Меню

Серологический анализ крови при сифилис

Серологическая реакция на сифилис – анализы, исследования крови

Диагностировать венерическое заболевание, вызываемое бледными спирохетами (трепонемами), помогают серологические реакции на сифилис. Не все методы позволяют выявить инфекционный процесс на начальной стадии. Вероятность того, что обследование покажет положительные результаты увеличивается со временем: во второй фазе болезни специфические тесты способны обнаружить возбудителя в 100% случаев. В третьем периоде серодиагностика становится менее информативной и выявляет сифилис только у одного пациента из шести. Тесты на венерическую инфекцию проводятся как лицам, имеющим признаки заражения, так и людям, деятельность которых связана с пищевой отраслью, детскими учреждениями и рядом других производств. Обязательное исследование крови на сифилис назначается донорам и больным, поступающим в стационары.

Серологическая диагностика

Серология позволяет выявить реакцию иммунной системы человека на проникновение в его организм возбудителей заболеваний.

Антитела, обнаруженные в крови, в большинстве случаев говорят об инфицировании.

Антигены, содержащиеся в клеточных стенках трепонемы, на разных этапах сифилиса способствуют синтезу определенных видов антител:

  1. Белковый антиген спирохеты характерен как для патогенных микроорганизмов, так и для непатогенных. Производство антител IgM происходит в быстрые сроки: их возможно выявить в крови в первые дни с момента возникновения язв на слизистых оболочках и коже пациента.
  2. Антиген полисахаридного типа способствует слабому синтезу антител. В серологии он считается малоинформативным.
  3. Липидный антиген вызывает продукцию неспецифических иммуноглобулинов, позволяющих при исследовании сыворотки выявить венерическую болезнь.

Серологические реакции имеют высокую актуальность при диагностировании инфекции скрытой формы, их поздних фаз. Методы помогают оценивать эффективность терапии пациентов. Исследование проводится с помощью нетрепонемных (реакция Вассермана, RPR, VDRL) и трепонемных тестов (иммуноферментный анализ, метод иммобилизации). К стандартным методам исследования на трепонему относят реакцию Вассермана и более совершенный способ – RPR.

Нетрепонемный вид тестов, направленных на выявление липидного антигена, может выдавать ложноположительный результат, поскольку структура схожа с некоторыми клеточными компонентами человеческого организма. В определенном состоянии происходит синтез антител к собственным липидам. Ложноположительное значение возможно:

  • при беременности;
  • у пожилых людей;
  • при введении наркотиков;
  • у лиц, страдающих хроническими инфекционными болезнями (вирусными гепатитами, туберкулезом, СПИДом, малярией);
  • при подагре;
  • у пациентов с аутоиммунными заболеваниями (рассеянный склероз, склеродермия, гломерулонефрит, ревматоидные артриты);
  • при инфицировании трепонемами других видов.

Для ложноположительных реакций Вассермана характерно низкое число антител (от 1:5 до 1:20), слабоположительные результаты (++).

Диагноз «сифилис» ставится после проведения нескольких видов серологических анализов.

При получении ложноположительных значений требуется проведение трепонемных тестов.

При врожденной форме сифилиса в первые месяцы жизни ребенка стандартные серологические тесты не имеют особого значения, поскольку нередко бывают положительными из-за передачи иммуноглобулинов через плаценту. Если плод инфицирован незадолго до рождения, тесты могут быть отрицательными из-за позднего производства организмом иммобилизинов.

Забор крови для проведения серологических анализов осуществляется из локтевой вены на голодный желудок. При использовании экспресс-методов материал берется из кончика пальца.

Показатели серологических реакций — как критерий выздоровления

Серологические анализы позволяют оценивать эффективность терапии больных сифилисом. Тесты проводятся при постановке диагноза, в течение курса лечения и после его завершения. Большую роль лабораторные исследования играют при первичной форме сифилиса. Они помогают определить длительность терапии. На вторичном и третичном этапе болезни специфический и неспецифический тест позволяет оценить результаты лечения.

Микробиологами были определены периоды негативации тестов у пациентов, имеющих разные клинические формы венерического заболевания после завершения терапии. У незначительного числа больных положительные реакции наблюдаются и после полноценного лечения. В таких ситуациях можно говорить о серорезистентности пациентов или о стойко положительном анализе. Причины этих состояний остаются не до конца выясненными. Врачи предполагают, что серорезистентность может наблюдаться по следующим причинам:

  1. Несвоевременно начатая или неправильно проведенная терапия.
  2. Сифилитический больной страдает другими хроническими патологиями (туберкулезом, малярией).
  3. Наличие возбудителя в очагах, не поддающихся воздействию антибактериальных препаратов.
  4. У пациента имеются проблемы с нарушением липидного обмена.
  5. Преобразование бледных спирохет в формы, на которые пенициллин не проявляет эффективность.
  6. У больного в организме содержится флора, синтезирующая пенициллиназу. В этом случае бактерии могут нейтрализовать действие антибиотика.
  7. У пациента наблюдаются аутоиммунные реакции.

Какие гинекологические больные нуждаются в обязательном серологическом обследовании на сифилис

Врачи-гинекологи должны выписывать анализы на проведение серологических исследований женщинам, страдающим частыми обострениями хронического сальпингоофорита. Причиной заболевания могут стать бледные трепонемы, вызывающие сифилис. Также направление на диагностические тесты должны выдаваться пациенткам, у которых обнаруживают кольпиты, вульвовагиниты, врожденные патологии половых органов.

Возбудители сифилиса — бледные спирохеты — могут стать причиной развития серьезных нарушений в работе не только половых и мочевыделительных органов. При длительном инфицировании у пациентов выявляются изменения со стороны сердечно-сосудистой, нервной систем. Патогенные микроорганизмы способны повреждать структуры органов, вызывая развитие деструктивных процессов и многих хронических заболеваний, терапия которых достаточно затруднительна и требует высокого профессионализма врачей.

Нелеченный сифилис приводит к полной потере работоспособности и нередко — к смертельному исходу.

Серологическая диагностика играет важную роль в диагностировании сифилиса. Методы, применяемые в лабораториях, не всегда могут обнаружить возбудителя заболевания. В начальной стадии сифилиса серологические реакции часто показывают отрицательные результаты. На этом этапе внешние признаки у больных в большинстве случаев не проявляются, но опасность кроется в высокой вероятности инфицирования окружающих и половых партнеров. Для постановки правильного диагноза требуется проведение целого комплекса исследований, включающих консультации у неврологов, гинекологов, проктологов, лор-врачей.

источник

Какие серологическое исследование на сифилис бывают?

Сифилис – тяжелая патология, передающаяся преимущественно половым путем. Клиническая картина у каждого пациента индивидуальна, поэтому распознать болезнь сразу бывает затруднительно. Но есть лабораторные тесты, основанные на серологии, они с высокой степенью вероятность могут показать наличие серьезного недуга в организме. Серологическая диагностика сифилиса успешно применяется во всем мире для выявления бледным трепонем как на ранних, так и на поздних стадиях инфицирования.

Разберем основные виды данных анализов, рассмотрим, когда они могут давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Что такое серологический анализ и кому назначается?

Серология – это метод исследования, при котором в крови обнаруживается не сам возбудитель заболевания, а реакция иммунной системы на него. Если антитела есть, то можно говорить о том, что в крови присутствует и вирус, который вызвал активизацию работы иммунитета.

Серологическое исследование не всегда показывает точный результат. Антитела могут сохраняться в организме на протяжении всей жизни человека, даже после того, как возбудитель патологии был уничтожен. Но на начальном этапе болезни, когда антиген еще не достиг максимальной концентрации в организме, только при помощи серологии можно диагностировать сифилис.

Читайте также:  Диагноз рак по результатам анализов крови

Исследование на сифилис серологического типа назначается, в первую очередь, для постановки диагноза лицам, у которых:

  • был незащищенный секс с новым партнером;
  • был любой контакт с человеком, у которого ранее диагностирован сифилис;
  • наблюдается появление признаков, характерных для заболевания, например, развитие первичного шанкра;
  • есть подозрение на скрытые формы болезни, при которой отсутствуют какие-либо симптомы.

Высокая необходимость в проведении серологических реакций на сифилис отмечается при кольпитах, вульвовагинитах и сальпингоофоритов с частыми обострениями. Беременные женщины должны пройти через обследование в первый триместр.

При уже выявленном недуге исследование крови на сифилис дает возможность определить тактику лечения и контролировать процесс выздоровления.

Виды тестов на сифилис

Существует две категории серологических анализов на сифилис: трепонемные и нетрепонемные.

К трепонемным (специфическим) исследованиям относят:

  • РСК-тест;
  • ИФА (иммуноферментный анализ);
  • РИФ-анализ;
  • РПГА-тест;
  • Иммуноблотинг.

Нетрепонемные (неспецифические) серологические анализы бывают:

  • RW (реакция Вассермана) с липидными антигенами;
  • RPR;
  • VDRL.

Чтобы понимать, в чем их отличия, каждый метод нужно рассмотреть более подробно.

Трепонемные исследования

В этой группе выделяют следующие виды исследований:

  • Иммуноферментный анализ обнаруживает общее количество иммуноглобулинов IgM и IgG, вырабатываемых иммунной системой для борьбы с бледной трепонемой. Проводить данный серологический анализ можно уже через 3 недели после того, как возбудитель патологии попадет в организм любым возможным путем. ИФА-тест является одним из самых точных методов диагностики сифилиса. Если другие используемые методы показывают положительный результат, пациенту не ставится диагноз, пока не будет проведен иммуноферментный анализ. При проведении анализа используется кровь пациента, которая помещается в лунки на полчаса. Это времени достаточно, чтобы антигены могли осесть на стенках. После этого добавляются антитела сифилиса, которые связываются с возбудителями патологии. В лунки вливают фермент, который показывает результат в виде окрашивания вещества.
  • РПГА-тест на сифилис представляет собой добавление к крови больного специального реагента: антигенов бледной трепонемы. При положительной реакции эритроциты в крови больного склеиваются и образуют осадок. Такой процесс называется агглютинация, по его выраженности можно выявить не только факт наличия сифилиса, но и выраженность патологического процесса. Серологический Анализ эффективен уже через 2-4 недели после инфицирования. При вторичном и третичном сифилисе эффективность метода приближается к 100% при первичном – к 86%. После выздоровления РПГА-тест показывает ложный положительный результат.
  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ-тест) или иммобилизации трепонем в современной медицинской практике не используются из-за очень высокой стоимости исследования. Для РИФ-теста используется антигены в виде живых трепонем, которые смешиваются на стекле с сывороткой крови. Затем добавляется люминесцентная сыворотка против иммуноглобулинов, меченная флюорохромом, которая связывается с глобулинами на поверхности трепонем. Под специальным микроскопом образуется свечение, которое оценивается по четырехбальной шкале, где 1 – это негативная реакция или отсутствие свечения.

Читайте также по теме

В сложных случаях диагностики, когда невозможно поставить диагноз даже при серии проведенных серологических анализов, нетрепонемных и, в особенности, трепонемных, используется метод под названием иммуноблотинг. Его единственным минусом является длительность исследования – около недели. Метод позволяет оценить одновременно реакцию на разные иммунодоминантные компоненты трепонемы.

Нетрепонемные исследования

Среди нетрепонемных тестов выделяют:

  • RW или реакция Вассермана. Технология проведения серологического анализа представляет собой введение в образец крови исследуемого пациента кардиолипин из сердца быка, который является антигеном. Если в крови пациента есть антитела, возникнет реакция, которая даст понять, что человек болен. В зависимости от интенсивности этой реакции, которая оценивается по четырехбалльной шкале, можно понять, насколько серьезна степень поражения. Реакция Вассермана показывает верный диагноз у 9 пациентов из 10, уже на 6 неделе после начала появления симптомов, то есть, шанкра на коже или слизистой.
  • RPR или Rapid Plasma Reagins – плазмареагиновый тест, который является современной альтернативой анализу на реакцию Вассермана. Механизм исследования основан на выявлении антител – иммуноглобулинов IgG b IgM, которые попадают в кровоток из клеток организма, поврежденных бледной трепонемой. Результативность исследования оценивается в 100% при вторичном и латентном сифилисе, и до 80% при первичной форме болезни. Проводить анализ можно уже через неделю после начала симптоматики. При третичном сифилисе информативность теста резко снижается.
  • VDRL или Veneral Disease Research Laboratory – исследование на выявление антител к липопротеидам бледных трепонем. Исследование особенно эффективно при вторичном сифилисе. При его проведении кровь или спинномозговая жидкость смешивается с антигенами в лунках с механическим вращением. Если антитела в биологической жидкости есть, обнаруживается реакция, которую потом можно увидеть в микроскоп.

При проведении любого результат важно знать о риске ошибочного результата. Вероятность этого невысока, но именно поэтому в доказательной медицине используется принцип повторения исследований для подтверждения не менее трех раз.

Ложноотрицательные и ложноположительные результаты

Тест на реакцию Вассермана может давать неправильный результат не только по причине халатного отношения к работе сотрудников, но из-за внутренних факторов самого исследуемого. К этим факторам относятся:

  • серьезные патологии: туберкулез, проказа, малярия, системная красная волчанка, лептоспироз;
  • физиологические состояния: беременность, реабилитация после наркоза, менструация;
  • неправильная подготовка к анализу: употребление алкоголя, жирной пищи и некоторых лекарств.

RPR-тест и РПГА-тест показывают ложноположительные результаты нечасто, но у пациентов с любыми аутоиммунными заболеваниями риск неправильного анализа возрастает. VDRL-тест дает ложноположительный результат всего в 5% случаев, как правило, при аутоиммунных процессах и при беременности. Этот анализ применяется реже, чем RPR-тест, так как антилипидные антитела могут говорить не только о сифилисе, а о целом ряде других патологий. ИФА-методы показывают ошибочный положительный результат при повышенном ревматоидном факторе.

источник

Лабораторные методы диагностики сифилиса

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — бледная трепонема. При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Читайте также:  Сколько времени действуют анализы крови на вич и гепатит

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

Читайте также:  Анализ крови норма хламидий igg

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

источник