Меню

Технология проведения общего анализ крови

Технология проведения общего анализ крови

Забор крови, с последующим её исследованием производился у мужчин в возрасте от 20-ти до 35-ти лет, до и после физической нагрузки. В исследовании приняла участие группа из тридцати трёх человек, каждый из которой, после взятия пробы до физической нагрузки, проходил стандартную тренировку в течение часа. В таблице 3 сведены типы и продолжительность упражнений, которым подвергались все испытуемые.

Таблица 3 — типы физической нагрузки, применяемой в исследовании

Тренировка включала в себя 15 минут бега в нормальном темпе (один тридцатиметровый круг в минуту); выполнение комплекса упражнений (подтягивания, отжимания от пола, приседания) в течение 15 минут в ускоренном темпе (20 подтягиваний в минуту, 50 приседаний в минуту, 30 отжиманий в минуту); 30 минутный спарринг в нормальном темпе (20-25 бросков в минуту). По окончанию тренировки вновь бралась проба такого же объёма, у тех же испытуемых, что и до тренировки.

Техника проведения общего анализа крови

Основные этапы выполнения общего анализа крови:

2 приготовление мазков крови;

3 проведение анализов на гематологическом анализаторе;

6 подсчёт лейкоцитарной формулы.

Взятие материала. Кровь для исследования получили путём прокола четвёртого пальца левой руки обследуемого слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. В зависимости от толщины кожи глубина прокола составляет 2-3 мм. Обработанная кожа пальца высыхает несколько секунд. Цель этого «высыхания» — исключить растекание крови по пальцу, а также гемолитического воздействия антисептика на эритроциты. Скарификатор одноразового использования плотно зажимается между указательным и большим пальцами правой руки; производится прокол. Прокол произвели перпендикулярно рисунку кожных покровов пальца, так как в этом случае происходит повреждение нескольких капилляров, ход которых совпадает с ходом линий кожного рисунка. Учитываем, что разрез произведённый параллельно кожным линиям, спадается, что затрудняет забор крови. Первую, выступившую каплю крови удалили ватным тампоном, а последующие были взяты на исследование. Взятую кровь поместили в пронумерованные и обработанные раствором антикоагулянта. Трилоном-Б, пластиковые микрокюветы. На следующем рисунке показаны одноразовые пластиковые микрокюветы, более удобные и безопасные в использовании, чем стеклянные пробирки.

Все манипуляции связанные с забором крови проводились используя стерильные комплекты инструментов для взятия крови (капилляры Панченкова, предметные стёкла, скарификаторы и микрокюветы). Для каждого обследуемого использовалась индивидуальная пара перчаток и стерильных ватных укладок. Все манипуляции проводились в соответствии с требованиями приказа №165 МЗ РБ от 25.11.2002 г «О методах стерилизации и дезинфекции в медицинских учреждениях» [21].

Рисунок 1 — Микрокюветы с раствором антикоагулянта

Приготовление мазков крови. Для изготовления мазка крови использовались тщательно обезжиренные предметные стёкла. Мазок крови готовился шлифованным стеклом с идеально ровным краем, ширина которого была приблизительно на 2-3 мм уже предметного стекла. К куполу свеже выпущенной из прокола капли было сделано прикосновение предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края, не касаясь кожи в месте прокола. Размер капли на стекле не менее 2-3 мм в диаметре. Шлифованным стеклом, приставленным к предметному под углом 45°, быстрым движением справа налево был сделан мазок. Критерием правильности выполненного мазка является его полупрозрачность и желтоватый цвет. Техника приготовления мазка крови представлена на следующем рисунке.

Рисунок 2 — Техника приготовления мазка крови

Проведение анализов на гематологическом анализаторе. Для исследований использовался гематологический анализатор SISMYX-500. Взятую кровь в миниёмкастях тщательно перемешали и поместили в загрузочную часть аппарата. Предварительно была проведена калибровка данного аппарата, которая заключалась в проведении полного анализа микрокюветы с дистиллированной водой. Определение параметров исследуемой крови протекает в автономном режиме, без непосредственного участия человека. По завершению цикла исследования сняли выданные аппаратом результаты [22].

Изображение аппарата SISMYX-500, и момента отбора пробы для анализа, представлены на рисунке 3.

Фиксация мазков крови. Данный этап предохраняет форменные элементы от содержащейся в красителях воды, под влиянием которой в не фиксированных мазках происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов.

Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и тем самым закрепляет препарат на стекле. В качестве фиксирующей жидкости использовали раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду. Высушенные мазки опускались в широкогорлую банку с фиксатором на 3-5 минут. Далее пинцетом мазки были извлечены и высушены на воздухе.

Рисунок 3 — Гематологический анализатор SISMYX-500

Окраска мазков крови. Фиксированные сухие мазки поместили в контейнер, который опустили в кювету с рабочим раствором красителя и выдержали в нём экспозицию в 30 минут.

Затем, контейнер был перенесён в кювету с водопроводной водой, а затем в вертикальный штатив для сушки. В качестве красящего раствора был использован краситель по прописи Романовского-Гимзы. В состав красителя входят: азур-2 (смесь равных количеств азура-1 и метиленового синего) и эозин. Критериями правильности данной окраски являются розово-оранжевые гранулы эозинофилов, светло-розовый цвет эритроцитов, нейтрофильная зернистость фиолетового цвета.

Подсчёт лейкоцитарной формулы производят с помощью иммерсионной системы микроскопа с увеличением Ч630. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Удобный обзор препарата настраивают с помощью микро- и макровинтов. Для регистрации клеток при подсчёте лейкоцитарной формулы использовался счётчик лабораторный СЛ-1.

Это простейший арифмометр снабжённый клавишами, обозначенными буквами для подсчёта соответствующих видов лейкоцитов, изображён на рисунке 4.

Рисунок 4 — Счётчик лабораторный СЛ-1

Подсчёт лейкоцитов производился в тонкой части мазка, где эритроциты располагаются одиночно. Препарат просматривают по зигзагообразной линии («линии Меандра») в количестве 3-5 полей зрения. Когда сосчитано 100 клеток, счётчик издаёт характерный сигнал, что означает окончание подсчёта лейкограммы данного препарата. Подсчитывались только целые, не разрушенные клетки.

Статистическая обработка результатов исследования

Для оценки влияния физической нагрузки на состояние показателей периферической крови использовались результаты общего анализа крови до и после физической нагрузки.

В ходе исследования нами были вычислены среднее арифметическое, стандартное отклонение, стандартная ошибка, коэффициент вариации по продуктивности и устойчивости внимания, а также по показателям темпа выполнения.

Средняя арифметическая вычисляется по формуле:

где Xi — значение признака, варианта;

где x2 — сумма квадратов центральных отклонений, т. е. квадратов разностей между каждым значением и средней арифметической;

n — 1 — число степеней свободы, равное числу объектов в группе без одного.

Ошибка стандартного отклонения:

где у — стандартное отклонение;

м — средняя арифметическая.

В результате обработки полученного материала, был проведён статистический анализ, построены графики зависимости показателей концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, от воздействующего на них фактора физической нагрузки, а также таблицы результатов дисперсионного анализа, для каждого из исследуемых показателей.

Статистическая обработка результатов исследований выполнена с использованием прикладных программ MS Excel 2007 и Statistica for Windows 6.0. Оценка достоверности различий осуществлялась на основе критерия Фишера. Влияние физической нагрузки на показатели крови оценено методом однофакторного дисперсионного [23].

источник

Техника проведения общего анализа крови

2.1. Техника забора крови и подготовки
образца крови для исследования

Шаг А. Подготовка растворов, пробирок и другого инструментария (табл. 1).

Таблица 1. Необходимые подготовительные процедуры при проведении общего анализа крови

Определяемый показатель Посуда Раствор, его объем и состав
СОЭ Химическая пробирка и капилляр Панченкова 5 %-ный раствор C6H5O7Na3∙5H2O набрать в капилляр Панченкова до метки 0,75 и затем выдуть в химическую пробирку
Гемоглобин Химическая пробирка 4 мл трансформирующего раствора (ацетоциангидрин – 0,5 мг, калий железосинеродистый – 0,2 г, натрия гидрокарбонат – 1 г, дистиллированная вода – до 1 л)
Количество эритроцитов Химическая пробирка 4 мл изотонического раствора хлорида натрия
Количество лейкоцитов Химическая пробирка 0,4 мл 3–5 %-ной уксусной кислоты (уксусная кислота разрушает эритроциты, визуализируя тем самым лейкоциты)
Количество тромбоцитов Химическая пробирка 4 мл 1 %-ного раствора оксалата аммония (раствор разрушает эритроциты, визуализируя тромбоциты)

Забор крови из мякоти пальца (капиллярная кровь).

Тщательно протирают кожу мякоти пальца ватным шариком, смоченным спиртом, делают укол стерильным копьем до упора. Первую выступившую каплю крови вытирают сухим ватным шариком; из следующих капель, выступающих из мест укола при легком надавливании, быстро набирают необходимое количество крови: для СОЭ, для определения гемоглобина, для определения числа эритроцитов, для определения числа лейкоцитов, для исследования лейкоцитарной формулы, для определения тромбоцитов.

Забор крови из вены (венозная кровь).

Накладывают жгут на 8–10 см выше локтевого сгиба. Обрабатывают кожу локтевого сгиба над обнаруженной по характерному вздутию вены шариком, смоченным спиртом или другим антисептиком. В вену вводят иглу с подсоединенным шприцем и набирают необходимое для анализа количество крови. Кровь осторожно (не вспенивая, так как при этом происходит разрушение эритроцитов и других клеток крови) выпускают в пробирку с порошком ЭДТА или другим антикоагулянтом. Пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают кровь для распределения антикоагулянта, опрокидывая пробирку сначала пробкой вниз, затем пробкой вверх. В настоящее время используются специальные системы для забора крови и ее одновременного помещения в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. Предпочтение исследования венозной крови связано с возможностью одновременного получения объема крови, необходимого для разных анализов.

Шаг В. Внесение крови в подготовленную лабораторную посуду

Кровь вносят в подготовленную посуду специальным капилляром объемом 20 мкл согласно приведенным в табл. 2 разведениям в указанном выше порядке. Набирают ее капилляром до метки 0,02 из мест укола в мякоти пальца или пробирки с венозной кровью, кончик капилляра промокают фильтровальной бумагой, выдувают кровь в соответствующую пробирку и промывают капилляр (путем заполнения капилляра и выдувания раствора) в реактиве той же пробирки для максимально полного внесения образца крови.

Таблица 2. Объемы крови для определения показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Объем диагностического раствора Объем крови
СОЭ 1/4 часть капилляра Панченкова (до отметки 0,75), раствор вносится в химическую пробирку Полный капилляр Панченкова до отметки 0, кровь вносится в химическую пробирку с раствором цитрата калия (соотношение кровь : цитрат = 4 : 1)
Гемоглобин 4 мл 0,02 мл
Количество эритроцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)
Количество лейкоцитов 0,4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 20)
Количество тромбоцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)

Затем для последующего определения лейкоцитарной формулы каплю крови наносят на край обезжиренного предметного стекла и быстро готовят тонкий мазок с помощью шлифованного стекла, краем которого быстрым движением продвигают каплю крови по предметному стеклу.

Таким образом, после выполнения шага В для исследования образца крови имеются 4 пробирки со смесью крови и соответствующего реактива и приготовленный тонкий мазок крови на предметном стекле, необходимые для дальнейших диагностических процедур с использованием специального оборудования (табл. 3).

Таблица 3. Оборудование и методы определения основных показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Необходимое оборудование Метод
СОЭ Аппарат Панченкова (штатив и капилляры – 1 на каждый образец крови) Седиментационный с последующим визуальным учетом
Гемоглобин Фотоэлектроколориметр Биохимический с ФЭК-учетом результатов
Количество эритроцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество лейкоцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество тромбоцитов Камера горяева, световой микроскоп Микроскопический

2.2. Техника определения показателей
общего анализа крови

источник

Технология проведения общего анализ крови

Для выявления большого количества заболеваний и постановки правильного диагноза у больного в медицине широко применяется анализ крови, расшифровка результатов которого осуществляется медицинским сотрудником, имеющим соответствующую квалификацию. Сделать анализ крови можно в специализированной клинической лаборатории, которая имеется практически в каждом лечебном учреждении. Общий анализ представляет собой процедуру проведения исследования, которая осуществляется в обязательном порядке каждому пациенту, обращающемуся за специализированной медицинской помощью в поликлинику или стационарное отделение больницы.

Понятие «общий анализ крови» является достаточно широким. Общий анализ крови позволяет провести исследование и описание порядка нескольких сотен параметров крови. Кровь сдается на проведение общего анализа при необходимости выявления в организме враждебных микроорганизмов, оценки состояния иммунитета, определения концентрации в организме человека гормонов и ферментов и при необходимости исследовать физические и химические свойства.

Клинический анализ — своеобразная численная таблица состояния больного, которая дает возможность установить качественный и количественный состав, подсчитать уровень содержания в крови гемоглобина и некоторых видов пептидов и углеводов, содержащихся в сыворотке. Общий анализ позволяет получить данные, которые при комплексном рассмотрении позволяют сделать предположение о наличии у человека того или иного заболевания или расстройства.

Общий клинический анализ позволяет установить высокую концентрацию лейкоцитов, которая достоверно указывает на наличие воспалительного процесса в организме, но конкретно об очаге воспаления и его локализации анализ крови ничего сказать не может. Для этого организм подвергается исследованию при помощи специализированных методов обследований, таких как УЗИ или рентген.

Подавляющее количество медицинских специалистов рекомендуют осуществлять сдачу крови общего анализа в утреннее время до первого приема пищи, то есть натощак. Перед сдачей крови в лабораторию на проведение общего анализа не требуется особая подготовка. Материалом для проведения исследований является сыворотка. Общий анализ крови должен быть проведен не позже чем через три часа после осуществления забора материала для исследований.

Общий анализ крови, взятой из вены, является наиболее простым и в то же время достаточно информативным способом диагностирования отклонений в функционировании организма. Простота проведения этого исследования позволяет осуществить его в любой клинической лаборатории каждого медицинского учреждения. Расшифровка полученных результатов дает возможность диагностирования отклонений в организме на самых ранних стадиях их развития.

Исследования крови из вены позволяют установить результативность проводимого лечения. Проведение исследований крови позволяет у человека выявить наличие аллергических реакций на те или иные продукты питания или медицинские препараты еще до их использования и применения. Это позволяет избежать аллергических осложнений, возникающих в процессе проведения лечебных мероприятий. Однако требуется помнить, что при помощи только общего анализа невозможно поставить точный диагноз больному.

Для постановки точного диагноза, помимо общего клинического анализа, используются более специфические методы обследования организма человека, применение которых может быть характерно исключительно для определенного типа заболеваний.

Общий анализ крови позволяет проанализировать биохимическую, иммунологическую, гормональную и серологическую составляющие крови.

Сделать общий анализ достаточно легко. Практически каждому человеку приходилось сдавать кровь из пальца. Однако мало кто из людей способен разобраться в данных, полученных в результате общего анализа крови. Результаты анализа позволяют получить большое количество информации о состоянии организма. Познакомившись с некоторыми специальными терминами и параметрами нормы, можно даже обычному человеку сделать вывод о состоянии своего организма.

Взрослые пациенты сдают кровь для исследования, как правило, из безымянного пальца любой руки. Если требуется провести исследование состава крови младенца, то взятие материала из пальца является проблематичным, поэтому у младенцев осуществляется забор крови для исследования из пятки, которая имеет хорошо развитую сеть кровеносных сосудов.

В последнее время в медицинских учреждениях проводят анализ крови из вены. Это связано с тем, что для определения большинства показателей анализа крови применяются электронные методы и электронные приборы, которые для своего функционирования требуют больший объем исследуемого материала. Использование для анализа крови из вены позволяет исследовать ее на большее число разнообразных показателей. Результат такого исследования — сводная таблица полученных показателей.

Расшифровка полученных показателей осуществляется лечащим врачом. В соответствии с существующими требованиями, результаты, которые показывает анализ крови, представляются лечащему врачу в виде таблицы.

Наименование показателя Обозначение Норма
Число эритроцитов RBC для мужчин: 4.3 – 6.2 х 10 12 /л
для женщин: 3.8 – 5.5 х 10 12 /л
для детей: 3.8 – 5.5 х 10 12 /л
Гемоглобин HGB, Hb 120 – 140 г/л
Гематокрит HCT для мужчин: 39 – 49%
для женщин: 35 – 45%
Число тромбоцитов RLT 180 – 320 х 109/л
Число лейкоцитов WBC 4,0 – 9,0 х 10 9 /л
Число гранулоцитов GRA, GRAN GRA# 1,2-6,8 х 109/л (или 1,2-6,8 х 103/мкл)
GRA% 47 — 72%
Число моноцитов MON MON# 0.1-0.7 х 109/л (или 0,1-0,7 х 103/мкл)
MON% 4 – 10%
Содержание лимфоцитов LYM, LY% LYM# 1,2 — 3,0х109/л (или 1,2-63,0 х 103/мкл)
LY% 25-40%
Ширина распределения эритроцитов RDWc 11,5 – 14,5%
Средний объем эритроцита MCV 80 – 100 фл
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците MCHC 30 – 370 г/л (g/l)
Среднее содержание гемоглобина в эритроците MCH 26 – 34 пг (pg)
Содержание смеси базофилов, моноцитов, эозинофилов и созревающих клеток MID, MXD MID# (MID, MXD#) 0,2-0,8 x 109/л
MID% (MXD%) 5 – 10%
СОЭ (скорость оседания эритроцитов) ESR для мужчин: до 10 мм/ч
для женщин: до 15 мм/ч

Показатели общего анализа крови, полученные при исследовании, не могут являться абсолютной истиной, они только служат в качестве дополнительной помощи при установлении точного диагноза больного.

При проведении общего анализа получают большое количество данных, в которых разобраться может только специалист, имеющий соответствующее медицинское образование.

Наиболее распространенные показатели общего анализа крови, которые определяются в клинической лаборатории, это:

  • гемоглобин;
  • количество эритроцитов;
  • цветовой показатель;
  • количество ретикулоцитов;
  • количество тромбоцитов;
  • показатель СОЭ;
  • лейкоцитарная формула;
  • и некоторые другие.

Для того чтобы понять, что означает каждый из параметров и какие могут быть отклонения от нормы, следует осуществить расшифровку результатов анализа, которые, как правило, представляются в виде таблицы, и рассмотреть каждый из них в отдельности.

Гемоглобин является основным компонентом красных кровяных клеток — эритроцитов. Часто люди задаются вопросом о том, что показывает анализ количества гемоглобина. Снижение количества гемоглобина может свидетельствовать о развитии в организме первых признаков появления анемии. Причинами снижения количества гемоглобина в эритроцитах может быть:

  • недостаток железа, которое используется в процессе синтеза гемоглобина;
  • недостаток витамина В12.

Значительное повышение количества гемоглобина может быть косвенным симптомом развития таких недугов в организме, как рак крови, легочная или сердечная недостаточность. Количество гемоглобина в норме отличается у мужчин, женщин и детей. Норма для мужчин составляет 135-160 грамм на литр, для женщин этот показатель составляет 120-140 грамм на литр, для детей в возрасте до одного года нормальным значением считается гемоглобин в крови в пределах 100-140 грамм на литр. По истечении года жизни этот показатель постепенно снижается до нормального уровня взрослого человека.

Лейкоциты являются клетками, которые обеспечивают иммунологическую защиту организма от враждебных ему инородных тел. Благодаря наличию этих клеток в организме осуществляется его защита от воздействия патогенных микроорганизмов, вирусов и их токсинов. Что показывает результат анализа крови на количество лейкоцитов?

Повышение числа этих клеток в кровяном русле свидетельствует о возможном развитии в организме воспалительного очага инфекционной природы и о возможном отравлении организма токсическими веществами, проникающими извне или вырабатываемыми внутри организма. Повышение количества лейкоцитов может свидетельствовать о наличии острой потери крови (например, в результате кровотечения как наружного, так и внутреннего характера). Низкое количество лейкоцитов свидетельствует о присутствии в организме вирусной инфекции, различных форм гепатита и заболеваний, протекающих в хронической форме.

В медицине делят лейкоциты на две группы и пять видов. Количество лейкоцитов в кровяном русле в норме составляет 4,5-10х109/л. При этом нормальное значение количества лейкоцитов в организме может в некоторой степени колебаться в зависимости от пола и возраста человека.

Показатель СОЭ — численное выражение скорости оседания эритроцитов. Что показывает скорость оседания эритроцитов? В норме этот показатель должен быть не более 15 мм в час. Повышение этого показателя до 30-40 мм может свидетельствовать о наличии в организме очага, в котором протекает воспалительный процесс в острой форме своего проявления. Высокая скорость оседания может также свидетельствовать о наличии отравления организма или большой потере крови.

Тромбоциты являются кровяными пластинками, имеющими неправильную форму. Основной задачей тромбоцитов является обеспечение остановки кровотечения при травмировании кровеносного сосуда путем формирования тромба. Нормальный уровень тромбоцитов равен 1,4-3,4 г/л. Повышение числа тромбоцитов может говорить о наличии в организме травмы, злокачественной опухоли, тромбоцитемии и некоторых других недугов. Повышенный показатель тромбоцитов наблюдается у человека также в послеоперационный период.

Понижение уровня тромбоцитов в кровяном русле ниже нормы может свидетельствовать о наличии отравления организма разнообразными химическими веществами. Понижение числа тромбоцитов говорит о наличии у человека лейкоза в острой или хронической формах или о присутствии инфекционного заболевания. Понижению количества тромбоцитов способствует прием некоторых лекарственных препаратов.

Эритроцит — красное кровяное тельце, безъядерная клетка, содержащая гемоглобин. Основная функция эритроцитов — транспортировка кислорода и углекислого газа между легкими и тканями организма. Количество эритроцитов зависит от возраста и пола человека. Для мужчин этот показатель составляет 4,0-5,5 млн в 1 мкл, а для женщин — 3,7-4,7 млн в 1 мкл крови. Что показывает число эритроцитов, определяемое в результате проведения анализа?

Снижение показателя количества эритроцитов в кровяном русле может свидетельствовать о развитии в организме анемии и быть следствием понижения содержания гемоглобина в кровяном русле или недостатка в организме витамина В12. Уменьшение количества эритроцитов может наблюдаться при наличии постоянных кровопотерь.

Повышение числа эритроцитов говорит о вероятности развития болезней таких структур, как:

  • кроветворная система;
  • дыхательная система;
  • сердечно-сосудистая система.

Повышение числа эритроцитов происходит у людей, которые длительное время находятся в условиях высокогорья. Такое явление не носит патологического характера. Число эритроцитов быстро приходит в норму в случае возврата человека к нормальным условиям существования.

2.1. Техника забора крови и подготовки
образца крови для исследования

Шаг А. Подготовка растворов, пробирок и другого инструментария (табл. 1).

Таблица 1. Необходимые подготовительные процедуры при проведении общего анализа крови

Определяемый показатель Посуда Раствор, его объем и состав
СОЭ Химическая пробирка и капилляр Панченкова 5 %-ный раствор C6H5O7Na3∙5H2O набрать в капилляр Панченкова до метки 0,75 и затем выдуть в химическую пробирку
Гемоглобин Химическая пробирка 4 мл трансформирующего раствора (ацетоциангидрин – 0,5 мг, калий железосинеродистый – 0,2 г, натрия гидрокарбонат – 1 г, дистиллированная вода – до 1 л)
Количество эритроцитов Химическая пробирка 4 мл изотонического раствора хлорида натрия
Количество лейкоцитов Химическая пробирка 0,4 мл 3–5 %-ной уксусной кислоты (уксусная кислота разрушает эритроциты, визуализируя тем самым лейкоциты)
Количество тромбоцитов Химическая пробирка 4 мл 1 %-ного раствора оксалата аммония (раствор разрушает эритроциты, визуализируя тромбоциты)

Забор крови из мякоти пальца (капиллярная кровь).

Тщательно протирают кожу мякоти пальца ватным шариком, смоченным спиртом, делают укол стерильным копьем до упора. Первую выступившую каплю крови вытирают сухим ватным шариком; из следующих капель, выступающих из мест укола при легком надавливании, быстро набирают необходимое количество крови: для СОЭ, для определения гемоглобина, для определения числа эритроцитов, для определения числа лейкоцитов, для исследования лейкоцитарной формулы, для определения тромбоцитов.

Забор крови из вены (венозная кровь).

Накладывают жгут на 8–10 см выше локтевого сгиба. Обрабатывают кожу локтевого сгиба над обнаруженной по характерному вздутию вены шариком, смоченным спиртом или другим антисептиком. В вену вводят иглу с подсоединенным шприцем и набирают необходимое для анализа количество крови. Кровь осторожно (не вспенивая, так как при этом происходит разрушение эритроцитов и других клеток крови) выпускают в пробирку с порошком ЭДТА или другим антикоагулянтом. Пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают кровь для распределения антикоагулянта, опрокидывая пробирку сначала пробкой вниз, затем пробкой вверх. В настоящее время используются специальные системы для забора крови и ее одновременного помещения в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. Предпочтение исследования венозной крови связано с возможностью одновременного получения объема крови, необходимого для разных анализов.

Шаг В. Внесение крови в подготовленную лабораторную посуду

Кровь вносят в подготовленную посуду специальным капилляром объемом 20 мкл согласно приведенным в табл. 2 разведениям в указанном выше порядке. Набирают ее капилляром до метки 0,02 из мест укола в мякоти пальца или пробирки с венозной кровью, кончик капилляра промокают фильтровальной бумагой, выдувают кровь в соответствующую пробирку и промывают капилляр (путем заполнения капилляра и выдувания раствора) в реактиве той же пробирки для максимально полного внесения образца крови.

Таблица 2. Объемы крови для определения показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Объем диагностического раствора Объем крови
СОЭ 1/4 часть капилляра Панченкова (до отметки 0,75), раствор вносится в химическую пробирку Полный капилляр Панченкова до отметки 0, кровь вносится в химическую пробирку с раствором цитрата калия (соотношение кровь : цитрат = 4 : 1)
Гемоглобин 4 мл 0,02 мл
Количество эритроцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)
Количество лейкоцитов 0,4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 20)
Количество тромбоцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)

Затем для последующего определения лейкоцитарной формулы каплю крови наносят на край обезжиренного предметного стекла и быстро готовят тонкий мазок с помощью шлифованного стекла, краем которого быстрым движением продвигают каплю крови по предметному стеклу.

Таким образом, после выполнения шага В для исследования образца крови имеются 4 пробирки со смесью крови и соответствующего реактива и приготовленный тонкий мазок крови на предметном стекле, необходимые для дальнейших диагностических процедур с использованием специального оборудования (табл. 3).

Таблица 3. Оборудование и методы определения основных показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Необходимое оборудование Метод
СОЭ Аппарат Панченкова (штатив и капилляры – 1 на каждый образец крови) Седиментационный с последующим визуальным учетом
Гемоглобин Фотоэлектроколориметр Биохимический с ФЭК-учетом результатов
Количество эритроцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество лейкоцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество тромбоцитов Камера горяева, световой микроскоп Микроскопический

2.2. Техника определения показателей
общего анализа крови

Забор крови, с последующим её исследованием производился у мужчин в возрасте от 20-ти до 35-ти лет, до и после физической нагрузки. В исследовании приняла участие группа из тридцати трёх человек, каждый из которой, после взятия пробы до физической нагрузки, проходил стандартную тренировку в течение часа. В таблице 3 сведены типы и продолжительность упражнений, которым подвергались все испытуемые.

Таблица 3 — типы физической нагрузки, применяемой в исследовании

Тренировка включала в себя 15 минут бега в нормальном темпе (один тридцатиметровый круг в минуту); выполнение комплекса упражнений (подтягивания, отжимания от пола, приседания) в течение 15 минут в ускоренном темпе (20 подтягиваний в минуту, 50 приседаний в минуту, 30 отжиманий в минуту); 30 минутный спарринг в нормальном темпе (20-25 бросков в минуту). По окончанию тренировки вновь бралась проба такого же объёма, у тех же испытуемых, что и до тренировки.

Основные этапы выполнения общего анализа крови:

2 приготовление мазков крови;

3 проведение анализов на гематологическом анализаторе;

6 подсчёт лейкоцитарной формулы.

Взятие материала. Кровь для исследования получили путём прокола четвёртого пальца левой руки обследуемого слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. В зависимости от толщины кожи глубина прокола составляет 2-3 мм. Обработанная кожа пальца высыхает несколько секунд. Цель этого «высыхания» — исключить растекание крови по пальцу, а также гемолитического воздействия антисептика на эритроциты. Скарификатор одноразового использования плотно зажимается между указательным и большим пальцами правой руки; производится прокол. Прокол произвели перпендикулярно рисунку кожных покровов пальца, так как в этом случае происходит повреждение нескольких капилляров, ход которых совпадает с ходом линий кожного рисунка. Учитываем, что разрез произведённый параллельно кожным линиям, спадается, что затрудняет забор крови. Первую, выступившую каплю крови удалили ватным тампоном, а последующие были взяты на исследование. Взятую кровь поместили в пронумерованные и обработанные раствором антикоагулянта. Трилоном-Б, пластиковые микрокюветы. На следующем рисунке показаны одноразовые пластиковые микрокюветы, более удобные и безопасные в использовании, чем стеклянные пробирки.

Все манипуляции связанные с забором крови проводились используя стерильные комплекты инструментов для взятия крови (капилляры Панченкова, предметные стёкла, скарификаторы и микрокюветы). Для каждого обследуемого использовалась индивидуальная пара перчаток и стерильных ватных укладок. Все манипуляции проводились в соответствии с требованиями приказа №165 МЗ РБ от 25.11.2002 г «О методах стерилизации и дезинфекции в медицинских учреждениях» [21].

Рисунок 1 — Микрокюветы с раствором антикоагулянта

Приготовление мазков крови. Для изготовления мазка крови использовались тщательно обезжиренные предметные стёкла. Мазок крови готовился шлифованным стеклом с идеально ровным краем, ширина которого была приблизительно на 2-3 мм уже предметного стекла. К куполу свеже выпущенной из прокола капли было сделано прикосновение предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края, не касаясь кожи в месте прокола. Размер капли на стекле не менее 2-3 мм в диаметре. Шлифованным стеклом, приставленным к предметному под углом 45°, быстрым движением справа налево был сделан мазок. Критерием правильности выполненного мазка является его полупрозрачность и желтоватый цвет. Техника приготовления мазка крови представлена на следующем рисунке.

Рисунок 2 — Техника приготовления мазка крови

Проведение анализов на гематологическом анализаторе. Для исследований использовался гематологический анализатор SISMYX-500. Взятую кровь в миниёмкастях тщательно перемешали и поместили в загрузочную часть аппарата. Предварительно была проведена калибровка данного аппарата, которая заключалась в проведении полного анализа микрокюветы с дистиллированной водой. Определение параметров исследуемой крови протекает в автономном режиме, без непосредственного участия человека. По завершению цикла исследования сняли выданные аппаратом результаты [22].

Изображение аппарата SISMYX-500, и момента отбора пробы для анализа, представлены на рисунке 3.

Фиксация мазков крови. Данный этап предохраняет форменные элементы от содержащейся в красителях воды, под влиянием которой в не фиксированных мазках происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов.

Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и тем самым закрепляет препарат на стекле. В качестве фиксирующей жидкости использовали раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду. Высушенные мазки опускались в широкогорлую банку с фиксатором на 3-5 минут. Далее пинцетом мазки были извлечены и высушены на воздухе.

Рисунок 3 — Гематологический анализатор SISMYX-500

Окраска мазков крови. Фиксированные сухие мазки поместили в контейнер, который опустили в кювету с рабочим раствором красителя и выдержали в нём экспозицию в 30 минут.

Затем, контейнер был перенесён в кювету с водопроводной водой, а затем в вертикальный штатив для сушки. В качестве красящего раствора был использован краситель по прописи Романовского-Гимзы. В состав красителя входят: азур-2 (смесь равных количеств азура-1 и метиленового синего) и эозин. Критериями правильности данной окраски являются розово-оранжевые гранулы эозинофилов, светло-розовый цвет эритроцитов, нейтрофильная зернистость фиолетового цвета.

Подсчёт лейкоцитарной формулы производят с помощью иммерсионной системы микроскопа с увеличением Ч630. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Удобный обзор препарата настраивают с помощью микро- и макровинтов. Для регистрации клеток при подсчёте лейкоцитарной формулы использовался счётчик лабораторный СЛ-1.

Это простейший арифмометр снабжённый клавишами, обозначенными буквами для подсчёта соответствующих видов лейкоцитов, изображён на рисунке 4.

Рисунок 4 — Счётчик лабораторный СЛ-1

Подсчёт лейкоцитов производился в тонкой части мазка, где эритроциты располагаются одиночно. Препарат просматривают по зигзагообразной линии («линии Меандра») в количестве 3-5 полей зрения. Когда сосчитано 100 клеток, счётчик издаёт характерный сигнал, что означает окончание подсчёта лейкограммы данного препарата. Подсчитывались только целые, не разрушенные клетки.

Для оценки влияния физической нагрузки на состояние показателей периферической крови использовались результаты общего анализа крови до и после физической нагрузки.

В ходе исследования нами были вычислены среднее арифметическое, стандартное отклонение, стандартная ошибка, коэффициент вариации по продуктивности и устойчивости внимания, а также по показателям темпа выполнения.

Средняя арифметическая вычисляется по формуле:

где Xi — значение признака, варианта;

где x2 — сумма квадратов центральных отклонений, т. е. квадратов разностей между каждым значением и средней арифметической;

n — 1 — число степеней свободы, равное числу объектов в группе без одного.

Ошибка стандартного отклонения:

где у — стандартное отклонение;

м — средняя арифметическая.

В результате обработки полученного материала, был проведён статистический анализ, построены графики зависимости показателей концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, от воздействующего на них фактора физической нагрузки, а также таблицы результатов дисперсионного анализа, для каждого из исследуемых показателей.

Статистическая обработка результатов исследований выполнена с использованием прикладных программ MS Excel 2007 и Statistica for Windows 6.0. Оценка достоверности различий осуществлялась на основе критерия Фишера. Влияние физической нагрузки на показатели крови оценено методом однофакторного дисперсионного [23].

1. Клиническая трактовка результатов общего анализа крови (см. ход занятия, п.2-5).

2. Проведение макроскопического, микроскопического, бактериоскопического и бактериологического исследования мокроты (см. ход занятия, п.7).

3. Проведение макроскопического, физико-химического и бактериологического исследования плевральной жидкости (см. ход занятия, п.9).

4. Клиническая оценка результатов лабораторного анализа мокроты и плевральной жидкости (см. ход занятия, п.7,9).

В ходе занятия обсуждаются контрольные вопросы согласно темы занятия и отрабатываются практические навыки (п.4.).

Взятие крови для общего клинического анализа крови производят путем укола в мякоть IV пальца левой руки или мочку уха. Для укола палец обрабатывают ватным шариком, смоченным раствором антисептика, чаще всего септоцида. Укол лучше производить сбоку, где более густая капиллярная сеть, на глубину 2-3 мм в зависимости от толщины кожи. Кровь из ранки должна вытекать свободно, так как при сильном надавливании на палец возможно примешивание тканевой жидкости, приводящее к искажению результатов.

Не рекомендуется брать кровь сразу после физической и умственной нагрузки, приема медикаментов, физиотерапевтических процедур, диагностических манипуляций. Необходимо производить забор крови натощак. Повторные исследования желательно проводить в одни и те же часы, поскольку морфологический состав крови подвержен колебаниям на протяжении суток.

Для исследования гемограммы используют пробирочный метод взятия крови. Точная дозировка крови и разводящих жидкостей достигается с помощью калиброванных пипеток и дозаторов.

Общий клинический анализ крови включает определение следующих компонентов:

3) индексы красной крови (цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците);

4) скорость оседания эритроцитов (СОЭ);

6) осмотическая резистентность эритроцитов и их диаметр;

7) количество ретикулоцитов;

8) количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула;

2. Методика определения концентрации гемоглобина, количества эритроцитов и ретикулоцитов. Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Диагностическое значение. Гематокритное число.

Предложено много методов определения концентрации гемоглобина. Важнейшие из этих методов – колориметрические. Чаще колориметрируют цветные производные гемоглобина: хлорид гематина, цианметгемоглобин, карбоксигемоглобин и др. Концентрацию гемоглобина измеряют фотоэлектроколориметрами, приборами ГФ-2 и ГФ-3, гемоглобинометрами при автоанализаторах.

Унифицированным является цианметгемоглобиновый фотометрический метод. Он основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (раствора Драбкина), содержащего железосинеродистый калий и цианид калия. Концентрацию цианметгемоглобина измеряют фотометрически, а расчет количества гемоглобина производят по калибровочному графику.

Гематиновый метод Сали основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина (хлоргемин) коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. В настоящее время этот метод не имеет широкого применения.

В норме концентрации гемоглобина составляет:

Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается у людей, живущих в условиях высокогорья, при обезвоживании у работников горячих цехов, после обильной рвоты и при диарее, при массивных ожогах, при эритремии и др.

Уменьшение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях, а так же при обильном употреблении жидкости, гемодилюции лекарственными инфузионными средствами и др.

Определение количества эритроцитов крови выполняется следующими методами:

Подсчет эритроцитов в счетной камере с сеткой Горяева.

Принцип метода: в строго определенном объеме каме­ры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производят перерасчет полученного результата на 1 мкл крови. С целью уменьшения количества клеток, подлежащих подсчету, кровь предварительно разводят в смесителях или пробирках.

смесители (меланжеры) или пробирки для разведе­ния крови;

3 % раствор хлорида натрия или жидкость Гайема для разведения эритроцитов (ртути хлорид — 0,5 г; натрия сульфат — 5,0 г; натрия хлорид — 1,0 г; вода дистиллиро­ванная — до 200 мл);

Смесители представляют собой капиллярную пипетку с резервуаром, содержащим бусинку, способствующую смешиванию крови с жидкостью для разведения. На сме­сителе нанесены метки: одна — 0,5, другая — перед входом в резервуар — 1,0, третья — у выхода из ампулы — 101. При набирании крови в пипетку до метки 0,5 она будет разве­дена в 200 раз, до 1,0 — в 100 раз.

Счетная камера представляет собой стеклянную плас­тинку с выгравированной или наклеенной сеткой Горяе­ва. Обычно на одной пластинке имеются две сетки, разде­ленные между собой глубокой канавкой, что позволяет ис­пользовать одну сетку для подсчета эритроцитов, а другую — для подсчета лейкоцитов. По краям сеток находятся воз­вышения, к ним притираются покровные стекла, которые образуют верхнюю границу камеры. Притирать покров­ные стекла нужно очень плотно до появления радужных колец (так называемых колец Ньютона), ибо только в этом случае будут соблюдены необходимые высота (1/10 мм) и объем счетной камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15 х15), 25 из которых раз­делены на малые, по 16 в каждом. Каждая сторона малого квадрата равна 1/20 мм, а так как высота камеры состав­ляет 0,1 мм, то объем счетной камеры, ограниченной од­ним малым квадратом, будет равен 1/4000 мм 3 .

Ход исследования: в сухую чистую пробирку или сме­ситель отмеривают раствор хлорида натрия или жидкость Гайема. Пипеткой от гемометра Сали набирают кровь из пальца, вытирают кончик пипетки марлей или фильтро­вальной бумагой, выдувают кровь на дно пробирки с жидкостью для разведения. Подготавливают камеру Горяева. Затем концом круглой стеклянной палочки или пастеровской пипеткой наносят каплю разведенной кро­ви на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

Интерпретация полученных данных. Подсчет эрит­роцитов производят спустя 1-2 мин после заполнения ка­меры (когда эритроциты осядут на дно камеры) при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр — 10х или 15х) и при затемненном поле зрения (при опущенном кон­денсоре или прикрытой диафрагме). Считать эритроциты необходимо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких, расположенных по диагонали. Подсчету подлежат все эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, и те, кото­рые находятся на левой и верхней линиях. Эритроциты, расположенные на правой и нижней линиях, не считают, так как они будут учтены в следующем квадрате.

Количество эритроцитов в 1 мкл (мм 3 ) крови высчиты­вают по следующей формуле:

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови; А — количество форменных элементов, сосчитанных в опреде­ленном количестве малых квадратов (для эритроцитов — в 80); Б — количество сосчитанных малых квадратов (80); В — степень разведения крови (для подсчета эритроцитов -100 или 200); 4000 — величина, умножая на которую, мы получаем количество клеток в 1 мкл (1 мм 3 ), так как объ­ем 1 маленького квадрата равен 1/4000 мм.

Для перевода в систему СИ (пересчет на 1 л крови) по­лученную цифру умножают на 10 6 (или количество целых единиц умножают на 10 12 ).

Методика подсчета эритроцитов в счетной камере дос­таточно точна (ошибка может достигать 2,5 %), но весьма трудоемка. Ошибки могут быть обусловлены: образовани­ем сгустка, недостаточным количеством подсчитанных квадратов, несоблюдением условий, обеспечивающих правильную высоту счетной камеры (притирание покров­ных стекол без образования радужных колец), неравно­мерным заполнением камеры (образование пузырьков воздуха), подсчетом эритроцитов без выжидания 1-2 мин (эритроциты не успевают осесть и результат оказывается заниженным), плохо вымытыми смесителем и счетной ка­мерой, недостаточной квалификацией лаборанта, выпол­няющего исследование.

Фотометрический метод подсчета количества эритроцитов – основан на фотометрическом измерении степени погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов. Процент задержанного света прямо пропорционален числу эритроцитов. Для этого используют приборы типа эритрогемометров и электрофотоколориметры.

Электронно-автоматический метод. Используются приборы автоматического счета частиц крови, работающие по импульсному и сцинтиляционному принципу (счетчики «Целлоскоп» и «Культер», автоанализаторы «Техникон»).

Нормальное количество эритроцитов:

— у женщин 3.7 – 4.7 х 10 12 /л;

— у мужчин 3,9 — 5,1 х 10 12 /л.

Увеличение количества эритроцитов наблюдается:

1) при эритремии (абсолютный первичный эритроцитоз);

2) при гипоксии: обструктивная вентиляционная недостаточность, при наличии альвеолярно-капиллярного блока – фиброзирующий альвеолит и легочные васкулиты, врожденные пороки сердца с шунтом справа налево и др;

3) при гемоглобинопатиях (наследственные заболевания, характеризующиеся наличием в эритроцитах аномальных гемоглобинов);

4) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с повышенной продукцией эритропоэтинов (рак почек, гидронефроз и поликистоз почек, рак печени и др.);

5) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с избытком адренокортикостероидов или андрогенов (феохромоцитома, синдром / болезнь Иценко-Кушинга, гиперальдостеронизм);

6) при относительных эритроцитозах вследствие обезвоживания, стрессов, алкоголизма, повышенной физической нагрузки, проживания в условиях высокогорья и др.

Уменьшение количества эритроцитов характерно для анемий различного происхождения. От истинной анемии, характеризующейся абсолютным уменьшением эритроцитарной массы, нужно отличать анемию (эритроцитопению) вследствие гидремии (снижение гематокрита из-за увеличения объема плазмы).

Уменьшение количества эритроцитов (анемия, эритроцитопения) наблюдается при постгеморрагических анемиях, анемиях вследствие недостаточного кровеобразования (железодефицитная, витамин-В12- и фолиеводефицитная), анемиях в результате усиленного распада эритроцитов (гемолитические), железоперераспределительных и метапластических (при опухолевых заболеваниях крови) анемиях и др.

Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците.

Под индексами красной крови понимают среднее содержание гемоглобина в одном эритроците и цветовой показатель.

Определение среднего содержания гемоглобина в одном эритроците производят делением концентрации гемоглобина на число эритроцитов в одинаковом объеме крови. В норме 1 эритроцит содержит 33 пг гемоглобина (допустимые колебания 27-33.4 пг).

Величину 33 пг условно принимают за единицу (норма содержания гемоглобина в одном эритроците) и обозначают как цветовой показатель.

Цветовой показатель отражает насыщение эритроцита гемоглобином.

Вычисление цветового показателя (ЦП) производят по формуле:

три первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

ГЕМОГЛОБИН (в условных единицах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

В норме цветовой показатель равен 0,85 – 1,05.

Индексы красной крови важны для суждения о нормо-, гипер-, гипохромии эритроцитов.

Гиперхромия – увеличение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее цветовой показатель выше 1.05, зависит исключительно от увеличения объема эритроцитов, а не от повышенного насыщения их гемоглобином, так как нормальный эритроцит насыщен гемоглобином до предела. Гиперхромия характерна для мегалобластных анемий, обусловленных дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты.

Гипохромия – уменьшение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее ЦП ниже 0.85, может быть так же следствием уменьшения объема эритроцитов. Гипохромия служит истинным показателем или дефицита железа в организме, или железорефрактерности. Гипохромия наблюдается при хронических кровопотерях, железодефицитных и железорефрактерных анемиях, свинцовой интоксикации и др.

Нормохромия – это нормальное содержание гемоглобина в эритроците (ЦП -0,85-1,05). Нормохромные анемии развиваются при равномерном уменьшении содержания эритроцитов и количества гемоглобина и наблюдается в случаях острых кровопотерь, при гипопластической анемии, при гемолизе, сепсисе.

Гематокрит (гематокритное число) – дает представление о соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов крови. Определяется с помощью следующих методов.

Метод центрифугирования в гематокритной трубке.

Электронно-автоматический метод (с помощью аппаратов «Целлоскоп» и «Культер»).

Нормальные величины гематокрита:

Гематокритное число учитывается при диагностике полицитемических и олигоцитемических состояний.

Ретикулоциты – это молодые эритроциты, содержащие базофильную субстанцию в виде сеточки, представленную агрегированными рибосомами и митохондриями. Сеточка обнаруживается при прижизненной окраске мазков крови 1% раствором бриллианткрезил синего. Подсчет производится под иммерсионным объективом по отношению к 1000 эритроцитов.

В норме содержание ретикулоцитов в периферической крови составляет 2-10º/○○ (0,2-1,2%). Ретикулоцитоз отображает степень регенераторной способности костного мозга. При гемолизе, кровопотерях эритропоэз в нормальном костном мозге активизируется, и число ретикулоцитов в нем и в периферической крови возрастает. Отсутствие роста числа ретикулоцитов в выше указанных ситуациях свидетельствуют о пониженной функции костного мозга.

Ретикулоцитоз при отсутствии анемии говорит о скрытых, но хорошо компенсированных потерях крови. Высокий ретикулоцитоз наблюдается при адекватном лечении витамин-В12-дефицитной анемии.

Анализы выполняют известными (рутинными) методами или используют автоанализаторы.
Подсчет эритроцитов в камере Горяева. Принцип. Точное количество крови равномерно смешивают в определенном количестве жидкости и помещают в камеру с известным объемом, в котором взвесь крови распределяется одним слоем. Дно камеры разграфлено, благодаря чему возможен точный подсчет эритроцитов.
Реактивы: 0,9%-ный раствор натрия хлорида.
Специальное оборудование: микроскоп, камера Горяева, пробирки лабораторные или капилляр от гемометра Сали.
Ход определения. В сухую чистую пробирку вносят 8 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида и капиллярной пипеткой 0,02 мл крови. Предварительно кончик пипетки вытирают, кровь выдувают на дно пробирки, а пипетку тщательно промывают верхним слоем жидкости. Содержимое пробирки хорошо перемешивают. Получают разведение крови 1 : 400, т. е. кровь разбавляют в 400 раз. При сгущении крови ее целесообразно разбавить в 500, 600, 700, 800 раз.
Камера и покровное стекло должно быть вымыты и насухо вытерты. Покровное стекло притирают к камере так, чтобы появились радужные кольца. Берут каплю разведенной крови из пробирки и заполняют ею камеру, нанося к краю покровного стекла. Эритроциты подсчитывают через 1 мин после заполнения камеры под малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр хЮ или х15) с прикрытой диафрагмой или опущенным конденсатором (в затемненном поле зрения). Эритроциты подсчитывают в пяти больших (или 80 малых) квадратах, расположенных по диагонали. Учитывают эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, а также на левой и верхней его стенках. Клетки, находящиеся на правой и нижней линиях квадрата, не считают.
Расчет. Подсчитанное число клеток в 80 малых квадратах умножают на 20 000 при разведении крови 1 : 400, на 25 000 при разведении 1 : 500 или на 30 000 при разведении 1 : 600 и получают окончательный результат в миллионах в 1 мкл. При этом исходят из того, что объем одного малого квадрата равен 1/4000 мкл. Для подсчета клеток в 1 л количество эритроцитов в 1 мкл еще умножают на 1 000 000 (10 /л).
Примечание. Не допускается исследование крови со сгустками;
подсчет клеток тотчас после заполнения камеры (не выжидая 1 мин); использование плохо вымытых и просушенных пипеток и пробирок, недоброкачественных реактивов, вызывающих гемолиз. При соблюдении всех правил подсчета ошибка составит в среднем +2,5 %.
Подсчет лейкоцитов в камере Горяева. Принцип. Количество лейкоцитов подсчитывают в определенном объеме камеры с известным разведением крови.
Реактивы: 3%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим или генцианом фиолетовым из расчета 1 мл 1%-ного водного раствора красителя на 100 мл уксусной кислоты.
Оборудование: микроскоп, камера Горяева,, пробирки, микропипетки или капилляр от гемометра Сали.
Ход определения. От каждого животного целесообразно готовить 2—3 образца разведенной крови. В пробирку вносят 0,4 мл 3 или 5 %-ного раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (жидкость Тюрка). Капиллярной пипеткой набирают 0,02 мл крови, конец пипетки тщательно протирают вначале увлажненной, а затем сухой ватой или марлей. Переносят кровь в пробирку, осторожно выдувая. Пипетку ополаскивают жидкостью Тюрка. Кровь в пробирке тщательно перемешивают, закрывают и оставляют стоять на 4 мин, периодически перемешивая содержимое.
Счетную камеру предварительно тщательно обезжиривают спиртом, промывают дистиллированной водой и высушивают под феном, протирают мягкой фланелью. Чистое сухое покровное стекло притирают к камере так, чтобы появились радужные кольца. Кровь в пробирке снова перемешивают стеклянной палочкой, берут каплю крови и наносят к краю покровного стекла камеры. Подсчитывают лейкоциты через 1 мин после заполнения камеры, когда осядут клетки крови, пользуясь малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр х Ю) при затемненном поле, для чего опускают конденсор или суживают диафрагму.
Подсчитывают лейкоциты в 100 больших (1600 малых) квадратах.
Расчет. Подсчитанное в 100 больших квадратах число клеток умножают на 50 (разведение крови 1 : 20), получают окончательный результат в тысячах в 1 мкл. Для подсчета клеток в 1 л количество лейкоцитов в 1 мкл умножают на 1000 (10 /л).
При подсчете лейкоцитов в камере соблюдают все те же правила, которые изложены в методике подсчета эритроцитов. Ошибка при подсчете составляет в среднем +7 %.
Наиболее вероятные источники ошибок — травмирование тканей ушной раковины при выжимании, выдавливании крови; неравномерное перемешивание крови; не очень чистый микрокапилляр и др. Каждый лабораторный работник должен выявить собственную ошибку путем многократных анализов одной и той же пробы, включая взятие крови.
Клиническое значение определения в крови эритроцитов и лейкоцитов. Родоначальной клеткой для всех форменных элементов крови является стволовая клетка, которая дает начало общей клетке — предшественника миелопоэза и общей клетке — предшественника лимфопоэза. Из клетки — предшественника миелопоэза в миелоидной системе (костный мозг), проходя определенные стадии дифференцировки, образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зернистые лейкоциты. Из клетки — предшественника лимфопоэза в лимфоидной системе образуются лимфоциты: Т-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции клеточного иммунитета и В-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции гуморального иммунитета.
Кровь здоровых животных содержит зрелые клетки: эритроциты, тромбоциты, лейкоциты (базофилы, эозинофилы, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты) и тучные клетки (цвет. рис. I—VII). Появление незрелых промежуточных клеток миелопоэза (ретикулоцитов, нормоцитов, эритро- бластов, миелобластов, миелоцитов и др.) и лимфопоэза (плазмо- бластов, пролимфоцитов, лимфобластов и др.) свидетельствует о развитии патологии кроветворения.
Эритроциты — мелкие клетки крови, содержащие гемоглобин, благодаря чему способны переносить кислород от легких к тканям и углекислый газ от тканей к легким. Зрелые эритроциты млекопитающих — безъядерные клетки, имеют форму двояковогнутого диска. Эритроциты птиц и низших позвоночных — ядерные клетки элипсовидной формы.
В нефиксированном (нативном) препарате эритроциты выглядят как желтоватые округлые образования. В фиксированных и окрашенных мазках крови они обнаруживаются как круглые клетки розового или серовато-розового цвета с просветлением в центре.
Тромбоциты — кровяные пластинки. Это мелкие, безъядерные клетки крови диаметром 5 мкм в количестве от 200 до 900 тыс/мкл, участвуют в свертывании крови. В окрашенных мазках крови они выглядят как мелкие круглые или овальные образования. При снижении их числа наблюдается кровоточивость, развивается гемофилия.
Лейкоциты — разнообразные по морфологическим признакам и функциям клетки сосудистой системы крови. Они выполняют функции защиты организма путем фагоцитарной активности и участия в формировании гуморального иммунитета, в восстановительном процессе при тканевом повреждении. Лейкоциты, в цитоплазме которых содержится специфическая зернистость, называются зернистыми, или гранулоцитами. К ним относятся нейтрофилы (палочкоядерные, сегментоядерные и юные), эозинофилы и базофилы. Незернистые лейкоциты (агранулоциты) характеризу

ются отсутствием специфической зернистости в цитоплазме и несегментированными ядрами. В группе агранулоцитов выделяют два вида — лимфоциты и моноциты.
Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у взрослых животных в норме приведено в таблице 4.
4. Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у животных

Вид животного Эритроциты, млн/мкл (1012/л) Лейкоциты, тыс/мкл (109/л) Тромбоциты тыс/мкл (109/
Крупный рогатый скот 5,0-7,5 4,5-12,0 260-700
Лошадь 6,0-9,0 7,0-12,0 200-500
Овца 7,0-12,0 6,0-14,0 270-500
Свинья 6,0-7,5 8,0-16,0 180-300
Коза 12,0-17,0 6,0-12,0 300-900
Буйвол 5,2-8,7 5,5-12,1 220-380
Верблюд 10,6-16,6 11,5-20,5 200-400
Северный олень 9,0-14,0 6,0-10,0 200-500
Осел 5,0-7,0 7,0-9,0 200-500
Мул 5,1-6,8 7,0-8,0 200-400
Собака 5,2-7,4 6,0-12,0 250-550
Кошка 6,6-9,4 10,5-15,0 100-500
Птица (курица, утка, гусь) 2,5-4,5 20,0-40,0
Морская свинка 4,6-6,7 7,8-15,5
Норка 8,1-9,3 4,3-7,1
Лисица 8,3-10,3 4,2-7,0
Песец 7,6-9,0 4,7-6,9
Кролик 5,0-7,5 6,5-9,5

Уменьшение количества эритроцитов — эритроцитопения (олиго- цитемия) встречается при длительном недокорме животных, пост- геморрагической, гемолитической, железодефицитной, гипоплас- тической анемиях, В12 (фолиево)-дефицитной анемии, лейкозах, злокачественных новообразованиях. Олигоцитемия развивается при инфекционной анемии лошадей, гематурии крупного рогатого скота, пироплазмозе, нутталиозе, трипанозомозе, многих острых и хронических инфекционных и инвазионных болезнях, гепатите и гепатозе, хроническом нефрите.
Увеличение количества эритроцитов (полицитемия, эритроци- тоз) встречается при сильной диарее вследствие сгущения крови, при обильном потоотделении, непроходимости тонкого кишечника, сильной мышечной нагрузке.
Нахождение животных на высоте 1400—2000 м и выше над уровнем моря сопровождается повышением содержания эритроцитов в крови.
Увеличение количества лейкоцитов (лейкоцитоз) бывает патологическое и физиологическое. Патологический лейкоцитоз отмечается при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих пневмонию, бронхопневмонию, плеврит, перикардит, ретикулопе- ритонит, перитонит, абсцессы печени, эндометрит и многие другие болезни. Выраженный лейкоцитоз наблюдается при ряде инфекционных болезней, хирургической инфекции, лейкозах, лимфогранулематозе. Лейкоцитоз возникает при отравлениях мышьяком, ртутью, укусах ядовитых насекомых, змей. Увеличение количества лейкоцитов может быть в результате введения больших доз камфоры, калия йодида, белковых препаратов, вакцин, сывороток.
Физиологический умеренный лейкоцитоз бывает при беременности, после физических нагрузок, приема богатой белком пищи (у плотоядных), стрессах.
Уменьшение количества лейкоцитов (лейкоцитопения, лейкопения) может быть результатом угнетения кроветворных органов, истощения их, пониженной реактивности организма; лейкопению отмечают при вирусных болезнях, циррозе печени, поражении селезенки, действии ионизирующей радиации, ряда химических веществ и лекарственных препаратов. Смена лейкоцитоза лейкопенией при воспалительных и гнойно-септических заболеваниях служит показателем понижения резистентности организма, угнетения кроветворения, ухудшения состояния больного животного.
Течение заболеваний, для которых характерна лейкоцитопения, наблюдается у ослабленных, истощенных животных. Лейкоцитопения может быть следствием длительного введения в организм больших доз сульфаниламидов, амидопирина, левомицетина, синтомицина, препаратов ртути, мышьяка, висмута. Она отмечается при алейкемической форме лейкоза, отравлениях ДЦТ и некоторыми другими ядами.
Дифференциальный подсчет лейкоцитов (лейкотрамма). Проводят визуальную микроскопическую оценку сухих фиксированных окрашенных мазков крови с дифференцированным подсчетом лейкоцитов и описанием морфологии эритроцитов.
Лейкограмма выражается как процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов крови.
Морфологическое исследование мазков крови включает следующие этапы: подготовку стекол, приготовление, фиксацию, микроскопическую и морфологическую оценку мазков.
Подготовка пре дметных стекол. Предметные стекла должны быть чистыми, обезжиренными и сухими. Бывшие в употреблении или новые стекла замачивают в эмалированной посуде в стиральном порошке. Старый мазок удаляют ватным тампоном и стекла кипятят в том же растворе 10—15 мин, затем их промывают в проточной воде, насухо протирают и помещают на 30—60 мин в смесь Никифорова (этиловый спирт 9б°%-ный и диэтиловый эфир в соотношении 1:1), после чего протирают насухо чистой тканью и помещают на хранение в посуду с крышкой.
Примечания. 1. Длительное кипячение (более 10 мин) предметных стекол и кипячение их в алюминиевой посуде приводит к помутнению стекол. 2. Полноту отмывки от щелочных средств проверяют качественной реакцией с 0,1%-ным спиртовым раствором фенолфталеина, путем нанесения 2—3 капель на чистое стекло. Появление розового окрашивания свидетельствует о плохой промывке стекол.
Приготовление мазков. Мазки крови готовят на предварительно подготовленных обезжиренных предметных стеклах. Берут за ребра (а не за поверхность) предметное стекло и, отступая 1,5—2 см от узкого конца, наносят на него небольшую каплю крови. Шлифовальным стеклом, которое несколько уже, чем предметное, на которое нанесена капля крови, размазывают последнюю. Для этого шлифовальное стекло узким краем ставят под углом 45° слева от капли, слегка подвигают его вправо, чтобы провести с ней соприкосновение, выжидают, пока капля расплывется по всему ребру, и легким быстрым движением ведут стекло справа налево, пока капля будет исчерпана.
При медленном размазывании ухудшается равномерность распределения форменных элементов в мазке. При нажимании стеклом на стекло многие клетки повреждаются. Если угол между стеклами меньше 45°, то большее количество клеток скапливается в конце мазка. Величина капли должна быть соразмерна тому, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1—1,5 см до его конца. Мазок должен иметь желтоватый цвет. Густо-розоватые и красноватые мазки не пригодны для счета, так как лейкоциты в них деформированы, а эритроциты лежат один на другом. Если была взята слишком большая капля, то после того как она распределилась по ребру шлифованного стекла, последнее приподнимают, переносят на несколько миллиметров влево, вновь ставят на предметное стекло и отсюда начинают делать мазок. Мазок тотчас сушат на воздухе. На сухом мазке по его середине иглой пишут номер или кличку животного, при необходимости и дату взятия крови.
Фиксация мазков. Фиксирующая жидкость вызывает коагуляцию белка и прикрепляет клетку к стеклу. Фиксация придает форменным элементам крови стойкость по отношению к содержащейся в краске воде и препятствует деформации эритроцитов и лейкоцитов.
Реактивы: метиловый спирт (х. ч.) или эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор), или этиловый спирт 96%-ный.
Оборудование: штатив для сушки мазков; пинцет; широкогорлая банка с притертой пробкой или крышкой.
Ход определения. Высохшие на воздухе мазки опускают в широкогорлую банку с крышкой, выдерживают в фиксаторе 5—10 мин, затем извлекают пинцетом и высушивают на воздухе. В этиловом спирте мазки выдерживают не менее 35 мин.
Для фиксации и последующей обработки необходимо отбирать правильно приготовленные тонкие мазки (мазок должен быть желтого цвета, отступать от края широких сторон предметного стекла на 1—3 мм и заканчиваться «метелочкой», не доходя 1,5—2 см до левого узкого края).
Окраска мазков. Оборудование: контейнеры для окраски мазков с кюветами или «рельсы» стеклянные с эмалированными лотками; пинцет; цилиндры или стаканы градуированные; палочки стеклянные; стаканчики химические; бутылки с притертыми пробками.
В строго нейтральной среде структурные элементы клеток крови в азур-эозиновой смеси окрашиваются в различные цвета: щелочные компоненты клетки (цитоплазма) — эозином в розово-красный цвет; кислые (РНК в ядрышках и цитоплазме, ДНК в ядре) — основными красителями в голубовато-синие цвета. Для приготовления красителей и смывания их с мазков используют воду нейтральной реакции. Вода кислой реакции ослабляет действие щелочного элемента красителя (азура II), вследствие чего лейкоциты плохо окрашиваются. Мазки имеют красный цвет за счет красной окраски эритроцитов и ядер лейкоцитов. Вода щелочной реакции ослабляет действие кислого компонента красителя (эозина), поэтому эритроциты окрашиваются в серовато-синий цвет, а ядра лейкоцитов — в очень темные цвета. Для подщелачивания и доведения реакции воды до нейтральной к ней по каплям прибавляют 1%-ный раствор натрия двууглекислого. Щелочную воду нейтрализуют 1%-ным раствором уксусной кислоты. Можно брать дистиллированную и водопроводную воду в различных сочетаниях.
Реакцию воды можно определить с помощью рН-метра или гематоксилина. При использовании гематоксилина к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 2—3 капли свежеприготовленного спиртового раствора гематоксилина. Вода нейтральной реакции окрашивается в бледно-фиолетовый цвет не ранее чем через 1 мин и не позднее чем через 5 мин. Если вода окрасилась раньше чем через 1 мин, значит, она щелочная, а если позднее чем через 5 мин, — кислая.
Окраска по Нохту. Реактивы:

  1. основные растворы красителей — азур II, 1 г/л (1,0 г азура II растворяют в 1000 мл дистиллированной воды) и эозин калия,
  1. г/л (1,0 г эозина калия растворяют в 1000 мл дистиллированной воды). Растворы готовы к употреблению через 14 дней со дня приготовления, хранят их в посуде темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре;
  1. фосфатный буфер или смесь Вейзе (pH 7,4—7,5): калия фосфат однозамещенный безводный (КН2Р04) 0,49 г, натрия фосфат двузамещенный (ЫагНРС^ х 2НгО) 1,14 г или безводный (№2НР04) 0,909 г, дистиллированная вода 1000 мл.

Рабочий раствор готовят перед употреблением, смешивая 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут несколько варьировать и должны быть установлены опытным путем при приготовлении свежей порции основных растворов красителей.
Фиксированные сухие мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с рабочим раствором красителя и выдерживают в нем строго определенное время, подобранное для каждой партии краски, — от 20 до 45 мин. Затем контейнер переносят в кювету с водопроводной водой. После этого мазки ставят вертикально в штатив для сушки.
При отсутствии штатива-контейнера высушенные мазки можно красить на «рельсах», заливая мазок рабочим раствором красителя возможно более высоким слоем (2—3 мл на мазок).
Окраска по Паппенгейму. Реактивы: 1) эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор). При отсутствии заводского раствора готовят 5 г/л раствора сухого красителя в метиловом спирте (х. ч.). Раствор готов к употреблению через 4 дня; 2) рабочий раствор азур-эозина по Нохту.
Сухие нефиксированные мазки помещают в контейнер и опускают в кювету с раствором красителя-фиксатора Май-Грюнвальда на 5 мин. Затем контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой и помещают к кювету с рабочим раствором азур-эозина по Нохту на 8—15 мин. Смывают краску, переносят контейнер в кювету с дистиллированной водой. Мазки высушивают на воздухе.
Окраска по Романовскому—Гите. Реактивы: 1) готовый заводской краситель Романовского—Гимзы (азур-эозиновая смесь);

  1. рабочий раствор — 2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Готовят его перед употреблением.

Фиксированные мазки в кювете заливают рабочим раствором красителя Романовского—Гимзы и выдерживают 15—30 мин. Затем мазки промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Продолжительность окраски зависит от качества красителя и температуры воздуха. Чем ниже температура воздуха, тем продолжительнее окраска. Выбор оптимального времени окраски проводят всякий раз, когда начинают использовать новый флакон заводского красителя. Хорошо окрашенные мазки имеют розово-фиолетовый цвет, недоокрашенные — розовато-красноватый, перекрашенные — темно-фиолетовый.
Микроскопическое исследование мазков крови. Реактивы: иммерсионное масло; диэтиловый эфир или этиловый спирт.
Оборудование: микроскоп; осветитель для микроскопа; 11-клавишный счетчик для выведения лейкоцитарной формулы; капельница.
Просматривают мазок крови под малым увеличением микроскопа (объектив х 10, окуляр х7). Подсчет лейкоцитов и оценка морфологии эритроцитов допустимы только в тонкой части мазка, где эритроциты лежат одиночно, а не сложены в «монетные столбики».
На край мазка помещают каплю иммерсионного масла, переводят на иммерсионный объектив (х90). Лейкоциты подсчитывают по зигзагу (по линии «Меандра»), отступя 2—3 поля зрения от верхнего края мазка, в начале в 3—5 полях зрения вдоль края мазка, затем в 3—5 полях зрения под прямым углом к середине мазка, потом в 3—5 полях зрения параллельно краю мазка и вновь под углом 90° возвращаются к краю мазка.

Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток, необходимая для выведения лейкограммы. Затем переходят на противоположную сторону мазка и подсчитывают вторую половину клеток. Подсчитывают только целые (неразрушенные) клетки.
В норме в крови выявляются лейкоциты следующих форм: базофилы, эозинофилы, нейтрофилы палочкоядерные и сегментоядерные, лимфоциты, моноциты. При наличии в мазках крови плазматических клеток, незрелых, бластных и труднодифференцируемых форм лейкоцитов их также вводят в лейкограмму, описывают их морфологию.
Одновременно с выведением лейкограммы оценивают морфологию лейкоцитов. Если в анализе крови не было выявлено отклонений от нормы количественного состава форменных элементов крови, а при подсчете 100 лейкоцитов не обнаружено никаких отклонений от нормы ни в лейкограмме, ни в морфологии лейкоцитов, то можно ограничиться подсчетом 100 клеток. Если при этом были выявлены какие-либо отклонения от нормы, то необходимо подсчитывать не менее 200 лейкоцитов.
Лейкограмма дает представление только об относительных величинах. Более объективное представление о составе лейкоцитов крови дает вычисление их абсолютного количества, т. е. содержание каждого вида лейкоцитов в определенном объеме крови.
Для подсчета эритроцитов и лейкоцитов крови, их дифферен- цировки можно пользоваться поточными автоматическими гематологическими цитометрами. Эти приборы позволяют определять гематокрит; количество эритроцитов; рассчитать среднее содержание гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации гемоглобина (г/л) к числу эритроцитов крови (МСН); среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации гемоглобина (г/л) к величине гематокрита (л/л) (МСНС); выделить различные группы клеточных элементов, отличающихся не только по размеру, но и по зернистости. Анализаторы типа БТКБ позволяют подсчитать общее количество лейкоцитов и построить их гистограмму, выделить лимфоциты, моноциты, эозинофилы, гра- нулоциты, а также нетипичные клетки (ядерные эритроциты, сгустки тромбоцитов, лимфобластов, гранулоцитов).
Различные фирмы выпускают автоматические гематологические анализаторы: Н6000, Н1 и Н2 (фирма «Technicon»), STKS («Coulter»), NE 8000 («TOA»), «Sysmex», Cell-Dyn 3000 («Abbott»), Codas Argoss 5DifF («Roche») и др.
Подсчет количества лейкоцитов требует применения в качестве антикоагулянта этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилона В), так как гепарин может интерферировать с лизирующими клетками реагента.
Клиническое значение показателей лейко- граммы. Процесс образования, развития и созревания клеток крови (гемопоэз — кроветворение) у человека и животных происходит в костном мозге, селезенке и в лимфатических узлах. В костном мозге образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зернистые лейкоциты (базофилы, сегментоядерные нейтрофилы); в лимфатических узлах и селезенке — лимфоциты.
При анализе лейкограммы учитывают количество зрелых клеток: базофилов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов. При ряде патологических состояний дают оценку незрелых, молодых форм эритроцитов и лейкоцитов (лимфобластов, промегакариоцитов, мегакариоци- тов, нормобластов, промиелоцитов, миелоцитов, мета-миелоцитов, пролимфоцитов).
Форменные элементы крови здоровых животных различных видов приведены на цветных рисунках I—IV. Нормальные величины количества различных видов лейкоцитов крови у взрослых здоровых животных представлены в таблице 5.
При оценке результатов исследования лейкоцитов учитывают общее их количество, наличие ядерного сдвига нейтрофилов, процентное соотношение лейкоцитов отдельных видов, наличие или отсутствие дегенеративных изменений в клетках.
5. Содержание лейкоцитов в крови здоровых животных различных видов (лейкограмма), %

Вид
животного
Эозино-
филы
Нейтрофилы Лимфо
циты
Моно
циты
Базофилы палочко
ядерные
сегменто
ядерные
Крупный рогатый скот 0,0-2,0 3-8 2-5 20-35 40-75 2-7
Лошадь 0,0-1,0 2-6 3-6 45-62 25-44 2-4
Свинья 0,3-0,8 4-12 3-6 25-35 40-50 2-5
Овца 0,0-1,0 1-4 2-4 40-48 40-50 2-6
Коза 0,0-0,2 2-8 5-20 20-40 40-70 2-5
Собака 0,0-1,0 3-9 1-6 43-72 21-40 1-5
Кошка 0,0-1,0 2-8 3-9 40-45 36-51 1-5
Курица 1,3-3,0 6-10 24-30 52-60 4-10
nbsp; nbsp; nbsp; nbsp; nbsp; nbsp; nbsp;

Появление в лейкограмме молодых и дегенеративных форм нейтрофилов (ядерный сдвиг нейтрофилов) — характерный признак, свойственный инфекционным и воспалительным процессам, злокачественным новообразованиям, различного рода интоксикациям. Различают регенеративный, дегенеративный и лейкемоид- ный ядерные сдвиги. При регенеративном сдвиге увеличивается содержание палочкоядерных и юных нейтрофилов, при дегенеративном — только палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов наряду с дегенеративными изменениями в клетках. Лейкемо- идный сдвиг характеризуется появлением более незрелых форм (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов и др.).
Регенеративный сдвиг наблюдается главным образом при воспалительных и гнойно-септических процессах. Дегенеративный сдвиг — показатель функционального угнетения костного мозга, встречается при интоксикациях (сальмонеллез, острый перитонит, уремическая и диабетическая кома). Лейкемоидные сдвиги являются обычно отражением своеобразной реактивности больного организма при самых различных заболеваниях.
Базофилы — клетки крови диаметром 8—14 мкм, в цитоплазме их имеются крупные базофильные гранулы, содержащие гепарин. Ядро базофилов крупное сегментированное, окрашивается в фиолетово-розовый цвет. Они участвуют в иммунологических реакциях аллергического типа и процессах свертывания крови. В крови встречаются в небольшом количестве.
Увеличение содержания базофилов наблюдается при хроническом миелолейкозе, гипофункции щитовидной железы. Уменьшение содержания базофилов учесть трудно из-за малого их количества в крови.
Эозинофилы — клетки крови размером 8—20 мкм. Отличаются обильной крупной розовой зернистостью, заполняющей всю цитоплазму. Обладают некоторой фагоцитарной и двигательной активностью, участвуют в аллергических реакциях.
Эозинофилия — увеличение содержания эозинофилов. Наблюдают при паразитарных заболеваниях (трихинеллезе, описторхозе, аскаридозе, эхинококкозе и др.), ревматизме, хроническом миелолейкозе, лимфогранулематозе и других злокачественных новообразованиях, ожоговой болезни, обморожении. Появление эозинофилов при воспалительных и гнойно-септических процессах на фоне лимфоцитоза и незначительного ядерного сдвига нейтрофилов является предвестником благоприятного исхода заболевания.
Эозинопения — уменьшение содержания эозинофилов. Отмечают при сепсисе, тяжелых интоксикациях, в агональном состоянии.
Нейтрофилы (палочкоядерные и сегментоядерные) — лейкоцитарные клетки размером 7—15 мкм, обладающие выраженной защитной функцией, связанной с их фагоцитарной и двигательной активностью, способностью вырабатывать бактерицидные (лизо- цим) и антитоксические вещества. Отличительный признак нейтрофилов — мелкая зернистость в цитоплазме. Ядро у молодых клеток не сегментировано и напоминает изогнутую 8-образной формы палочку (палочкоядерные нейтрофилы). В процессе созревания клеток ядро как бы перекручивается, образуя сегменты, соединенные тонкими нитями хроматина (сегментоядерные нейтрофилы). В окрашенных мазках крови цитоплазма нейтрофилов розово-серого цвета (слабооксифильная). Мелкая зернистость в цитоплазме у собак, кошек и свиней окрашивается в розово-фиолетовый цвет, у лошадей и жвачных она воспринимает кислые и основные красители.
Нейтрофилез (нейтрофилия) — увеличение содержания нейтрофилов (палочкоядерных, сегментоядерных). Отмечают при воспалительных процессах (пневмония, перитонит, пиелонефрит, септицемия, плеврит и др.), интоксикациях. Выраженный нейтро- фильный лейкоцитоз с обнаружением молодых форм нейтрофилов, вплоть до промиелоцитов и миелобластов (сдвиг ядра влево), наблюдается при острых пневмониях, тяжелых инфекциях, остром гемолизе. Появление в крови незрелых нейтрофилов (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов) отмечается при миелолейкозе и других злокачественных поражениях (гемобластозах).
Нейтропения — снижение содержания в крови нейтрофилов. Признак падения сопротивляемости организма к инфекциям, воздействия на организм ионизирующей радиации, цитостатических препаратов. Нейтропения обычно совпадает с лейкопенией.
Лимфоциты — клетки крови диаметром от 4,5 до 18 мкм с округлым или овальным ядром, окрашенным в светло-синий или голубой цвет, цитоплазмой с видимым перинуклеарным просветлением (характерный признак). Различают малые, средние и большие лимфоциты. По иммунологическим функциям выделяют Т- и В-лимфоциты.
Лимфоцитоз — увеличение содержания лимфоцитов. Характерный признак хронического лимфолейкоза. Незначительный лимфоцитоз бывает при пневмонии, роже свиней, остеомиелите, сепсисе и некоторых других болезнях и указывает на фазу выздоровления. Лимфоцитоз при агранулоцитозе или лимфатической лейкемоидной реакции — неблагоприятный признак, свидетельствующий о снижении микрофагоцитарной функции организма вследствие истощения гранулопоэза.
Лимфоцитопения — уменьшение содержания лимфоцитов. Встречают при некоторых тяжелых инфекциях, воспалительных и гнойно-септических заболеваниях, и в прогностическом отношении она является неблагоприятным симптомом.
Моноциты — самые крупные клетки (диаметр 10—20 мкм) нормальной крови с круглым ядром бобовидной или подковообразной формы. В патологических случаях ядро может быть сегментировано. Структура ядра нежная сетчатая, в окрашенных мазках бледно-фиолетового цвета, может содержать мелкую зернистость, ва

куоли, зерна пигмента и др. Моноциты фагоцитируют микробные тела, клеточные остатки, различные токсические продукты.
Моноцитоз — увеличение содержания моноцитов. Наблюдают при острых инфекционных заболеваниях, а также при туберкулезе, бруцеллезе, злокачественных опухолях и сепсисе.
Моноцитопения — уменьшение количества моноцитов. Бывает при тяжелых септических процессах и некоторых инфекционных болезнях.
Определение гематокрита с помощью микроцентрифуги. Оборудование: микроцентрифуга МЦГ-8; капиллярные трубки, имеющиеся в комплекте центрифуги (можно использовать капилляры для определения С-реактивного белка). Используют капиллярную или венозную кровь с ЭДТА или гепарином.
Ход определения. При взятии крови непосредственно от животного для предотвращения ее свертывания капилляры обрабатывают антикоагулянтом и высушивают. Если используют кровь с антикоагулянтом, то этого не делают. Заполняют капилляры на 7/8 длины кровью, закупоривают их с одного конца пластилином и помещают в ротор центрифуги так, чтобы закупоренные концы упирались в резиновую прокладку. Центрифугируют 5 мин при 8000 мин *. Определяют гематокритную величину по отсчетной шкале, приложенной к центрифуге.
Определение гематокрита с использованием пипеток Панченкова или градуированных. Оборудование: центрифуга; пипетки Панченкова или другие градуированные микропипетки.
Ход определения. В обработанную антикоагулянтом (или необработанную) пипетку Панченкова с отрезанным верхним концом набирают кровь точно до верхней метки, закупоривают ее, обтягивая резиновым кольцом, и центрифугируют 30 мин при 3000 мин . Для каждой центрифуги устанавливают определенное время работы. Вычитают из 100 высоту столбика эритроцитов и получают гематокритную величину в процентах.
Подобным методом определяют гематокрит в пипетках или пробирках иного типа.
Нормальные величины гематокрита у взрослых животных указаны в приложениях 6 и 7. У молодняка гематокрит ниже, чем у взрослых животных, и имеет некоторую возрастную динамику.
Клиническое значение. Гематокрит — соотношение объема плазмы и форменных элементов крови, выраженное в процентах по объему. Увеличение гематокритной величины отмечают при анемиях и кровопотерях, уменьшение — при сгущении крови. Для объективной оценки лабораторных показателей крови определение гематокрита обязательно.
Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) микрометодом Панченкова. Принцип метода основан на использовании свойств крови, смешанной с раствором цитрата натрия, не свертываться при стоянии, а разделяться на два слоя: нижний — эритроциты и верхний — плазму. Это расслоение происходит с различной скоростью в зависимости от изменения химических и физических свойств крови.
Р е а к т и »: 1,5%-ный раствор натрия цитрата трехзамещен- ного пятиводного. Раствор фильтруют, pH раствора нейтральный или слабощелочной. Реактив нестойкий, при помутнении раствор необходимо заменить.
Оборудование: пробирки размером 10 • 1 см; аппарат Панченкова, состоящий из штатива с гнездами и зажимами для специальных капиллярных пипеток с просветом канала 1 мм. На пипетках нанесена миллиметровая шкала длиной 10 см. Верхнее деление шкалы отмечено «0» и буквой «К» (кровь). Через каждые 10 делений стоят цифры 10, 20, 30 и т. д. до 100; против деления 50 — буква «Р» (реактив). Отверстия концов капиллярных пипеток, вставленных в прибор, герметически закрываются резиновыми прокладками или пробками, и кровь из пипетки не выливается. Капиллярные пипетки и пробирки должны быть хорошо промыты хромовой смесью.
Ход определения. В капиллярную пипетку, предварительно промытую раствором цитрата натрия, набирают этот раствор до метки «Р» и вводят в пробирки размером 10 • 1 см. Затем тем же капилляром набирают 2 раза кровь из ушной вены до метки «К» и вносят ее каждый раз в ту же пробирку. Хорошо смешивают, насасывают в капилляр до метки «0» и, заметив время, ставят в штатив. Через 1 ч отсчитывают по делениям капиллярной пипетки величину оставшегося столбика плазмы.
Расчет. Скорость оседания определяют за 1 ч. Для определения скорости оседания эритроцитов, гематокрита предложено несколько видов устройств. Фирма «Diesse Diagnostica Senese» (Италия) предлагает Vesmatic System — устройство одновременного определения СОЭ в 60 пробах по 1 мкл крови, содержащихся в пластиковых вакуумных пробирках VACUTEG. Фирма «Invitech Ltd» (Англия) выпускает прибор ESRPLUS, который способен определять одновременно в трех пробах капиллярной крови объемом

  1. мкл каждая СОЭ, гематокрит, содержание общего билирубина, а также оценивать наличие липемии и гемолиза. Во всех случаях свежую капиллярную кровь исследуют непосредственно после взятия, венозную стабильную — в течение 12 ч при 2—8 °С.

Клиническое значение. Склеиванию эритроцитов крови препятствует их отрицательный заряд, вследствие чего они отталкиваются друг от друга. Ускорению оседания эритроцитов способствуют глобулины, фибриноген, мукополисахариды, содержание которых увеличивается при многих воспалительных процессах, инфекциях, злокачественных опухолях, нефрите и др.
При вертикальном положении пипетки Панченкова у здоровых животных СОЭ равна (мм/ч): крупный рогатый скот 0,5—1,5; овцы, козы 0,5—1,0; лошади 40—70; свиньи 2—9; собаки 2—6; куры 2—3.
Замедление СОЭ отмечается при диарее (тяжелой форме диспепсии молодняка), обильном потении, полиурии, механической и паренхиматозной желтухах, непроходимостях кишечника. Повышение СОЭ наблюдается при большинстве воспалительных процессов, инфекциях, злокачественных опухолях, коллагенозах, нефрите, анемиях.
Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидиым методом. Принцип. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Кровь с антикоагулянтом хранят в течение 24 ч при

  1. 8 “С, 8 ч при комнатной температуре — 15—20 °С.

Реактивы: заводской набор реактивов;
трансформирующий раствор (ацетонциангидрин 0,5 мл, калий железосинеродистый 200 мг, натрий двууглекислый 1 г, дистиллированная вода до 1л); стабилен при хранении в посуде из темного стекла в течение 3 мес, при появлении осадка или обесцвечивании раствор к употреблению не пригоден;
стандартный раствор гемиглобинцианида, соответствующий концентрации гемоглобина крови 15 г% при разведении крови в 251 раз.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; пипетки на 0,02 мл; колба мерная на 1 л.
Ход определения. В пробирку вносят 5 мл трансформирующего раствора и 0,02 мл крови (разведение в 251 раз), хорошо перемешивают, оставляют на 10 мин, после чего смесь измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Стандартный раствор измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.
Расчет гемоглобина (г%)проводят по формуле НЬ = Еоп/Ест х 15,
где ?0п — экстинкция опытной пробы; ^ет — экстинкция стандартного раствора; 15 — соответствие стандартного раствора концентрации гемоглобина крови при ее разведении в 251 раз.
Для перевода г% в г/л найденное число умножают на 10.
Метод Сали, предложенный еще в 1895 г., неточен и им в настоящее время пользоваться не рекомендуется.
Определение гемоглобина в крови возможно с помощью бумажных полосок, помещенных на пластиковых подложках в отражательные фотометры, выпускаемых фирмами «Эймс» (США) и др. Исследуемую пробу наносят на реакционную зону диагностической полоски и помещают в прибор, в котором она облучается полихроматическим светом, диффузионно отраженный свет собирается на измерительной системе и после прохождения через интерферирую

щий фильтр измеряется, затем его сравнивают со стандартом. Система контролируется микропроцессором.
Клиническое значение. Гемоглобин — дыхательный пигмент крови, состоит из белка глобина и простетической группы — гема. Глобин по строению близок к альбумину, синтезируется в печени, представляет хелатный комплекс протопарферина с двухвалентным железом.
Основная функция гемоглобина — перенос кислорода от легких к тканям. Гемоглобин участвует в транспорте углекислого газа из тканей в легкие, в поддержании кислотно-основного равновесия в организме, т. е. обладает буферными свойствами. Он способен соединяться с оксидом углерода, образуя карбоксигемоглобин, а также с некоторыми химическими веществами с образованием метге- моглобина. Эти соединения не способны переносить кислород от легких к тканям.
Нормативы содержания гемоглобина у животных приведены в приложениях 5—7.
Снижение количества гемоглобина отмечается при дефицитных анемиях вследствие недостатка железа, меди, кобальта, витамина В12, фолиевой кислоты, белков и других веществ, при хронических интоксикациях, гепатите, гепатозе и других болезнях печени, кето- зе, расстройствах желудочно-кишечного тракта, инфекционных и инвазионных болезнях и других заболеваниях. Умеренное снижение гемоглобина отмечают при алиментарной (железодефицитной) анемии, более выраженное — при массовой кровопотере, гемолитической и гипопластической анемии.
Следует отметить, что снижение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов не всегда протекает параллельно. Чаще количество гемоглобина уменьшается резче, чем число эритроцитов в крови. Однако при ряде заболеваний могут возникать противоположные сдвиги, поэтому необходимо одновременно определять цветовой показатель.
Повышение уровня гемоглобина отмечают при сгущении крови (диарея, обильное потоотделение), непроходимости кишечника, сильной мышечной нагрузке, нахождении животных на высоте 1400 м и выше над уровнем моря.
Определение цветового (цветного) показателя. Цветовой показатель — среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Он характеризует степень насыщения эритроцитов гемоглобином по сравнению с нормой. Цветовой показатель вычисляют путем деления концентрации гемоглобина в 1 мкл крови, выраженной в пикограммах (пк), на число эритроцитов в том же объеме крови.
Цветовой показатель определяют по формуле
х = ЗНв (г/л)
Три первые цифры количества эритроцитов в 1 мкл’
Например, в 1 мкл крови содержится 4 500 ООО эритроцитов, концентрация гемоглобина 120 г/л. В этом случае цветовой показатель будет равен 3 • 120/450 = 0,8.
В норме цветовой показатель равен 1 или близок к ней. Снижение его до 0,8 и ниже (гипохромия) свидетельствует о слабом насыщении эритроцитов гемоглобином, что отмечается при железодефицитной анемии. Увеличение цветового показателя выше 1 (гиперхромия) отмечается при В^- и фолиеводефицитных, ги- попластических анемиях. При острых кровотечениях, хронических лейкозах, некоторых гемолитических анемиях отмечается нор- мохромная анемия, при которой цветовой показатель близок к 1.

источник

Читайте также:  Как зашифрованы лейкоциты в анализе крови