен преобладает инфильтрация лейкозными клетками. В периферической крови определяется анемия, выраженный гранулоцитоз и тромбоцитопения – гематологические симптомы, которые отражают нарушение нормального гемоцитопоэза в костном мозге. При этой форме лейкоза определяются очень молодые миелоидные клетки (миелобласты), наряду со зрелыми гранулоцитами (сегментоядерными), между которыми нет промежуточных клеток (промиелоцитов, миелоцитов, метамилоцитов), это явление называется “hiatus leicemicus”. б) Острый лимфобластный лейкоз характеризуется неконтролируемой пролиферацией клеток-предшественников лимфоидной серии, сопровождаемой лимфаденопатией, болезненностью костей (осалгией), увеличением лимфатических узлов и селезенки. Как правило, заболевают дети. Различают три морфологические формы острого лимфолейкоза: – острый лимфобластный лейкоз клетками L1 – это клетки, в которых ядерно/цитоплазматический индекс матуризации увеличен. Ядро имеет нормальную форму и содержит едва видимые ядрышки. Лимфобласты обладают малым диаметром, количество ядрышек снижено, вакуолизация цитоплазмы мало выражена, бластные клетки содержат полисахариды и кислую фосфатазу. Эта форма определяется у детей. – острый лимфобластный лейкоз клетками L2 – клетки, в которых ядерно/цитоплазматическое соотношение матуризации не увеличено. Клетки характеризуются большими размерами сегментированного ядра и четко видимыми ядрышками. При окраске мазков суданом, липиды в цитоплазме клеток не определяются. Также отрицательны цитохимические реакции на пероксидазу и эстеразу. Гликоген находится в цитоплазме в форме гранул. Эта форма встречается у взрослых. — острый микролимфобластный лейкоз клетками L3 – клетки больших размеров, овальным ядром и выраженными ядрышками. В клетках отмечается вакуолизация цитоплазмы. Эта форма встречается у детей и взрослых. Изучение T и B маркеров на поверхности бластных клеток сделало возможным классифицировать острые лимфобластные лейкозы на следующие формы: а) типичная форма – положительная реакция на антисыворотку, специфическую для острого лимфобластного лейкоза; б) клеточная форма T –имеет маркеры T на поверхности лимфоцитов; в) клеточная форма B – имеет Ig на поверхности лимфоцитов B; г) клеточная форма (0) – лимфоциты с наличием терминальной нуклеотидтрансферазой. Специфические гистохимические особенности острого лимфобластного лейкоза заключаются в том, что в бластных клетках не определяется пероксидаза, фософолипаза, взамен, характерной является положительная реакция на гликоген, расположенный в цитоплазме в форме гранул вокруг ядра. Реакция на миелопероксидазу и липиды является строго отрицательной. В крови определяется нормохромная анемия, высокая скорость оседания эритроцитов. в) Острый промиелоцитарный лейкоз. В костном мозге определяются атипичные бластные клетки и очень много промиелоцитов и атипических миелоцитов. Цитоплазма этих клеток богата грануляцией фиолетово-коричневого цвета, расположенной также и на ядре. Грануляция содержит кислые мукополисахариды. Клетки этой формы лейкоза содержат большое количество лизосом. Цитохимически эти клетки выявляется положительной реакцией на пероксидазу, кислую фосфатазу, липиды, неспецифическую эстеразу. Гликоген в цитоплазме диффузно распространен. г) Острый монобластный лейкоз. Встречается очень редко, мало отличается от миелобластного лейкоза. В периферической крови у больных этим лейкозом определяется большое число молодых гранулоцитов. Бластные клетки имеют форму боба, с множеством ядрышек в ядре. Цитохимически выявляется положительной реакцией на пероксидазу, кислую фосфатазу, неспецифическую эстеразу. д) Острый эритромиелобластный лейкоз. Характеризуется гиперплазией клеток эритроидной серии, без явных признаков гемолиза. Бластные клетки происходят из клетки — предшественницы миелопоэза. Этим объясняется переход острого эритромиелоидного лейкоза в миелобластный, а реже — и в миломонобластный. В периферической крови определяется нормо- и гиперхромная анемия, без ретикулоцитоза, вместе с тем, в крови определяется лейкоцитопения и тромбоцитопения. Дата добавления: 2014-12-23 ; просмотров: 19 ; Нарушение авторских прав (Ст. Преподаватель Свирина В.И.) В дифференциальной диагностике гемобластозов цитохимические исследования занимают важное место. Помимо глубокого теоретического значения, неоспорима их роль в уточнении различных форм лейкозов. Разработка эффективных методов дифференцированной терапии острых лейкозов, особенно острого лимфобластного лейкоза детей, стала возможной только после применения в клинической практике цитохимических методов диагностики. Ниже представлено краткое описание некоторых цитохимических методик. Они ограничены исследованиями, используемыми для идентификации различных форм острых лейкозов. К ним относятся реакции: на миелопероксидазу, полисахариды, хлорацетатэстеразу, альфа-ацетатнафтилэстеразу, кислую фосфатазу, липиды и кислые сульфатированные мукополисахариды. Реакция на пероксидазу.Пероксидаза является ферментом, разрушающим перекись водорода, образующуюся в клетке в процессе жизнедеятельности. Токсичная для клеток перекись водорода обезвреживается, освобождающийся при участии пероксидазы кислород вновь используется клеткой. Пероксидаза обнаруживается не во всех клетках, этот фермент отсутствует в лимфоидных клетках и постоянен для всех элементов миелоидного ряда. Ввиду его специфичности для нейтрофилов с ранних фаз созревания фермент получил обозначение миелопероксидазы. Уровень активности пероксидазы подвержен большим колебаниям.
Рис. 1. Положительная реакция на миелопероксидазу в клетках миелоидного ряда. Х о д р е а к ц и и. Фиксированные мазки крови или костного мозга заливают бесцветным раствором бензидина или ортотолидина. К раствору, перед тем как его наливают на мазок, добавляют каплю 3% перекиси водорода. Если в клетке содержится пероксидаза, то перекись водорода превращается в воду с выделением кислорода. Высвободившийся кислород окисляет бензидин или ортотолидин и переводит их в окрашенное соединение. При использовании бензидина цитоплазма клеток, содержащих пероксидазу, окрашивается в желтый цвет. Все клеточные элементы нейтрофильного ряда костного мозга, начиная с ранних фаз созревания, дают резко положительную реакцию. В препарате цитоплазма клеток окрашена в желтый цвет. Цитохимическая реакция на полисахариды (гликоген). Энергетические потребности клетки обеспечиваются гликогеном. Сложные метаболические процессы, связанные с расщеплением и ресинтезом гликогена под воздействием различных патологических процессов, могут извращаться. При цитохимическом анализе используется определение этих отклонений. Для обнаружения гликогена в клетках применяется ШИК – реакция. Х о д р е а к ц и и. Под воздействием реактива Шиффа, в состав которого входит фуксин, появление в цитоплазме клеток красных или фиолетово-красных зерен указывает на присутствие полисахаридов (гликогена). После проведения ШИК – реакции и докраски гематоксилином все клеточные элементы хорошо дифференцируются. Ядра нейтрофилов окрашиваются в синий цвет, цитоплазма заполняется мелкой красной зернистостью гликогена, как бы сплошной окраской. Существует различная степень окраски цитоплазмы.
Рис. 2. Положительная реакция на гликоген в гранулоцитах (диффузное окрашивание цитоплазмы) Моноциты содержат гликоген, выявляемый в виде мелких пылевидных красных гранул на фоне неокрашенной или розоватой цитоплазмы. В эозинофилах при ШИК – реакции неокрашивающихся из-за обилия эозинофильной зернистости, судить о содержании гликогена невозможно. Определение ШИК – реакции в эозинофилах, так же как в базофилах, практического значения не имеет. Наиболее ценно ее значение для исследования зрелых нейтрофилов и лимфоцитов. В лимфоцитах гликоген определяется в виде сравнительно крупных красных, не сливающихся между собой, зерен. Количество их находится в зависимости от ширины пояса, образованного цитоплазмой вокруг ядра. Для уточнения характера малых лимфоцитов с тонким ободком цитоплазмы необходимо внимательное изучение препарата под микроскопом. Только наличие крупных, хотя и единичных, красных зерен указывает на положительную ШИК – реакцию лимфоцитов.
Рис. 3. Положительная реакция на гликоген в лимфоцитах (в виде гранул вокруг ядра) Хлорацетатэстераза.Хлорацетатэстераза относится к неспецифическим эстеразам и наряду с реакцией на миелопероксидазу является биохимическим маркером клеток нейтрофильного ряда. Активность хлорацетатэстеразы, выявляемая в миелобластах, возрастает у промиелоцитов и миелоцитов. Активность фермента при остром миеломонобластном лейкозе низкая, а при остром монобластном лейкозе она совсем не обнаруживается. Положительная реакция на хлорацетатэстеразу с использованием метода Яма позволила наряду с реакцией на миелопероксидазу дифференцировать по бластным клеткам острый миелобластный лейкоз. Положительная реакция определяется по мелкой синей зернистости, выпадающей в цитоплазме клеток.
Рис. 4. Положительная реакция на хлорацетатэстеразу в миелобастах и созревающих гранулоцитах Альфа — ацетатнафтилэстераза (неспецифическая эстераза). Этот фермент также содержится в клетках нейтрофильного ряда, начиная с миелобласта. Реакция на альфа-ацетатнафтилэстеразу особенно ярко выражена у клеток моноцитарного ряда и их молодых форм. Она приобретает важное диагностическое значение при остром монобластном лейкозе. Характерна следующая важная отличительная особенность: при остром монобластном лейкозе неспецифическая эстераза подавляется фтористым натрием в концентрации среды 1,5 мг/мл. Этот признак позволяет отличить клетки монобластного ряда от клеток других ростков, также обладающих активностью неспецифической эстеразы. При положительной реакции на альфа — ацетатнафтилэстеразу цитоплазма клеток заполнена мелкой темно-бурой зернистостью.
Рис. 5. Положительная реакция на альфа-нафтил-ацетатэстеразу в миелобластах и созревающих гранулоцитах Щелочная и кислая фосфатаза.Активность фосфатаз в нейтрофилах выявляется гистохимическим методом Гомори и методом азосочетания. Активность щ е л о ч н о й ф о с ф а т а з ы характерна для зрелых форм нейтрофилов, при различных заболеваниях она подвержена закономерным изменениям. В частности, для хронического миелолейкоза характерно резкое снижение щелочной фосфатазы, что является важным диагностическим признаком. К и с л а я ф о с ф а т а з а в клетках связана с процессами клеточной дифференцировки. В клетках миелоидного ряда она выявляется уже в молодых предстадиях нейтрофилов, по мере вызревания клеток этого ряда ее активность снижается. Зрелые нейтрофилы лишены этой активности. Положительная реакция на кислую фосфатазу отмечается при остром миелобластном лейкозе. Резко положительна эта реакция при остром монобластном лейкозе.
Рис. 6. Положительная реакция на кислую фосфатазу в миелобластах и созревающих гранулоцитах Реакция на липиды. Липиды содержатся в клетках различных тканей. Клетки костного мозга и периферической крови содержат так называемые простые липиды в виде нейтральных жиров, свободных жирных кислот и др., а также сложных липидов — фосфолипидов. Особенно много их обнаруживают в зрелых нейтрофилах. Для выявления липидов в клетках крови применяют окраску суданом черным Б. В клетках лимфатического ряда липиды не выявляются. В клетках нейтрофильного ряда липиды могут быть определены уже в бластных элементах и по мере созревания клеток этого ряда количество суданофильных веществ в гранулоцитах увеличивается. Моноциты также содержат липиды, но в меньшем количестве, чем нейтрофилы.
Рис. 7. Положительная реакция на липиды в гранулоцитах Реакция на кислые мукополисахариды. Зернистость клеток гранулоцитарного ростка содержит кислые мукополисахариды; основным компонентом последних является хондроитин — 4 — сульфат. Наибольшее количество кислых мукополисахаридов синтезируют незрелые клетки зернистого ряда. Реакция на сульфатированные кислые мукополисахариды специфична при промиелоцитарном остром лейкозе и характеризуется появлением в цитоплазме богатой сравнительно крупной розово-вишневой зернистости. Ядра клеток окрашиваются в светлый серо-голубой цвет.
Рис. 8. Положительная реакция на мукополисахариды в созревающих гранулоцитах Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Студалл.Орг (0.009 сек.) Пероксидаза — фермент, содержащийся в тканях животного и разрушающий перекисные соединения, образующиеся в процессе метаболизма. Сущность реакции заключается в том, что пероксидаза разлагает перекись водорода, и образующийся при этом атомарный кислород быстро окисляет бензидин до парахинодиимида, который с остатками бензидина образует соединение сине-зеленого цвета, переходящего в бурый. —Постановка реакции. Готовят мясной экстракт 1 :4. В колбу помещают навеску 10—20 г мяса, измельченного ножницами до состояния фарша, добавляют 40-80 мл дистиллированной воды и экстрагируют в течение 15 мин, перемешивая содержимое колбы стеклянной палочкой или используя магнитную мешалку, после чего фильтруют через бумажный фильтр. —В пробирку вносят 2 мл профильтрованного мясного экстракта, добавляют 5 капель 0,2% спиртового раствора бензидина, содержимое пробирки взбалтывают, после чего добавляют две капли свежеприготовленного 1 % раствора перекиси водорода. Учет реакции: фильтрат из свежего мяса здоровых животных приобретает зелено-синий цвет, переходящий через несколько минут в бурый. В фильтрате из подозрительного мяса сине- зеленый цвет появляется с большой задержкой и быстро переходит в бурый. Фильтрат несвежего мяса цвета не изменяет. Определение летучих жирных кислот. В процессе порчи мяса происходит разложение органических соединений, вследствие чего в нем накапливаются летучие жирные кислоты. Постановка реакции. Анализ проводят на приборе для перегонки водяным паром (рис. 1). Навеску фарша массой (25 ± 0,01) г помещают в круглодонную колбу и приливают 150 мл 2% раствора серной кислоты. Содержимое колбы перемешивают, и колбу закрывают пробкой. Под холодильник подставляют коническую колбу вместимостью 250 мл, на которой отмечают объем 200 мл. Дистиллированную воду в плоскодонной колбе доводят до кипения и паром отгоняют летучие жирные кислоты до тех пор, пока в колбе не соберется 200 мл дистиллята. Во время отгона колбу с навеской подогревают. Титрование всего объема дистиллята проводят 0,1 н. раствором гидроокиси калия (или гидроокиси натрия) в колбе с индикатором (1 % раствор фенолфталеина) до появления малиновой окраски, не исчезающей в течение минуты. Параллельно при тех же условиях проводят контрольный анализ для определения расхода щелочи на титрование дистиллята с реактивом без мяса. Количество летучих жирных кислот, в миллиграммах гидроокиси калия в 25 г мяса вычисляют по формуле: Х=(V- V )· К·5,6. где V— количество 0, 1 н. раствора гидроокиси калия (или гидроокиси натрия), израсходованное на титрование 200 мл дистиллята из мяса, мл; V — количество 0,1 н. раствора гидроокиси калия (или гидроокиси натрия), израсходованное на титрование 200 мл дистиллята контрольного анализа, мл; К — поправка к титру 0,1 н. раствора гидроокиси калия (или гидроокиси натрия); 5,61 — количество гидроокиси калия, содержащееся в 1 мл 0,1 н. раствора, мг. За результат испытаний принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Вычисление проводят с погрешностью не более 0,01 мг гидроокиси калия. Учет реакции: мясо убойного скота считают свежим, если в 25 г содержится летучих жирных кислот до 4 мг гидроокиси калия (в мясе птицы — до 4,5 мг; в мясе кроликов охлажденном — до 2,25 мг, в замороженном — до 4,5 мг); мясо считают сомнительной свежести, если в 25 г содержится летучих жирных кислот от 4 до 9 мг гидроокиси калия (в мясе птицы — от 4,5 до 9 мг, в мясе кроликов охлажденном — от 2,25 до 9 мг, в замороженном — 4,5—13,5 мг); мясо считают несвежим, если содержание летучих жирных кислот более 9 мг гидроки-си калия в 1 г продукта (у кроликов в замороженном мясе — более 13,5 мг). Определение наличия аммиака и солей аммония. Сущность реакции заключается в том, что соли аммония и аммиак образуют с реактивом Нес-слера (двойная соль йодистой ртути и йодистого калия, растворенные в гидрате окиси калия) йодид меркураммония желто-бурого цвета. Постановка реакции. Готовят мясной экстракт 1 : 4. В колбу помещают навеску 5 г мяса, измельченного ножницами до состояния фарша, добавляют 20 мл бидистиллированной воды и энергично перемешивают в течение 15 мин, после чего фильтруют через бумажный фильтр. В пробирку вносят 1 мл мясного экстракта, добавляют 10 капель реактива Несслера и перемешивают. Учет реакции: свежее мясо — вытяжка приобретает зеленовато-желтый цвет, остается прозрачной или слегка мутнеет; мясо сомнительной свежести — вытяжка приобретает интенсивно-желтый цвет, наблюдается значительное помутнение, а для замороженного мяса характерно выпадение осадка; несвежее мясо — вытяжка приобретает желто-оранжевый или оранжевый цвет, наблюдается быстрое образование крупных хлопьев, выпадающих в осадок. Определение кислотного числа жира птицы. Кислотное число жира — это количество мг NaOH (КОН), необходимое для нейтрализации свободных жирных кислот, содержащихся в 1 г жира. Кислотное число показывает степень гидролиза жира на свободные жирные кислоты и глицерин. Подготовка материала к реакции. От каждого образца отбирают не менее 20 г внутренней жировой ткани, измельчают ее ножницами и вытапливают в фарфоровой чашке на водяной бане, затем фильтруют в химический стакан через 4 слоя марли и охлаждают до 20°С. Постановка реакции : В колбу или химический стаканчик отвешивают около 3—5 г исследуемого топленого жира (с точностью до 0,001 г), ставят в водяную баню и приливают 30-50 мл нейтрализованной смеси спирта с эфиром в соотношении 1:2. К полученному раствору добавляют 3—5 капель I % спиртового раствора фенолфталеина, после чего его быстро титруют 0,1 н. едким натрием до появления, не исчезающего в течение минуты, розового окрашивания. При помутнении смеси в процессе титровании в колбу добавляют 10 мл смеси спирта и эфира, перемешивают до исчезновения мути и заканчивают титрование. Расчет проводят по формуле: а — количество 0,1 н. едкого натрия, пошедшее на титрование, мл; 5,61 — количество едкого натрия, содержащееся в 1 мл 0,1 н. раствора, мл; К— поправка к титру 0,1 н. раствора NaOH. Примечание. Смесь спирта с эфиром предварительно нейтрализуют, к ней добавляют несколько капель 1 % раствора фенолфталеина и титруют 0,1 н. едким калием или едким натром до появления слаборозового цвета. Вычисление производят с погрешностью не более 0,01 мг NaOH. Учет реакции: жир от охлажденных и замороженных тушек всех видов птицы с кислотным числом до 1 мг NaOH считают свежим; куриный жир от охлажденных тушек с кислотным числом 1,0—2,5 мг NaOH, гусиный — 1,0-2,0 мг NaOH, утиный и индюшиный — 1,0-3,0 мг NaOH, а также жир от мороженых тушек всех видов птицы с кислотным числом 1,0—1,6 мг NaOH считают сомнительной свежести. Говяжий, свиной, бараний –выс.сорт-1,1, перв.сорт-2,2 мг NaOH Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском: Лучшие изречения: Только сон приблежает студента к концу лекции. А чужой храп его отдаляет. 8735 — 195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь. Отключите adBlock! Острый лейкоз, или, как его еще называют – лейкемия, является очень опасным заболеванием с зачастую неблагоприятным прогнозом. Он характеризуется злокачественным ростом клеток крови из-за мутации стволовых клеток, которые формируют клон. Основным условием его развития считается расстройство размножения и дифференциации клеток, за счет чего состав периферической крови содержит бласты. Выделяются некоторые обязательные цитохимические реакции при лейкозах. Список можно узнать у лечащего врача. К ним относят определение миелопероксидазы, липидная реакция, неспецифическая эстераза, щелочная и кислая фосфатаза, реакция на гликоген. Важно понимать, что в зависимости от форм лейкозов эти показатели будут изменяться. Для чего нужна цитохимия при лейкозеЦитохимия острых лейкозов важна для дифференциальной диагностики патологии, позволяет определить, какая именно лейкемия развилась у пациента. Анализ проводится посредством изучения мазков крови, костного мозга и лейкоконцентрата. За основу взяты цветовые реакции, поскольку окрашивание цитоплазмы обычно свойственно наиболее молодым клеткам. Применение основным цитохимических методов позволяет установить точный диагноз и назначить необходимую терапию. Гликоген является депо энергии организма. Он располагается в цитоплазме в виде средних вкраплений белого цвета. Чтобы его выявить, определяется количество клеток с таким характером pas, который считается положительным при окраске. Также проводится ШИК-проба. Большое количество этого вещества приводит к появлению зернистости в цитоплазме. Важно понимать, что в зрелых нейтрофилах содержится много гликогена, поскольку именно они выполняют фагоцитоз, который требует больших энергозатрат. В ростках костного мозга гликоген также определяется, поскольку он необходим для дифференцировки форменных элементов. Во время определения используется метод Шабадаша. Липиды локализуются во всех лейкоцитах, кроме лимфоидных клеток. При этом их основная масса связана с гранулоцитами, в которых реакция с суданом почти всегда дает положительный ответ. Жиры являются составляющей частью зернистости этих форменных элементов, а также эозинофилов. Накопление связано с созреванием форменных элементов. Содержание липидов в нейтрофилах высокое, поскольку зрелые нейтрофилы почти полностью заполнены ими и гликогеном. Содержание суданофильных гранул высокое в метамиелоцитах, а эритрокариоциты, эритроциты и ретикулоциты их не содержат. Однако они обнаруживаются в эритробластах. У клеток лимфоидного ряда также нет липидов, а их определение играет большую роль при диагностике острых миелобластных лейкозов. Наиболее точные результаты получаются, если использовать черный судан В. Пероксидаза катализирует различные субстраты при наличии перекиси водорода. Миелопероксидаза располагается в цитоплазме гранулоцитов и служит одним из маркера присутствия бластных клеток миелоидного ряда. Внутри них она утилизирует токсические остатки перекиси водорода. Цитохимическое определение подразумевает изучение ее активности по окислению хромогенов. Обнаружение возможно уже на стадии миелобласта. Активность этого фермента растет по мере того, как созреют форменные элементы. В здоровых сегментоядерных нейтрофилах миелопероксидаза имеет вид гранул, которые заполняют цитоплазму. Самая большая активность отмечается у эозинофилов. При миелобластных лейкозах активность фермента снижается. Еще одним ферментом, который определяется при цитохимических реакциях – щелочная фосфатаза. Активность растет по мере созревания клетки, максимальные величины определяются на стадии сегментоядерного нейтрофила, после чего она снижается. Определение происходит в специфических гранулах цитоплазмы. Фермент необходим для гидролиза эфиров ортофосфата в щелочной среде. Активность кислой фосфатазы затрагивает нейтрофилы и лимфоциты, а ее локализация связана с лизосомами. Это гидролитический фермент. Она обуславливает расщепление нафтолфосфатов до нафтола. При остром лейкозе миелодной природы имеет диагностическую ценность за счет того, что повышение активности обнаруживается именно в тех клетках, которые поражает заболевание. Неспецифические эстеразы являются группой ферментов, которые имеют отличия друг от друга за счет субстратной специфичности, а также действию коферментов и ингибиторов. Они входят в группу лизосомальных ферментов. Наиболее часто определяются:
Название обусловлено субстратом, который гидролизуется, а также реакцией среды активности. А-нафтилацетатэстеразу можно найти во всех клетках миелоидного ростка, начиная с миелобласта. Активность обнаруживается у эозинофилов, тромбоцитов, незначительного количества лимфоцитов, а также эритрокариоцитах. Самая мощная реакция отмечается у макрофагов и моноцитов. К группе дегидрогеназ относят ферменты, которые принимают участие в катализации окислительно-восстановительных реакций с активным участием двух субстратов. Целый ряд из них задействован в окислении, при котором происходит перенос протонов с окисляемого субстрата на другой. Ферменты, которые обуславливают катализацию восстановительный процессов, обладают специфической активностью к акцептору и донору водорода. Отмечается наличие дегидрогеназ практически во всех тканях организма. Внутри клетки они располагаются в цитоплазме или митохондриях, а их определение происходит цитохимическим методом посредством экспозиции форменного элемента с соответствующим субстратом, на который происходит воздействие этих ферментов при тетразолиевых соединениях, способных захватывать протоны, за счет чего образуются нерастворимые окрашенные соединения. При каким типе лейкоза выявляются положительные цитохимические реакции на пероксидазу, фосфатазу и липиды?А) остром лимфолейкозе б) недифференцируемом лейкозе 137. Укажите причины гипопластических анемий: в) недостаток в пище вит. В12 138. Укажите механизмы возникновения истинного лейкоцитоза: б) мобилизация костномозгового резерва лейкоцитов без активации лейкопоэза в) замедленное разрушение лейкоцитов г) повышенный выход лейкоцитов из сосудистого русла в ткани 139. Укажите, какие гематологические показатели характерны для острой гемолитической анемии, а) выраженная гипохромия эритроцитов б) уменьшение лейко-эритробластического отношения в костном мозге в) увеличение латентной железосвязывающей способности сыворотки г) выраженный ретикулоцитоз д) анизоцитоз, пойкилоцитоз эритроцитов е) выраженный нейтрофильный лейкоцитоз с ядерным сдвигом влево 140. Укажите наиболее частые причины железодефицитной анемии: а) недостаточное поступление железа с пищей у детей б) хроническая кровопотеря в) беременность и лактация г) заболевания желудочно-кишечного тракта д) тяжелые изнуряющие болезни, сопровождающиеся ООФ ж) наследственная атрансферринемия з) массивная острая кровопотеря к) хронические микробные энтериты м) паразитирование широкого лентеца н) отсутствие фактора Кастла в желудочном соке о) образование антител к мембране париетальных клеток желудка п) лучевое поражение организма (лучевая болезнь) 141. Какие заболевания сопровождаются эозинофилией ? в) хронический лимфолейкоз г) бактериальная пневмония е) хронический миелолейкоз 142. Какие изменения гемограммы характерны для нейтрофильного лейкоцитоза с регенеративным ядерным сдвигом влево? а) увеличение процентного содержания палочкоядерных нейтрофилов на фоне нейтрофилии б) значительное увеличение процентного содержания нейтрофилов на фоне нейтропении в) наличие в крови полисегментированных нейтрофилов г) появление в крови нейтрофильных метамиелоцитов д) появление в крови единичных промиелоцитов е) уменьшение в крови относительного содержания лимфоцитов 143. Укажите, какие изменения в периферической крови характерны для хронического миелолейкоза, а) появление бластных клеток с отрицательной реакцией на липиды б) появление бластных клеток с положительной реакцией на липиды в) появление в крови промиелоцитов и миелоцитов д) относительная нейтрофилия е) анемия и тромбоцитопения 144. Назовите факторы вызывающие лейкоз: А) реципрокная транслокация между хромосомами 22 и 9 в) полициклические углеводороды ж) отравление барбитуратами 145. Укажите состояния, при которых в большинстве случаев наблюдается б) приступ бронхиальной астмы в) сужение просвета трахеи е) сдавление увеличенной щитовидной железой 146. При каких заболеваниях нарушения вентиляции легких в большинстве случаев развиваются по рестриктивному типу? (5) г) двухсторонний закрытый пневмоторакс 147. При каких заболеваниях нарушения вентиляции легких, как правило, развиваются по обструктивному типу: (2) в) хронический обструктивный бронхит 148. Какой признак с наибольшей вероятностью свидетельствует о недостаточности внешнего дыхания? (1) 149. Какие типы дыхания могут развиться при понижении возбудимости дыхательного центра? (3) 150. Экспираторная одышка наблюдается при: (2) г) приступе бронхиальной астмы 151. Нарушение диффузных свойств альвеоло-капиллярных мембран играет основную роль в развитии дыхательной недостаточности при: (2) а) интерстициальном отеке легких б) нарушение синтеза сурфактанта 152. Укажите возможные причины левожелудочковой недостаточности (5) а) недостаточность митрального клапана б) инфаркт передней стенки левого желудочка сердца в) инфаркт боковой стенки левого желудочка сердца г) артериальная гипертензия малого круга кровобращения д) гипертоническая болезнь 153. Какой вид сердечной недостаточности вызывает развитие венозной гиперемии и отек легких? (2) 154. Укажите возможные последствия острой коронарной недостаточности (5) а) артериальная гипотензия б) сердечная недостаточность в) увеличение сердечного выброса 155. Нарушение, каких из функций сердца могут привести к возникновению сердечных аритмий? (3) 156. Какие из указанных ЭКГ-признаков соответствуют синоатриальной блокаде ? (3) б) полное выпадение отдельных сердечных циклов в) увеличение в момент выпадения сердечных циклов интервалов R-R в 2, 3 или 4 раза по сравнению с обычными интервалами R-R г) появление замещающих сердечных ритмов 157. Какие ЭКГ-признаки характерны для острой стадии (1) и стадии рубцевания (2) инфаркта миокарда? (1- 3; 2- 3) в) смещение сегмента ST выше изолинии г) смещение сегмента ST ниже изолинии д) положительный сглаженный зубец T е) отрицательный симметричный зубец T 158. К атриовентрикулярным блокадам относятся блокады, вызванные нарушением проведения импульсов по: (4) а) проводящей системе предсердий б) атриовентрикулярному узлу в) основному стволу пучка Гиса 159. Правильно ли, что коллапс возникает лишь при быстром значительном уменьшении ОЦК? (1) 160. Какие звенья включает в себя патогенез гипертонической болезни? (4) а) стойкое повышение возбудимости и реактивности симпатических нервных центров заднего отдела гипоталамуса б) снижение тормозного влияния коры головного мозга на подкорковые прессорные центры в) истощение функции коры надпочечников г) генетически обусловленное стойкое снижение натрий-, хлор- и водовыделительной функций почек д) генерализованный наследственный дефект мембранных ионных кальциевого и натрий-калиевого насосов е) генетически обусловленная гипопродукция минералокортикоидов 161. К кардиальным механизмам компенсации сердечной недостаточности относятся: (2) 162. Возникновению отеков при сердечной недостаточности способствуют: (3) б) повышение объема циркулирующей крови в) первичный альдостеронизм г) вторичный альдостеронизм д) уменьшение синтеза белков в печени 163. Какие патогенетические факторы играют ведущую роль в развитии первичной эмфиземы легких (5) а) повышение возбудимости холинергических рецепторов б) сенсибилизация организма в) раннее экспираторное закрытие дыхательных путей г) увеличение сопротивления воздушному потоку в бронхах и бронхиолах на выдохе д) постоянное повышение давления в альвеолах е) снижение эластичности легочной ткани ж) дефицит α1 — антитрипсина з) увеличение остаточного объема легких 164. Приводит ли гипокапния к снижению рН крови? (1) 165. Для дыхательной недостаточности характерны: (7) д) изменения напряжения О2 и СО2 в крови е) изменение показателей вентиляции легких 166. К терминальным типам дыхания относятся (3) 167. Укажите наиболее вероятные причины тахипное (3) б) понижение возбудимости дыхательного центра г) повышение возбудимости дыхательного центра д) ацидоз компенсированный е) повышение артериального давления ж) алкалоз компенсированный 168. Укажите возможные причины развития дыхательной недостаточности преимущественно обструктивного типа: (4) а) спадение бронхиол при утрате легкими эластических свойств б) повышение внутрилегочного давления (при приступе длительного интенсивного кашля) в) нарушение синтеза сурфактанта Дата добавления: 2018-08-06 ; просмотров: 137 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ источник ➤ |
| 7822 — 
или читать все. 
